器官移植與配型

1、關(guān)于器官移植和配型第一張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 器官移植與HLA分型檢測技術(shù)第二張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月major histocompatibility complex, MHC主要組織相容性復(fù)合體人類白細(xì)胞抗原h(huán)uman leukocyte antigen, HLA/ HLA復(fù)合體/ MHC分子/ MHC抗原第三張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 HLA的結(jié)構(gòu)HLA-類分子HLA-類分子第四張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月公元4世紀(jì)羅馬教堂第五張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月自體移植同種同基因移植同種異基因移植異種移植移植物抗原

2、刺激受者的免疫系統(tǒng)/受者組織抗原刺激移植物中的免疫細(xì)胞誘發(fā)的免疫應(yīng)答稱為移植排斥反應(yīng)同種異型移植排斥反應(yīng)第六張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第1節(jié) MHC基因和遺傳特點（復(fù)習(xí)）MHC基因的構(gòu)成MHC基因的特性MHC基因的意義第七張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月一、MHC基因的構(gòu)成（一）定位 第6號染色體短臂（6p21.31） 全長3600kb，共有224個基因座位，128個表達(dá)產(chǎn)物。（二）基因區(qū) 經(jīng)典類基因：B、C、A位點 經(jīng)典類基因 ：DP、DQ、DR位點第八張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月類基因區(qū)HLA復(fù)合體3600kb長度224基因座位類基因區(qū)ACBDRDQ

3、DP著絲點Pq人6號染色體MHC-類分子MHC-類分子第九張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月DPDQDRBCA第十張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月二、MHC基因遺傳特點（一）HLA為高度多態(tài)性基因 MHC基因復(fù)合體是由多個位置相鄰的基因座位組成，可以編碼相同或相似的MHC抗原。第十一張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月MHC為共顯性表達(dá)第十二張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月類基因類基因DPDQDRBCA2496281062抗原特異性5593812412623506276851等位基因數(shù)DRBDRADQBDQADPBDPAACB類基因類基因基因型別第十三張，PP

4、T共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月2496281062抗原特異性5593812412623506276851等位基因數(shù)DRBDRADQBDQADPBDPAACB類基因類基因基因型別人群之中所有基因座位等位基因都相同的幾率： 126238124559385127650611019 人群之中MHC抗原相同的幾率： 69246210281109 第十四張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）單體型和連鎖不平衡性意義：器官移植選擇供體順序自身同卵雙生兄弟姐妹父母親屬無關(guān)人群父母與子女完全相同的幾率：父母與子女一半相同的幾率：子女間完全相同的幾率：子女間一半相同的幾率：子女間完全不同的幾率： 0

5、100% 25% 50% 25%1.單體型遺傳第十五張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1.單體型遺傳（二）單體型和連鎖不平衡性2.連鎖不平衡性（一）HLA為高度多態(tài)性基因第十六張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第2節(jié) HLA與器官移植第十七張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 在三類HLA分子中，、類分子是觸發(fā)移植排斥反應(yīng)的首要抗原。次要組織相容性抗原ABO血型抗原系統(tǒng)其他組織特異性抗原主要組織相容性抗原 決定移植“成敗”的抗原第十八張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 一、器官移植的類型 （1）自體移植（autograft） 皮膚，骨髓，軟骨和骨（2）同種同基因移

6、植（syngraft） （3）同種異基因移植（allograft） 同種異型移植（4）異種移植（xenograft）第十九張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月一、同種異型排斥反應(yīng)的識別機(jī)制受者對T細(xì)胞對供者的MHC分子的直接與間接識別。（一）直接識別機(jī)制：第二十張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月直接識別受者T細(xì)胞第二十一張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月受者T細(xì)胞直接識別的靶結(jié)構(gòu) 第二十二張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月同種異型抗原的直接識別及其效應(yīng) 第二十三張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）間接識別受者T細(xì)胞識別受者APC加工處理的供者的MHC分

7、子在急性排斥反應(yīng)中、晚期以及慢性排斥反應(yīng)中起重要作用。第二十四張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月識別方式間接識別第二十五張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月 同種異型抗原的間接識別 第二十六張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第二十七張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月二、 同種異型移植排斥反應(yīng)的類型及效應(yīng)機(jī)制（一）宿主抗移植物反應(yīng)（host versus graft reaction,HVGR）依據(jù)反應(yīng)發(fā)生的時間及病理強(qiáng)度分為：1、超急性排斥反應(yīng)（術(shù)后開始至幾個小時）2、急性排斥反應(yīng)（術(shù)后幾天至幾周）3、慢性排斥反應(yīng)（術(shù)后數(shù)月至數(shù)年）第二十八張，PPT共五十八頁，創(chuàng)

