抗核抗體基本概念及對應臨床疾病概述課件

1、抗核抗體基本概念及臨床檢測傳統(tǒng)定義 針對細胞核成分的自身抗體的總稱。廣義定義 針對細胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對ANA的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗體的總稱 靶抗原存在于包括細胞核、細胞漿、細胞骨架、細胞分裂結(jié)構(gòu)等部位抗核抗體的定義ANA可見于多種疾病，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組織病的診斷、病情判斷和療效觀察的指標在非結(jié)締組織病中也可出現(xiàn)陽性。正常人中（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽性，但滴度低，并且常表現(xiàn)為IgM型高滴度ANA則高度提示自身免疫性疾病 目前，ANA檢測已成為臨床上的一個極重要的自身免疫病的篩查實驗。ANA檢測的臨床意義系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動期非活動期藥物誘導

2、的紅斑狼瘡混合性結(jié)締組織?。∕CTD、Sharp綜合征）類風濕性關節(jié)炎進行性系統(tǒng)性硬化癥多發(fā)性肌炎及皮肌炎干燥綜合征慢性活動性肝炎潰瘍性結(jié)腸炎其它風濕病正常人 9510080100100100204020508595305070803040265-10ANA檢測的臨床意義ANA實驗室檢測策略推薦ANA間接免疫熒光法篩查實驗間接免疫熒光法檢測ANA基本原理間接免疫熒光法 包被HEp-2細胞的基質(zhì)玻片樣本中ANA-IgGFITC標記的抗人IgG抗體抗原譜完整 (細胞核、細胞漿中近百種自身抗原)人源細胞，無種屬非特異熒光干擾腫瘤細胞，易于培養(yǎng)及商品化生產(chǎn)核質(zhì)比大，可觀察到多種不同熒光核型ANA篩查的

3、經(jīng)典和標準基質(zhì): HEp-2均質(zhì)型核點型著絲點型核仁型Scl-70粗顆粒型細顆粒型核膜型.核糖體P蛋白線粒體型高爾基體溶酶體肌動蛋白波形蛋白基于Hep-2細胞為基質(zhì)的ANA初篩實驗ANA間接免疫熒光法篩查試驗的實際價值初步甄別自身免疫性疾病患者（陰陽性結(jié)果）盡可能判斷熒光核型（縮小靶抗原確認實驗范圍）獲取抗體滴度信息（判斷病情進展、預后等）考慮到熒光法篩查試驗存在主觀性強的特點，因此應以一種客觀和現(xiàn)實的態(tài)度去面對篩查試驗結(jié)果幾個相對常見且重要的熒光核型均質(zhì)型核點型著絲點型核仁型粗顆粒型核膜型.核糖體P蛋白線粒體型肌動蛋白常見且重要核型的標準核型表現(xiàn)相對典型陽性率相對較高靶抗原相對明確應重視AN

4、A滴度的檢測抗體滴度的臨床意義1、明確界定自身免疫性疾病患者；2、作為疾病進程、臨床療效和病情預后及轉(zhuǎn)歸等的判斷指標當前國際主流ANA間接免疫熒光法檢測系統(tǒng)廣泛采用的起始稀釋度為1:40。即該檢測系統(tǒng)的正常參考范圍為1:40。梯度稀釋時的稀釋因子為1:2。HOB公司產(chǎn)品推薦按照1:80開展稀釋。 熒光強弱及血清稀釋度熒光強弱判讀 觀察標本的特異性熒光強度一般用“+”號表示?！啊睘闊o或僅見極微弱熒光；“+”為熒光較弱但清楚可見；“+”為熒光明亮；“+”為耀眼的強熒光。臨床上根據(jù)特異性熒光強度達“+”以上判定為陽性抗體梯度稀釋起始稀釋：1:80梯度稀釋（稀釋因子2）1:1601:3201:6401

5、:12801:2560直至抗體轉(zhuǎn)陰各稀釋度的反應性抗體滴度臨床意義1:801:640陽性+1:80陽性，需結(jié)合臨床表現(xiàn)綜合判斷陽性+1:160陽性，提示可能存在相關疾病陽性+弱+1:320明確陽性，提示可能存在相關疾病陽性+陽性+1:640中等陽性，提示可能存在相關疾病陽性+陽性+1:1280強陽性，高度提示存在相關疾病陽性+陽性+1:2560極強的陽性，高度提示存在相關疾病。ANA熒光滴度判讀舉例HOB公司間接免疫熒光法產(chǎn)品系列產(chǎn)品系列基質(zhì)檢測項目ANA篩查HEp-2細胞ANA各種不同核型dsDNA綠蠅短膜蟲抗dsDNA抗體AKA大鼠食管抗角蛋白抗體ANCA中性粒細胞乙醇和甲醛固定抗中性粒細

