抗氧化劑兒茶素微膠囊制備及其對腎病大鼠的療效

1、抗氧化劑兒茶素微膠囊制備及其對腎病大鼠的療效田云，盧向陽，何小解，肖紅波，彭麗莎，易著文，羅澤民【關(guān)鍵詞】兒茶素抗氧化活性腎病綜合征大鼠Preparatinandtherapeutieffetsfantixidantatehinirapsulesnratsithnephrtisyndre【Keyrds】atehinantixidantapaitynephrtisyndrerat當(dāng)前種種普及利用的合成抗氧化劑由于其埋伏的寧靜隱患等漸漸受到人們的排擠，從植物中探求天然、高效、低毒抗氧化劑成為當(dāng)代食品、醫(yī)藥和保健行業(yè)的緊張課題之一。但天然植物抗氧化劑在天然條件下輕易失去抗氧化生物活性，使之應(yīng)用受到了

2、較大的范圍1。腎病綜合征nephrtisyndre，NS是原發(fā)性腎小球疾病的常見表現(xiàn)，活性氧reativexygenspeies，RS在其產(chǎn)生生長中起著非常緊張作用2。探求一種天然高效抗氧化劑，幫助激素治療途徑，收縮治療時間、低落糖皮質(zhì)激素引起的副作用已成為如今臨床腎臟病事情者的緊張課題之一。本研究圍繞腎病綜合征的產(chǎn)生與活性氧自由基的干系以及天然植物抗氧化劑掃除活性氧的特性，對天然植物抗氧化劑抗氧化活性舉行評價底子之上，為落服兒茶素不變性差、味澀、易受胃液pH情況影響以及脂溶性差而生物利用率不高的缺陷，進一步研究了兒茶素微膠囊的制備技能，通過微膠囊化來增長兒茶素的不變性和生物有用性，末了通過腎

3、病動物模子試驗不雅察兒茶素微膠囊對腎病大鼠的療效，為利用兒茶素防治臨床腎病綜合征提供了理論與試驗根據(jù)，拓寬了兒茶素的應(yīng)用范疇。1質(zhì)料與要領(lǐng)1.2要領(lǐng)掃除H22本領(lǐng)測定:在樣品池內(nèi)參加一定濃度梯度的樣品水溶液50l以蒸餾水做空缺比擬，然后參加15%H22溶液50l、魯米諾-碳酸緩沖液pH9.5900l，充實混勻后，立即啟動化學(xué)發(fā)光，記載60s內(nèi)化學(xué)發(fā)光動力學(xué)曲線。按照參考文獻(xiàn)3，用發(fā)光按捺率為50%時的樣品濃度I50來權(quán)衡樣品對活性氧的掃除本領(lǐng)。兒茶素含量測定:高效液相色譜法。細(xì)密稱取適量微膠囊，用少量水洗去外貌兒茶素或置研缽中加少量蒸餾水研磨成糊狀并浸提24h，過濾并定容100l;適量質(zhì)料直接

4、用水溶解并定容至100l，用高效液相色譜闡發(fā)兒茶素含量。色譜條件為:色譜柱:Nva-Pak183.9150;活動相:N，N-二甲基甲酰胺-甲醇-冰醋酸8043;二元梯度洗脫A相為超純水，B相為活動相:B比擬例由初12%經(jīng)20in變?yōu)?0%;紫外檢測波長:278n;柱溫:35;流速:1.0l/in;進樣量:10l。微膠囊產(chǎn)率=產(chǎn)物中兒茶素總含量參加到懸浮體系中的兒茶素含量100%;微膠囊服從=1產(chǎn)物外貌的兒茶素含量產(chǎn)物中兒茶素總含量100%。微膠囊超微布局不雅察:掃描電鏡SE法在SE樣品臺上貼一層雙面膠，將充實混勻的微膠囊粉末撒在雙面膠上，稍加壓實，使一部門粉末陷入雙面膠中，用刀片輕刮粘在雙面膠

5、上的微膠囊化兒茶素粉末，然后輕輕吹去多余的粉末，噴金，用SE不雅察，選擇具有代表性的視野舉行照相。亞慢性毒性試驗:大鼠十二周飼喂試驗4。將康健SD大鼠80只隨機分成兒茶素微膠囊高1/5LD50、中1/10LD50、低1/25LD50三個劑量組1230g/kgbd、610g/kgbd和240g/kgbd和生理鹽水比擬組共四組，每組20只，牝牡各半并分籠豢養(yǎng)。天天給藥1次，一連給藥12周，不雅察臨床反響。停藥后24h殺鼠網(wǎng)羅血樣，用試劑盒檢測血通例、肝腎成效等生化指標(biāo)，取內(nèi)臟舉行形態(tài)學(xué)與構(gòu)造學(xué)查抄。2結(jié)果2.2兒茶素微膠囊的制備從固形物含量、芯材與壁材的比例以及壁材的構(gòu)成對兒茶素微膠囊產(chǎn)物質(zhì)量的影

