HPLC法檢測面條中的乙二胺四乙酸二鈉

1、HPLC法檢測面條中的乙二胺四乙酸二鈉作者：許秦，劉依涵來源：現(xiàn)代食品2018年第21期摘要：采用高效液相色譜法檢測面條中乙二胺四乙酸二鈉。試樣通過水提取，加入FeCl3衍生化成穩(wěn)定的絡合物，采用DAD檢測器檢測，外標法定量。結果表明，乙二胺四乙酸二鈉的絡合物質(zhì)量濃度為2.080.0ugmL-1，相關系數(shù)為1.0000,加標回收率為92.48%98.02%,RSD為0.065%。該方法簡便快捷，靈敏度高，精確度和精密度好，適合面條中乙二胺四乙酸二鈉的含量檢測。關鍵詞：高效液相色譜法；乙二胺四乙酸二鈉；面條乙二胺四乙酸二鈉是食品安全國家標準GB2760-2014食品添加劑使用標準中允許使用的添加

2、劑，有防腐、穩(wěn)定、抗氧化、凝固的作用，可以被用于飲料制品、乳制品、醬腌菜、罐頭及果脯等食品中。若不按規(guī)定或超限量使用乙二胺四乙酸二鈉，就會影響人的身體健康，導致人體中微量元素的流失，對上呼吸道、眼睛、黏膜產(chǎn)生影響，可引起嘔吐、腹瀉、和急腹痛等癥狀，還可引起暫時性的腎臟功能障礙或血壓下降。我國食品安全標準中規(guī)定了乙二胺四乙酸二鈉作為食品中添加劑的使用規(guī)則、允許使用的食品種類和允許使用量的范圍及殘留量，但面條中不允許添加乙二胺四乙酸二鈉1。在實際的食品監(jiān)管中發(fā)現(xiàn)，乙二胺四乙酸二鈉能降低面粉中多酚氧化酶的活性，延緩面條酶促褐變的過程，減少對面條感官品質(zhì)和營養(yǎng)成分的影響。因此，一些面條商販為了使面條的

3、外觀好看、勁道和口感好，存在超限量使用乙二胺四乙酸二鈉的情況。目前，國內(nèi)外有很多快速高效檢測乙二胺四乙酸二鈉的相關文獻，主要的檢測方法有HPLC法、LC-MS法、氣相色譜法、分光光度法、毛細管電泳法、離子色譜法等2-7。我國關于檢測食品中乙二胺四乙酸二鈉的標準有SN/T3855-2014和GB5009.249-2016等，適用于飲料、果脯、醬腌菜和鐵強化醬油等食品的檢測，沒有面條中乙二胺四乙酸二鈉的檢測方法8。本文擬建立一種快速高效檢測面條中乙二胺四乙酸二鈉的方法，為實際的食品監(jiān)管工作中乙二胺四乙酸二鈉含量的測定提供一定的技術參考。實驗部分儀器與試劑賽默飛Ultimate3000高效液相色譜儀

4、（配備DAD檢測器）、AL104電子天平（梅特勒-托利多）、ALLEGRAX-30R離心機（美國貝克曼庫爾特有限公司）、KQ5200DB超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）。乙二胺四乙酸二鈉標準品（購于StanfordChemicals公司）、鹽酸（GR）、甲醇（色譜純）、三氯甲烷（色譜純）、三氯化鐵（AR）、抗壞血酸（AR）、乙酸鈉（AR）、四丁基溴化銨（AR），試驗用水均為去離子水；超市購買2種面條。實驗方法1.2.10.02molL-1三氯化鐵溶液的配制準確稱取0.5406gFeCl36H20，溶解于90mL水中，加入0.03mL鹽酸，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度，混勻。標準溶液

5、的配制準確稱取乙二胺四乙酸二鈉標準品0.10040g至50mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，得2.008mgmL-l的乙二胺四乙酸二鈉標準儲備液。準確吸取乙二胺四乙酸二鈉儲備液0.05、0.1、0.25、0.5、1.0mL和2.0mL于含有20mg抗壞血酸的50mL容量瓶中，加入適量水和1mLFeCl3溶液，超聲15min，冷卻至室溫后，用水定容至刻度，即得含乙二胺四乙酸二鈉2.008、4.016、10.04、20.0840.16ugmLT和80.32ugmL-1的系列標準溶液。樣品前處理及衍生化準確稱取粉碎過的樣品5g（精確到0.01g）于50mL已具有20mg抗壞血酸的離心管中,加入15