6、胞胞漿抗體組織器官大鼠肝/腎/胃ASMAPCAAMALKM-1LC-1HEp-2細胞產(chǎn)品系列 （舉例）166孔1010孔812孔ANA靶抗原確認實驗條帶酶免分析法檢測ANA基本原理LIA檢測方法原理底物顏色反應硝酸纖維膜IgG抗體堿性磷酸酶標記的抗人IgG抗體ANA譜系列U1-nRNP 和 Sm抗原SLE: 5-30%SLE: 15-40%MCTD: 95-100%功能:參與mRNA前體的剪切SS-A (Ro-60), Ro-52 和SS-BAnti-SS-A (60 kDa)干燥綜合征.:40-95%SLE: 20-60%新生兒狼瘡: 96%Anti-SS-B干燥綜合征.:40-95%SLE

7、: 10-20%新生兒狼瘡: 78%Anti-Ro-52 (52 kDa)非特異功能: 調(diào)控RNA翻譯功能:RNA聚合酶III輔助蛋白XScl-70 (DNA-拓撲異構(gòu)酶I)功能: 在DNA復制和轉(zhuǎn)錄過程中完成雙鏈解螺旋疾病:硬化癥: 50% - 75%Anti-Scl-70 特點局限型和彌散型硬化癥病中的陽性率分別為10% 和48%?？筍cl-70抗體陽性的患者通常病情發(fā)展快、預后差、多器官累及。PM-Scl抗原: 幾種多肽復合物(分子量間于20-100kDa)，主要的靶抗原為100 kDa 相關疾病: 硬化癥:2% - 5% 肌炎:8%重疊綜合征:24%Jo-1抗原:組氨酰tRNA合成酶(

8、50 kDa),細胞漿中的磷蛋白相關疾病: 多肌炎/皮肌炎的血清學標志，陽性率為25- 35%，當伴有肺間質(zhì)纖維化的多肌炎，陽性率可高達70%。 著絲點抗原：動粒中的4種蛋白：A (17 kDa), B (80 kDa), C(140 kDa), D蛋白 (50 kDa)。著絲點蛋白 B為主要的靶抗原 (與IIF：100%)功能: 分裂期紡垂體的附著點 相關疾病:硬化癥:18%局限型: 80% - 95%(CREST綜合征) PCNA:細胞增殖相關核抗原I型抗原:DNA聚合酶的輔助蛋白 發(fā)揮控制細胞周期的作用相關疾病: 系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性抗體，但其發(fā)生率僅為3%。 染色體結(jié)構(gòu)示意圖DNA核

9、小體染色體染色質(zhì)組蛋白dsDNA抗原：雙鏈DNA，天然DNA(脫氧核糖核酸骨架)相關疾?。篸sDNA: 為SLE的診斷標準之一，陽性率為60-90%，不同的檢測方法診斷特異性差別較大?？贵w滴度與疾病的活動性、狼瘡腎炎的發(fā)病風險具有相關性。組蛋白抗原:H1, H2A, H2B, H3, H4，H2A-H2B，H3-H4(主要的靶抗原為H1和H2B)相關疾病: 藥物誘導性 LE: 100%(抗組蛋白抗體是該病唯一的標志性抗體)各種結(jié)締組織病：SLE: 30-80% SSc: 30% SS: 10%核小體抗原:組蛋白和DNA形成的復合物相關疾病: SLE：高特異性指標，陽性率為50-95%，特異性幾乎100%，抗核小體抗體可獨立于抗dsDNA抗體單獨出現(xiàn)，因而抗核小體抗體與抗dsDNA抗體聯(lián)合檢測，可提高SLE的血清學檢出率。40 S亞基60 S亞基P0P1P1P2P2抗原:核糖體60S 亞基中的3種蛋白質(zhì):P0, P1, P2. 具備相同的碳端抗原位點核糖體 P蛋白相關疾病: SLE:為SLE的高特異性指標，陽性率為5-15%，常見于神經(jīng)狼瘡。AMA與AMA-M2靶抗原:線粒體亞結(jié)構(gòu)上幾種生化性質(zhì)明確的物質(zhì)