6、響中看出表24，隨著固形物含量的增長，微膠囊產(chǎn)物的產(chǎn)率和服從均有所上升，但是當(dāng)固形物含量過高時，進料粘度的增大會增長料液的霧化困難，并使噴頭產(chǎn)生堵塞等征象。綜合微膠囊產(chǎn)物質(zhì)量的各項指標(biāo)，固形物含量以25%為宜。芯材與壁材比例的進步，對微膠囊產(chǎn)物的產(chǎn)率和水分含量影響較小，但活動性明顯加強，當(dāng)芯材與壁材比例進步到73時，產(chǎn)物服從落落許多，因此，芯材壁材以64為宜。壁材構(gòu)成的改變對微膠囊產(chǎn)物的產(chǎn)率影響不明顯，但隨著乙基纖維素的增長，微膠囊產(chǎn)物的服從和水分含量都表現(xiàn)為先上升后落落。但當(dāng)乙基纖維素與聚乙二醇的比例進步到91時，其活動性顯著落落，故乙基纖維素聚乙二醇以82為宜。表2固形物含量對微膠囊產(chǎn)物質(zhì)

7、量的影響表3兒茶素包埋量對微膠囊產(chǎn)物質(zhì)量的影響表4壁材構(gòu)成對微膠囊產(chǎn)物質(zhì)量的影響注:“-表現(xiàn)活動性較差，“-越多，表現(xiàn)活動性越差;“+表現(xiàn)活動性較好，“+越多，表現(xiàn)活動性越好2.3微膠囊超微布局借助掃描電鏡，可以看出利用噴霧枯燥法所制備的微膠囊產(chǎn)物不是完全勻稱同等，其為巨細(xì)約在30150之間較規(guī)矩的球狀顆粒圖1。產(chǎn)物外貌平滑完備、無縫隙，略有凹陷圖2，而凹陷為噴霧枯燥微膠囊化產(chǎn)物普及所具有的特性。微膠囊囊壁的局部布局表現(xiàn)為致密的團體布局圖3，說明該產(chǎn)物具有較好的包埋結(jié)果。圖1微膠囊超微布局圖圖2微膠囊外貌布局圖圖3微膠囊囊壁布局2.4兒茶素微膠囊寧靜性評價兒茶素微膠囊急性毒性試驗結(jié)果:大、小鼠

8、均沒有表現(xiàn)出顯著的中毒病癥;兒茶素微膠囊對大鼠的LD50為6110g/kg，對小鼠的LD50為5090g/kg。按照急性毒性分級尺度，兒茶素微膠囊屬實際無毒級。兒茶素微膠囊亞慢性毒性實行結(jié)果:各組大鼠在試驗期內(nèi)運動、飲食、糞便和皮毛光芒等均未見非常;實行末各組大鼠肝成效、腎成效、總膽固醇、紅細(xì)胞計數(shù)、白細(xì)胞計數(shù)等均無統(tǒng)計學(xué)差異P均0.05見表5，其重要臟器系數(shù)g/100g體重或g/100g體重差異亦無明顯統(tǒng)計學(xué)意義P均0.05見表6;剖檢及光鏡鏡檢均未創(chuàng)造本色性病變及成心義的變革，表白兒茶素微膠囊不會造成顯著的病理損傷。2.5兒茶素微膠囊對腎病綜合征大鼠卵白尿及病理損害的影響實行初，各組大鼠尿

9、卵白分泌量無顯著差異P均0.05。阿霉素造模后，在第二周末均出現(xiàn)了大量卵白尿，經(jīng)電鏡檢測，腎小球基底膜可見足突普及交融，說明阿霉素腎病模子制備樂成。隨著周齡的增長，比擬組尿卵白的分泌量漸漸增長，從第二周末始，別的各組大鼠24h尿卵白分泌量均較同時期比擬組要高P均0.01，差異有非常明顯意義，見表1。實行第附近末，除比擬組外，別的各組大鼠24h尿卵白的分泌量均高于激素組，差異有非常明顯意義;與腎病組比擬:別的各組大鼠24h尿卵白的分泌量均有差異程度低落，差異有非常明顯意義。實行末，各組大鼠24h尿卵白的分泌量依次為:腎病組兒茶素治療組兒茶素微膠囊治療組激素治療組比擬組。兒茶素微膠囊治療組與兒茶素