6、mL水，渦旋2min，4500rminT離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，15mL水重復提取1次，合并提取液于50mL容量瓶中。向提取液中加入1.0mLFeCl3溶液超聲20min，冷卻至室溫后定容至刻度，混勻后過0.45um濾膜，濾液備用。色譜條件色譜柱：WatersSunfireC184.6X150mm，5um；流速：1.0mLminT，柱溫：30C，流動相為甲醇：水（含有0.02molL-1四丁基溴化胺和0.03molL-1乙酸鈉緩沖溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH=4）=1:4。進樣量：20uL，檢測波長為254nm。結果與分析2.1檢測波長和絡合劑的選擇乙二胺四乙酸二鈉能夠與大多數(shù)金

7、屬離子形成穩(wěn)定的絡合物，且優(yōu)先與穩(wěn)定常數(shù)大的金屬離子進行絡合。乙二胺四乙酸二鈉與三價鐵離子絡合化合物的穩(wěn)定常數(shù)大于與二價銅離子絡合化合物的穩(wěn)定常數(shù)，因此選用FeCl3作為絡合劑。對其絡合物在190400nm進行全波長掃描，最大吸收波長在250nm附近（見圖1），因此本方法采用254nm波長檢測。2.2流動相的選擇據(jù)相關的檢測標準，乙二胺四乙酸二鈉檢測流動相有兩種：SN/T3855-2014出口食品中乙二胺四乙酸二鈉的測定中所用的流動相，為0.075molL-1的磷酸二氫鉀（pH=2.3）-甲醇（90:10,V/V）。SN/T1018-2001出口食品罐頭中乙二胺四乙酸二鈉的測定方法中所用的四丁

8、基溴化胺-乙酸鈉混合溶液（pH=4.0）-甲醇（80:20,V/V）。高效液相色譜法測定腌漬蔬菜罐頭中乙二胺四乙酸二鈉的含量中，對兩種流動相的研究表明四丁基溴化胺-乙酸鈉混合溶液作為流動相時，檢測更佳9-11。因此本實驗選擇四丁基溴化胺-乙酸鈉混合溶液作為流動相。在該實驗條件下，乙二胺四乙酸二鈉絡合物峰型良好（見圖2），滿足實驗2.3線性范圍在該確定的實驗條件下，以乙二胺四乙酸二鈉絡合物的濃度為橫坐標，其峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。結果表明當絡合物的質(zhì)量濃度2.080.0ugmL-1時呈現(xiàn)良好的線性關系,相關系數(shù)為1.0000（見圖3），回歸方程為y=0.4748x-0.0356。cJO.f

9、lTB-.UD4.a岡旱二二胺田乙戢二料盜合栩標;也曲線囹樣品前處理SN/T3855-2014出口食品中乙二胺四乙酸二鈉的測定中在提取時均需要加入三氯甲烷，衍生化后也需要加入三氯甲烷進行凈化12-13。加入三氯甲烷的原因是為了除去色素、脂肪等雜質(zhì)的干擾，但由于面條中雜質(zhì)較少，結果顯示面條樣品中加入三氯甲烷進行除雜質(zhì)和凈化和不加三氯甲烷，不會在色譜圖上產(chǎn)生明顯差異（見圖4和圖5）。在樣品中均未檢測到乙二胺四乙酸二鈉。方法的加標回收率前處理方法按加三氯甲烷和不加氯甲烷兩種，以不含乙二胺四乙酸二鈉的面條為樣品，做個添加水平，每個添加水平平行測定6次，檢測方法的回收率。1m結果表明前處理方法加三氯甲烷和不加三氯甲烷的加標回收率也無太大差異，見表1、表2。因此，對于面條樣品的處理，可以不加三氯甲烷除雜質(zhì)和凈化。2.6檢出限與定量限向空白面條粉末基質(zhì)中標準品，以3倍信噪比（S/N=3）確定檢出限（LOD）為3.34mgkg-1；以10倍信噪比（S/N=10）確定定量限（LOQ）為11.15mgkg-1。2.7精密度稱取5g面條樣品，加入0.5mL2.008mgmL-1的標準儲備液，平行測定6次，測得RSD為0.065%，表明該方法重復性良好，準確可靠，滿足實驗需求。3結論本文建立了面