臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞楊潔

1、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞楊潔目錄 定義 技術(shù)流程 臨床應(yīng)用 優(yōu)勢 前景什么是臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞？臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesnchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細(xì)胞，它能分化成許多種組織細(xì)胞。 工藝流程簡介供者篩選采集接收制備培養(yǎng)凍存復(fù)蘇發(fā)放運(yùn)輸臨床應(yīng)用信息反饋供者篩選供者需要提供供者的既往病史、現(xiàn)病史、家族史等資料。樣本采集運(yùn)輸要求臍帶采集標(biāo)準(zhǔn)： 1.臍帶長度不得低于20cm 2.臍帶兩端均在2-3cm處結(jié)扎 3.臍帶保存液在有效期內(nèi)，并且無明顯顏色變化 4.臍帶保存瓶無漏液現(xiàn)象，密封嚴(yán)實、無裂橫 5.采集套裝內(nèi)容完整，無缺失 6.采集信息登記完整、字跡

2、清楚易辨認(rèn) 7.臍帶運(yùn)輸時間在規(guī)定范圍內(nèi) 8.溫度控制在適度范圍內(nèi)（0度-25度）樣本接收標(biāo)準(zhǔn)臍帶的接收標(biāo)準(zhǔn)： 1.樣本信息一致、無誤，并能追溯至臍帶所有人。 2.母血采集量5ml 臍血檢測樣本采集量5ml 3. 采集套裝內(nèi)容完整，無缺失；采集信息登記完整、字跡清楚易辨認(rèn)。 4.無可能造成供者基因型異常的家族史。 5.供者健康調(diào)查表登記信息無異常。 間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方式間充質(zhì)干細(xì)胞的制備原理： 臍帶華通氏膠內(nèi)富含間充質(zhì)干細(xì)胞，通過分離獲得華通氏膠后，并進(jìn)行體外培養(yǎng)，利用間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁生長和可體外擴(kuò)增特性，可獲得更多的間充質(zhì)干細(xì)胞。組織塊分離法免疫五項檢測均為陰性 間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方式華通

3、氏膠的提取與培養(yǎng)華通氏膠提?。?.消毒2.清洗3.分離出兩條動脈和一條靜脈4.剝?nèi)∪A通氏膠5.剪碎華通氏膠（大小1mm3 ）6.接種至培養(yǎng)皿培養(yǎng)（密度2-3g/10cm皿） 間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方式注意事項：1.血跡清洗要徹底2.剝?nèi)用}與靜脈要干凈3.盡量不要剝?nèi)⊙蚰そM織4.使用合格器械，器械鈍口和生銹的不要使用5 .接種后均勻平鋪組織塊 間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)細(xì)胞補(bǔ)液和換液（原代培養(yǎng)） 1. 制備五天補(bǔ)液（觀察是否有細(xì)胞爬出） 2.八天換液 間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代細(xì)胞傳代（原代）接種時間：細(xì)胞融合度40%-60%最基本和重要步驟間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代細(xì)胞傳代（非原代）接種時間：細(xì)胞融合度85% 試劑標(biāo)

4、記、用前復(fù)核 間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存細(xì)胞收集前須給檢測送樣做細(xì)菌檢測和流式（CD90+、CD105+、CD166+）冷凍保護(hù)劑（胎牛血清+DMSO） 配制：DMSO 10%冷凍方式 深低溫冰箱梯度降溫間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存注意事項 細(xì)胞凍存過程降溫要慢，緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。操作要迅速間充質(zhì)干細(xì)胞的復(fù)蘇細(xì)胞復(fù)蘇過程要迅速，以降低DMSO對細(xì)胞的損傷，用生理鹽水清洗兩遍再接種培養(yǎng)；若直接回輸則多洗一變。細(xì)胞治療程序 1、治療前咨詢： 明確診斷，明確疾病處于哪一期； 2、治療風(fēng)險： 分析利弊；可能的副作用；獲益 3、知情同意：治療前準(zhǔn)

5、備 1). 安全檢測:菌檢； 2). 個體化治療方案設(shè)計：每一位病人的治療方案，都根據(jù)其評價結(jié)果具體制定; 3). 需要的細(xì)胞數(shù)量； 4). 細(xì)胞的使用方法； 5). 可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)及應(yīng)對措施。間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量要求細(xì)菌檢測內(nèi)毒素檢測革蘭氏檢測支原體檢測活性檢測90%陰性細(xì)胞發(fā)放1.細(xì)胞的保存(基質(zhì)：生理鹽水或者保存液）2.運(yùn)輸要求：時間、溫度3.病人信息填寫完整4.樣本檢測合格MSC治療禁忌證：1. 懷孕。2. 精神病。3. 嚴(yán)重的心、肝、腎、肺功能不全。3. 不能控制的嚴(yán)重感染。4. 合并其他有致命危險的疾病。5. 一般受者年齡不超過65歲 （個別患者65歲）。6. 自體免疫性疾病晚期。

6、7. 惡性腫瘤。8. HIV 陽性間充質(zhì)干細(xì)胞治療疾病的原理替代和修復(fù)死亡和受損傷的細(xì)胞；激活休眠和處于抑制狀態(tài)的細(xì)胞；旁分泌作用（分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子、抗凋亡因子等）間充質(zhì)干細(xì)胞移植途徑腰穿途徑靜脈途徑局部種植介入途徑優(yōu)勢1、取材方便：采集過程簡單、無痛苦，不影響母子健康；2、細(xì)胞數(shù)量豐富：增值能力強(qiáng)，可為組織器官的修復(fù)和再生提供所需的大量細(xì)胞； 3、免疫原性低：具有獨(dú)特的免疫調(diào) 節(jié)功能，自體使用不引起免疫排斥反應(yīng)，異體移植還可降低免疫反應(yīng)； 4、不涉及社會、倫理及法律方面的更多爭議。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有哪些臨床應(yīng)用價值？ 泌尿系統(tǒng)：腎實質(zhì)的修復(fù)； 消化系統(tǒng)：肝組織的修復(fù)； 內(nèi)分泌系統(tǒng)：胰島細(xì)胞的修復(fù)； 神經(jīng)系統(tǒng)：腦、脊髓損傷的修復(fù)； 血液系統(tǒng)：化療、放療后造血系統(tǒng) 的修復(fù)； 循環(huán)系統(tǒng)：心肌修復(fù)、血管修復(fù)； 免疫系統(tǒng)：調(diào)節(jié)免疫，移植治療時可降低免疫排斥反應(yīng)； 衰竭器官的結(jié)構(gòu)和功能的修復(fù)和再生：最