10、治療組24h尿卵白的分泌量在第附近末差異無明顯意義，但在第六周末差異明顯P0.05。實行第附近末，與腎病組比擬，激素組大鼠病理積分低落，差異有非常明顯意義P0.01，見表8。與激素組比擬，微膠囊組大鼠病理積分固然增高，但并沒有統(tǒng)計學(xué)意義。實行第六周末，各組大鼠病理積分由高至低依次為:比擬組、腎病組、兒茶素組、微膠囊組、激素組。與腎病組比擬，激素組與微膠囊組大鼠病理積明白顯低落，差異有非常明顯意義P均0.01，與激素組比擬，兒茶素組及微膠囊組大鼠病理積分均增高，差異有明顯意義P別離0.01、0.05，詳細(xì)見表8。經(jīng)相干闡發(fā)創(chuàng)造:24h尿卵白分泌量與腎臟病理積分呈高度正相干r0.827，P0.01

11、。說明兒茶素微膠囊可以通過低落尿卵白的分泌量，來減輕腎臟損害，延緩腎臟病理慢性希望。3討論近二十多年來抗氧化劑的研究與應(yīng)用獲得了飛速的生長，種種普及利用的合成抗氧化劑由于其埋伏的寧靜隱患等漸漸受到人們的排擠，從植物中探求天然、高效、低毒抗氧化劑成為了如今抗氧化劑生長的一個一定趨勢。從如今的研究來看，天然植物抗氧化劑中絕大部門都是多酚類物質(zhì)，此中應(yīng)用得較好的有兒茶素、葡萄籽提取物、迷迭香提取物等。本研究通過體外抗氧化試驗表白:兒茶素對三種重要活性氧的掃除本領(lǐng)均比葡萄籽提取物和迷迭香提取物要強。但是，兒茶素分子中的酚羥基很生動，在外界條件下極不不變，輕易因產(chǎn)生氧化、聚合或縮合等反響，而失去部門抗氧

12、化活性及別的生物學(xué)成效6，且非庇護狀態(tài)下，其在體內(nèi)的生物利用率也很低。為了有用辦理這一題目，本文利用噴霧枯燥法將其制備成微膠囊，并對制備工藝舉行了開端探究2022年8月25日申報國度創(chuàng)造專利，2022年10月22日通過初審，申請?zhí)枺?02210046696.8。通過電鏡不雅察及寧靜性評價，所制備的兒茶素微膠囊不但具有較好的包埋結(jié)果，并且屬于實際無毒級、無任何毒副作用，表白其可應(yīng)用于臨床研究。大量卵白尿是腎病綜合征的重要臨床表現(xiàn)，一連大量卵白尿可導(dǎo)致腎臟一連損傷，從而引起腎臟慢性舉行性損害，因此有用操縱卵白尿的分泌是治療腎臟病的底子地點7。別的，活性氧自由基的過量積累也是造成腎臟病慢性希望的緊張

13、緣故原由2。如今臨床上治療腎病綜合征的首選藥物是糖皮質(zhì)激素，然而大量的研究創(chuàng)造假設(shè)恒久利用糖皮質(zhì)激素可使腎小球入球小動脈阻力落落，腎小球內(nèi)壓力增長，改變腎小球?qū)Υ蠓肿游镔|(zhì)的通透性，增長尿卵白的排擠，加快腎臟的損傷8。比年來，海內(nèi)也有學(xué)者研究創(chuàng)造糖皮質(zhì)激素不但可使患者尿卵白增長，尚可引起腎小球濾過率和有用腎血漿流量增長9。因此，探求一種交換或幫助激素治療途徑，收縮治療時間、低落糖皮質(zhì)激素引起的副作用已成為如今臨床腎臟病事情者的緊張課題之一10。本課題組通過兒茶素對大鼠腎病綜合征防治機制的研究創(chuàng)造:兒茶素對付防治腎小球疾病的慢性希望具有較好的作用.通過進一步體系研究，不雅察兒茶素微膠囊對腎病綜合征大鼠卵白尿和腎臟病理積分的影響創(chuàng)造:兒茶素治療組、兒茶素微膠囊治療組和激素治療組均可在一定程度上低落卵白尿分泌和腎臟病理積分，但又存在一定差異，與游離兒茶素治療組比擬，兒茶素微膠囊治療組的療效更好。這大概與兒茶素微