植物病害檢疫檢驗(yàn)技術(shù)真菌三

1、植物病害檢疫檢驗(yàn)技術(shù)真菌三第一節(jié) 植物檢疫性真菌常見檢疫檢驗(yàn)技術(shù)直接檢驗(yàn)比重檢驗(yàn)染色檢驗(yàn)洗滌檢驗(yàn)保濕萌芽檢驗(yàn)分離培養(yǎng)檢驗(yàn)1、適用范圍 混雜在種子間的較大病原體（線蟲癭、菌核） 污染大量病菌孢子的種子（小麥腥黑穗病） 種子帶明顯病癥的病粒（小麥黑胚?。ㄒ唬┲苯訖z驗(yàn)-肉眼檢驗(yàn)小麥黑胚病粒腥黑穗病 在檢查時(shí)應(yīng)先進(jìn)行外表和周圍的檢查，然后，由表及里仔細(xì)觀察病害癥狀、菌癭、菌核等病癥。 對(duì)于苗木、接穗、插條等，應(yīng)注意莖、葉、芽、根各部位，并需檢查粘著和夾帶的土壤。 對(duì)塊莖、塊根以及鱗莖，應(yīng)特別注意芽眼、凹陷處、傷口和附著的土壤。主要工具：放大鏡或解剖鏡。檢查要求：2、檢驗(yàn)方法： 將送驗(yàn)樣品分出一半試樣

2、，放在白紙或白色塘瓷盤中，檢出線蟲癭、麥角菌、黑粉菌球、菌核及病粒，稱其重量，計(jì)算病害感染率。病害感染率 (%)=?。＃┰w重量(g)試樣重量(g)100%3、注意 無病征的種子不一定是無病的種子。 不同的病害可以表現(xiàn)類似的癥狀， 同一病害也可產(chǎn)生不同的癥狀。 在確定某種病害時(shí)，須與其他方法配合使用。1、適用范圍 檢查混雜在種子內(nèi)較大的病原體如菟絲子、菌核、線蟲癭和雜草種子等。 利用病原體與種子形狀、大小的不同，通過一定的篩孔將病原體篩出來，然后進(jìn)行分類稱重。 （二）過篩檢驗(yàn)大豆菟絲子為害2、檢驗(yàn)方法 將送驗(yàn)樣品分出一半作為試樣，用規(guī)定孔徑的篩子過篩。 各層樣品倒入白瓷盤內(nèi)檢查，最下層的雜質(zhì)

3、倒入黑玻璃盤中用肉眼或放大鏡檢查。病原體含量(%)=病原體重量(g)試樣重量(g)100過篩檢驗(yàn)主要用于檢驗(yàn)糧谷、種子、油料、干果和生藥材。1、適用范圍：種子表面帶病而肉眼看不見的種子病害。（附著在種子表面的病菌孢子）（三）洗滌檢驗(yàn)小麥矮腥黑穗病菌 洗滌檢驗(yàn)法原理：主要用于檢查附著在種子表面的各種真菌孢子。種子表面常附著真菌孢子，將一定量的樣品放入容器內(nèi)，加一定量的無菌水，充分振蕩，可使病菌孢子洗滌下來，而后離心后，可沉淀，鏡檢沉淀物可確定其種類和數(shù)量。主要儀器和試劑：振蕩器、離心機(jī)、顯微鏡、0.1吐溫溶液等2、檢驗(yàn)方法： 樣品制備：取樣(5g)2份于100ml三角瓶?jī)?nèi)，加蒸餾水10ml（加0

4、.1吐溫溶液），振蕩510min， 顯微計(jì)數(shù)：懸浮液20003000r/min離心515min，吸去上清液，留1ml沉淀部分，滴于5個(gè)載玻片，加蓋玻片鏡檢，每片檢查10個(gè)視野，并計(jì)算每視野平均孢子數(shù)N=n1n2n3/m式中： N每克種子的孢子負(fù)荷量 n1每視野平均孢子數(shù) n2蓋玻片面積上的視野數(shù) n31ml水的滴數(shù) m供試樣品的重量（g） 如果鏡檢洗滌液時(shí)，沒有檢查到病菌孢子，則對(duì)同一樣品要重復(fù)幾次取樣洗滌，對(duì)每一洗滌液至少要鏡檢5張玻片。當(dāng)一個(gè)樣品兩次取樣，洗滌檢驗(yàn)的結(jié)果相差很大時(shí)，則需要重復(fù)一次。檢驗(yàn)結(jié)果有四個(gè)影響因素： a種子或其他糧谷類產(chǎn)品表面所粘附的病菌孢子，不一定能完全洗滌下來。

