微生物培養(yǎng)基的制備及接種

1、微生物培養(yǎng)基的制備及接種宿舍：628成員：黃朋朋、李廳、王沖、馬浩、王萌、王錦樓一、實驗原理：牛肉膏蛋白培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基含一般細菌生長繁殖所需要的最基本營養(yǎng)物質(zhì)，培養(yǎng)基含有碳源、氮源、磷酸鹽、維生素、生長因子等。在配制固體培養(yǎng)基時還要加入一定量瓊脂作凝固劑。多用于培養(yǎng)細菌因此要用烯酸和稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁殖。二、實驗器材：1、試劑：牛肉膏1.8g、蛋白胨6g、食鹽llg、瓊脂12g、水600ml、1mol/LNaOH、1mol/LHCl2、儀器或其他用具：試管56/個、1000ml大燒杯/個、三角瓶、量筒、玻璃棒、培養(yǎng)基分裝

2、器、分析天平、牛角匙、pH試紙、牛皮紙、記號紙、麻繩、紗布、培養(yǎng)皿、高壓式蒸汽滅菌鍋等。3、菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌菌種。三、實驗步驟：1、稱量按培養(yǎng)基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后倒入燒杯。也可放在稱量紙上，稱量后直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然后立即取出紙片。蛋白胨很易吸潮，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈、擦干，再稱取另一藥品，瓶蓋也不要蓋錯。2、溶解：在上述燒杯中可先加入少于所需要的水量，用玻璃棒攪勻然后，在石

3、棉網(wǎng)上加熱使其溶解。待藥品完全溶解后，補充水分到所需的總體積。配制固體培養(yǎng)基,將稱好的瓊脂放入已溶化的藥品中，再加熱溶化，在瓊脂溶化的過程中，需不斷攪拌,以防瓊脂糊底使燒杯破裂。最后補足所失的水分。3、調(diào)pH：在未調(diào)pH前,先用精密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH值，如果pH偏酸,用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入lmol/LNaOH,邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH值，直至pH達7.6。反之，則用lmol/LHCl進行調(diào)節(jié)。注意pH值不要調(diào)過頭，以避免回調(diào),否則,將會影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。4、分裝：按實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi),每試管l0ml。如圖：注：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管

4、口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。裝量不超過管高的1/5，滅菌后制成斜面。5、加棉塞培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能。如圖：6、包扎：加塞后，將全部試管用麻繩捆扎好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。7、滅菌：將培養(yǎng)基放入高壓蒸汽滅菌鍋后，加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)，采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋，使蒸氣鍋密閉，勿使漏氣。加熱，0.103Mpa,121C并維持壓力至所需時間20min,取出。7、倒置斜面：將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50C左右，將試管棉塞端擱在玻棒上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。如圖：8、無菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37C的溫室中培養(yǎng)2448小時，以檢查滅菌是否徹底。9、無菌接種如圖：注意：以上操作必須在無菌的環(huán)境下進行即酒精燈的火焰輻射范圍內(nèi)用接種環(huán)應(yīng)充分灼燒挑取少量菌種在試管斜面上輕