8、作于2022年6月 超急性排斥反應(yīng)發(fā)生示意圖 第二十九張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）移植物抗宿主反應(yīng)（ graft versus host reaction,GVHR ）更為嚴(yán)重的一種排斥反應(yīng)原因： （1）受者與供者HLA不相匹配； （2）移植物中成熟的T細(xì)胞多； （3）受者處于免疫功能極度低下的狀態(tài)常見于：骨髓移植（造血干細(xì)胞移植）、胸腺、脾移植及新生兒接受大量輸血。第三十張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月三、同種異體移植排斥反應(yīng)的防治（一）尋求與受者M(jìn)HC相配的供者組織或器官 是目前最為有效多見的方法。1、ABO血型抗原配型 2、HLA抗原配型供者與受者HLA-A

9、、B相配的位點越多存活率越高； 上述的基礎(chǔ)上，HLA-DR、DQ盡可能的匹配； HLA-DR類型對存活率影響較大。第三十一張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）使用免疫抑制藥物 1、多為抑制T細(xì)胞藥物 環(huán)孢菌素A（CsA）， FK-506、Rapamycin 2、去氧精胍菌素等抗生素類；阻斷T細(xì)胞的生長周期 3、激素 4、可溶性CK受體、抗CK抗體和抗粘附分子抗體 第三十二張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月阻斷協(xié)同刺激信號誘導(dǎo)T細(xì)胞失能 第三十三張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）誘導(dǎo)對移植抗原的特異性耐受 免疫抑制劑的毒副作用（致死性感染和腫瘤） 理想方法是誘導(dǎo)

10、特異性耐受。新方案：誘導(dǎo)凋亡；誘導(dǎo)T細(xì)胞無應(yīng)答（anergy）包括輸入可溶性CTLA-4及CD40L-CD40、CD2-CD58等信息傳遞阻斷。第三十四張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第3節(jié) HLA分型檢測技術(shù)分子生物學(xué)分型血清學(xué)分型技術(shù)細(xì)胞分型技術(shù)20世紀(jì)60 年代20世紀(jì)80 年代20世紀(jì)70 年代第三十五張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月一、血清學(xué)分型技術(shù)1.原理 應(yīng)用一系列已知HLA特異性的分型血清與待測的淋巴細(xì)胞反應(yīng)，通過補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性實驗，來檢測HLA抗原特異性。典型技術(shù)：定型板法（微量細(xì)胞毒實驗）第三十六張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月反應(yīng)結(jié)果測定

11、1.染料拒染法臺盼藍(lán)伊紅碘化丙啶7-AAD2.流式細(xì)胞術(shù)第三十七張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月死（著染）細(xì)胞（%）記分結(jié)果判斷0101陰性11202可疑陰性21504弱陽性51806陽性808強(qiáng)陽性0未試驗或不能讀數(shù)染料拒染法的判定標(biāo)準(zhǔn)第三十八張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十九張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月2.血清學(xué)分型可檢測的抗原 （SD 抗原）HLA-類分子:HLA-類分子:B, C , ADR, DQ （B細(xì)胞為靶細(xì)胞）第四十張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月3.方法學(xué)評價操作簡便易行節(jié)約試劑、結(jié)果可靠、重復(fù)性好 無需特殊設(shè)備耗時長不同批號

12、抗血清結(jié)果常有不同優(yōu)點缺點第四十一張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月二、細(xì)胞學(xué)分型技術(shù)（LD 抗原）1.原理混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，檢測細(xì)胞增殖（mixed lymphocyte culture,MLC）單向MLC雙向MLC第四十二張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月陰性分型法 陽性分型法 1. 單向MLC刺激細(xì)胞：已知HLA型別的分型細(xì)胞 （預(yù)處理，使其失去增殖能力）反應(yīng)細(xì)胞：受檢者外周血單個核細(xì)胞 （具有增殖能力）淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化（形態(tài)學(xué)）3H-TdR 摻入法MTT還原法第四十三張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（1）陰性分型法 刺激細(xì)胞 HLA-DP1受者T淋巴細(xì)胞 +增殖弱