5、b在離心管內(nèi)，懸浮液表面常形成一層極難沉降的孢子薄膜，而管壁上也可能粘附著孢子，使檢驗(yàn)結(jié)果很難代表實(shí)際情況，因而影響計(jì)算的準(zhǔn)確性； c將懸浮液滴于玻片時(shí)，由于孢子迅速沉淀，造成一些視野間孢子分布極不均勻，這也影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，都可能增加誤差程度； d操作不夠嚴(yán)格，會(huì)造成人為誤差，以及制樣中也會(huì)出現(xiàn)偏差。 原理：由于菌癭、菌核、病秕粒，都要比健康籽粒輕。若將其浸入一定濃度的食鹽水（糖、泥土等）或其他溶液中時(shí)，就會(huì)浮于液面。撈取浮物，結(jié)合解剖鏡進(jìn)行檢驗(yàn)，即可鑒定其種類。（四）比重檢驗(yàn)法比重檢驗(yàn)法一般用于檢驗(yàn)種子、糧谷、豆類中的菌癭、菌核和病秕籽粒等。 原理：某些植物或植物器官被病原感染后，或某些病

6、原物本身，常可用特殊的化學(xué)藥品處理，使其染上特有的顏色，幫助檢出和區(qū)分病蟲種類。這種方法即為染色檢驗(yàn)法。例如：馬鈴薯癌腫?。ㄊ韷K上癌瘤不明顯時(shí)，可做徒手切片，加1滴1的“藏花紅”染色液，健康組織細(xì)胞壁呈亮紅色，感病組織細(xì)胞壁呈暗紅色。麥類赤霉病的檢驗(yàn)：將病粒放在0.5-1%對(duì)硝基苯胺酒精溶液中，經(jīng)2-3小時(shí)，受侵染部分或有菌絲分布的部分呈現(xiàn)暗紅色至咖啡色，而未受侵染部分為黃色，50溫度下顏色更明顯。（五）染色檢驗(yàn)法（六）解剖檢查法有許多病害或一些病害初發(fā)生階段，在種子、苗木及其他植物產(chǎn)品表面沒有明顯的癥狀，診斷比較困難有時(shí)為要了解病原物潛伏的場(chǎng)所，常常需要用解剖檢驗(yàn)進(jìn)行鑒定，如散黑穗病菌以菌絲

7、體在胚中越冬,有的果樹病害以菌絲體在花芽或鱗片中越冬。 解剖檢驗(yàn)主要采用徒手切片或切片機(jī)切片，經(jīng)過染色，制成玻片標(biāo)本后，放在顯微鏡下觀察鑒定。對(duì)于某些病害或種子苗木及其產(chǎn)品，有時(shí)采用粗放的解剖方法也可進(jìn)行檢查。 （七）保濕萌芽檢驗(yàn)原理：種子攜帶的真菌，無論外表黏附的還是潛伏種子內(nèi)的，在種子萌發(fā)階段即可開始侵染，甚至有些在種子還未萌發(fā)時(shí)就可長(zhǎng)出病菌。主要儀器及試劑：吸水紙、沙土、冰箱、培養(yǎng)箱等。常規(guī)植物病理學(xué)方法 保濕萌芽檢驗(yàn)的方法： 1、保濕培養(yǎng)檢驗(yàn) 2、沙內(nèi)萌芽檢驗(yàn) 3、土內(nèi)萌芽檢驗(yàn) 4、試管幼苗癥狀測(cè)定 1保濕培養(yǎng)檢驗(yàn) 此法一般又分為：吸水紙法、冰凍吸水法和瓊脂平皿法等。 (1) 吸水紙法

8、 廣泛用于各種類型的種子，包括禾谷類、豆類、麻類、煙草、各種蔬菜、觀賞植物和樹木種子等種 菌病害的檢驗(yàn)。 吸水紙法的標(biāo)準(zhǔn)操作： a 用三層無菌吸水紙，吸足無菌水后，滴掉多余的水，放人經(jīng)消毒的培養(yǎng)皿內(nèi)，將種子排列在吸水紙上。 b 各粒種子間要保持一定距離，一般不得少于1-1.5cm，再將培養(yǎng)皿置于適當(dāng)溫濕度的恒溫箱培養(yǎng)。 c 在培養(yǎng)期間，每天用12h光照和黑暗交替處理，保持一定周期。 d 作物種子和病菌一般經(jīng)2-10d培養(yǎng)，種子表面就會(huì)長(zhǎng)出待檢病菌，最后進(jìn)行鏡檢。 優(yōu)點(diǎn):設(shè)備簡(jiǎn)單，應(yīng)用范圍廣，操作方便；花費(fèi)少，快速準(zhǔn)確，易于掌握；受檢病癥立體感強(qiáng)，容易鑒定和便于制作標(biāo)本等。缺點(diǎn):在此條件下，有些

9、真菌的菌絲生長(zhǎng)不旺盛和產(chǎn)孢量少，而很快被許多雜菌快速生長(zhǎng)，超過或掩蓋被檢病菌。 吸水紙法的特點(diǎn)： (2)冰凍吸水法 這是一種改進(jìn)的保濕培養(yǎng)法，其操作步驟如下： a 種子排列在吸水紙上，一般谷物種子在10下保持3d，使其先萌芽。 b 20的溫度下，保持2d（其他種子在20下保持4d)。 c 再將幼苗在-20的溫度下，進(jìn)行冰凍過夜，以死亡的幼苗作為培養(yǎng)基。 d 20的溫度下，用光暗交替處理12h，保持5-7d。 為了防止細(xì)菌的污染，可在吸水紙上加些抗生素，如210-4金霉素或土霉素等數(shù)滴。 優(yōu)點(diǎn)：有利于病原物形成孢子，同時(shí)又避免因種子萌芽伸長(zhǎng)后造成相互覆蓋，便于檢查。(3)瓊脂平皿法 此法與吸水紙

10、法所不同之處，就是用1.5%-1.7瓊脂，經(jīng)滅菌后倒入無菌培養(yǎng)皿中，制成一定厚度的平面，代替吸水紙。 優(yōu)點(diǎn)：因含水量均勻一致，有利于病原菌生長(zhǎng)，皿內(nèi)潔凈，雜菌少，便于檢查，因此常用于植物檢疫檢驗(yàn)。 瓊脂平皿法用于棉花枯、黃萎病菌的檢驗(yàn)。 將沙用清水洗去泥垢，然后用沸水煮過，鋪在經(jīng)酒精或福爾馬林液消毒過的萌芽器內(nèi)，加冷開水至含沙量的60左右。 沙面應(yīng)低于容器邊緣4cm，在鋪平的沙上排列種子，間隔一定距離。排好種子后，再加細(xì)沙覆蓋2-3cm，并加容器蓋，置于25的溫箱中。 當(dāng)?shù)谝粋€(gè)幼芽長(zhǎng)高碰到頂蓋時(shí)，即應(yīng)去蓋。經(jīng)過一定時(shí)期，將幼芽連根取出，并取出發(fā)芽的種子，根據(jù)幼苗和未發(fā)芽種子所表現(xiàn)的癥狀及種苗上

11、有無孢子，就可計(jì)算發(fā)芽率及發(fā)病率。2沙內(nèi)萌芽檢驗(yàn)3土內(nèi)萌芽檢驗(yàn) 將種子播種在含有滅菌土壤的盆缽或播種箱內(nèi)，保持適宜發(fā)芽的溫、濕度。待種子發(fā)芽出土后，進(jìn)行檢驗(yàn)，分析其發(fā)病情形。4試管幼苗癥狀測(cè)定 做試管斜面，每管放人1粒種子，塞緊管口。再置于20下，用人工光照和黑暗各半處理。當(dāng)幼苗達(dá)到管頂時(shí)，即可將管蓋取掉。待培養(yǎng)期到后，檢查幼苗癥狀。保濕萌芽檢驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn): 容易檢查根部和綠色部分，也可避免相互傳染，但操作較麻煩，一般可用于檢驗(yàn)珍貴的繁殖材料。 保濕萌芽檢驗(yàn)的缺點(diǎn)： 1、在對(duì)寄主生長(zhǎng)發(fā)育不良，而適宜于病菌生長(zhǎng)發(fā)育的條件下，則某些腐生菌可能變成萌芽階段的寄生菌，造成幼芽發(fā)生部分病斑。 2、由于主要還