13、HLA-DP1非HLA-DP1 增殖強(qiáng) 純合子細(xì)胞只表達(dá)HLA-DP1 照射處理第四十四張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（2）陽性分型法 預(yù)致T敏細(xì)胞 非HLA-DP1待測B淋巴細(xì)胞 +增殖弱非HLA-DP1HLA-DP1 增殖強(qiáng) 刺激細(xì)胞 HLA-DP1 除DP抗原外，其他 HLA 抗原相同照射處理第四十五張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 雙向MLC 遺傳型不同的兩個個體淋巴細(xì)胞在體外混合培養(yǎng)時，由于兩者HLA不同，能相互刺激導(dǎo)致對方淋巴細(xì)胞增殖，故稱雙向MLC。方法學(xué)評價： 不能分型，但可全面地反應(yīng)供-受雙方組織相容性。第四十六張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年

14、6月三、分子生物學(xué)分型技術(shù)(一）基本技術(shù)1.限制性片斷長度多態(tài)性分析（restriction fragment length polymorphism, RFLP）2.PCR/SSP3.PCR-SSCP分型法4.序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-sequence specific oligonucleotide, PCR-SSO）5.基于序列的HLA分型法（sequence-based HLA typing,SBT） 第四十七張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月芯片技術(shù)原理：PCR-SSO反向斑點或印漬法的微型化。(二）集成技術(shù)第四十八張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月（

15、三）PCR-SSCP分型法原理：對ssDNA進(jìn)行無變性劑的聚丙烯酰凝膠電泳，序列的差異可形成不同的空間構(gòu)象而導(dǎo)致電泳遷移率的差異，如此可分辨出單一堿基的差異和檢測出DNA多態(tài)性或點突變。（單鏈非變性電泳遷移分析）第四十九張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月病例介紹一例鏈球群感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植。男，14歲。首診前3個月，感冒發(fā)燒病史。首次就診原因:頭痛，乏力，眼瞼浮腫。實驗室檢查：蛋白尿，尿紅細(xì)胞陽性。抗炎癥治療1周，稍好，恢復(fù)上學(xué)，正常飲食。2月后，惡心、乏力，眼瞼浮腫加重，24小時尿量減少，蛋白管型。住院治療2個月，腎臟衰竭加重，每周透析3到4次?；顧z見腎小球內(nèi)CIC沉淀，抗

16、人IgA、IgG陽性。建議：申請腎移植手術(shù)。親屬自愿做HLA配型，同時申請自無關(guān)人群尋找供體腎。第五十張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月半年后分配到合適供體腎（無關(guān)人群）；檢查身體，符合手術(shù)要求，進(jìn)行腎臟移植手術(shù)。術(shù)后臨床觀察并服用移植排斥抑制藥物，補(bǔ)充EPO。定期到醫(yī)院檢測血藥濃度，檢測免疫功能。（移植后8年后生存狀態(tài)良好，但長期服用抗移植排斥藥物。病例介紹一例鏈球群感染后腎炎、腎衰竭后腎臟移植。第五十一張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月腎臟移植前選擇供者的檢查項目： 傳染性疾病病原學(xué)檢查 ABO血型配型 HLA配型符合要求 供受雙方淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)陰性腎源選擇的原則： 以A

17、BO血型完全相同者為好，選擇最佳HLA配型的供者器官，供者無傳染性疾病。第五十二張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月移植后的臨床觀測:1.T細(xì)胞總數(shù)、CD4/CD8比值、IL-2及其受體的檢測，判斷排斥反應(yīng)的發(fā)生和評估免疫抑制劑治療效果；2.必要時做腎組織活檢；3.血藥濃度檢測，指導(dǎo)合理用藥，減肝、臟腎毒性和免疫抑制。第五十三張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月1.ABO血型抗原一致2.HLA配型 主要做HLA-DR、A、B3.混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)：陰性4.受者血清細(xì)胞毒性實驗：陰性 受者血清+供者細(xì)胞移植前免疫學(xué)檢測第五十四張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月HLA匹配與移植排斥反應(yīng)02040608010006122436術(shù)后時間存活率供者與受者相差一個HLA基因供者與受者相差兩個HLA基因第五十五張，PPT共五十八頁，創(chuàng)作于2022年6月3位點6個基因均匹配時，移植腎的10年存活率為62