12、是依靠肉眼檢查，多種病害可以產(chǎn)生類似的病癥，就是同一種病害也可發(fā)生不同的癥狀等，這些情況都足以影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 （八）分離培養(yǎng)檢驗(yàn)分離培養(yǎng)主要應(yīng)用于檢驗(yàn)潛伏于種子、苗木或其他植物新產(chǎn)品內(nèi)部，不易發(fā)現(xiàn)和鑒定的病原菌；或當(dāng)種子、苗木或其他植物產(chǎn)品上雖有病斑，但無特殊性的病原菌可供鑒定的場(chǎng)合。不同的病原菌，其所用的培養(yǎng)基、分離方法、培養(yǎng)條件等不盡相同，必須因病制宜地加以使用。 通過分離培養(yǎng)所得到的待檢病菌，應(yīng)通過必要的步驟進(jìn)行仔細(xì)鑒定。分離真菌的方法有： 1、組織分離法： 將樣品材料經(jīng)表面消毒并沖洗后切成小塊，輕輕置于培養(yǎng)基平板表面，寫好標(biāo)簽后，即可培養(yǎng)觀察。 2、稀釋分離法：將寄主組織受害部

13、位的孢子洗下配成懸浮液，經(jīng)稀釋后與熔化并冷卻45左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，然后倒在滅菌的培養(yǎng)基中。 從種子、苗木及其他繁殖材料上獲得的病菌，有時(shí)還需接種到植株上，使其表現(xiàn)典型癥狀后，再檢查鑒別。（九）接種方法 由于病原種類與傳播方式不同，其接種的方法也各不相同，常用接種方法有下列幾種： (1)拌種接種：用病菌孢子拌種，是接種黑粉病（如矮腥黑穗?。┳畛Ｓ玫姆椒ā?(2）浸種接種：用病原真菌孢子懸浮液浸種，也是常用的接種方法。 (3)花期接種法：主要用于從花期侵入的病菌。如：大麥、小麥散黑穗病菌的接種。在抽穗后1-2天，用冬孢子懸浮液注射到花內(nèi)。 (4）整株噴霧接種：孢子懸浮液噴在葉片或莖部 (5)土

14、壤接種法：針對(duì)一些土傳病菌，如棉花枯、黃萎菌。 核酸技術(shù)是一種DNA分析鑒定技術(shù)，其方法快速、準(zhǔn)確，因此，在植物病原菌的分類鑒定和親緣關(guān)系分析等方面已有廣泛的應(yīng)用。 核酸技術(shù)基于PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)），它是一種體外DNA擴(kuò)增技術(shù)，由于其快速、準(zhǔn)確、所需樣品量少的特點(diǎn)，十分符合植物檢疫檢驗(yàn)過程的要求。根據(jù)不同的檢疫對(duì)象，需設(shè)計(jì)出特異性的引物，就可鑒定特定的病原菌。 （十） 核酸技術(shù)(十) 隔離種植檢驗(yàn) 不易發(fā)現(xiàn)癥狀或病原物，需要在生長(zhǎng)發(fā)育階段進(jìn)行病害觀察或分析鑒定。 隔離種植應(yīng)在溫室或極為嚴(yán)密的隔離區(qū)進(jìn)行，并在各個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育階段進(jìn)行觀察。對(duì)不同的病害，用不同的方法：1.2.3.4.5.對(duì)較大的病

15、原體過篩肉眼對(duì)種子外表有明顯癥狀的表面帶菌但看不見的洗滌濾紙培養(yǎng)胚內(nèi)病菌離體胚培養(yǎng)種子內(nèi)部的病原菌瓊脂培養(yǎng)肉眼第二節(jié) 植物病原細(xì)菌檢疫檢驗(yàn)技術(shù)主講：王曉東 副教授 所有已知植物細(xì)菌病害都可以通過種苗傳播，通過種子傳病的占40以上，準(zhǔn)確檢測(cè)種子和種苗是否攜帶檢疫性病原細(xì)菌，是防治這類病害的關(guān)鍵。 一、病原細(xì)菌的檢測(cè) 植物病原細(xì)菌的檢測(cè)方法，大致可分為直接檢測(cè)和間接檢測(cè)兩大類。直接檢測(cè)：檢測(cè)病原細(xì)菌時(shí)，病原物不被提取或分離出來。間接檢測(cè)：先把病原細(xì)菌提取、分離或破壞以后進(jìn)行檢測(cè)。 又分為活菌檢測(cè)和非活菌檢測(cè)。（一）直接檢測(cè) 1.直觀檢驗(yàn) 直觀檢驗(yàn)是以癥狀為主的田間檢測(cè)，植物細(xì)菌病害的產(chǎn)地檢疫主要是

16、以這種方式進(jìn)行的。通過肉眼觀察植株的癥狀、菌膿以及鏡檢觀察，并結(jié)合田間診斷結(jié)果而做出?？焖僭\斷細(xì)菌性病害方法-細(xì)菌溢2. 生長(zhǎng)檢驗(yàn) ：生長(zhǎng)檢驗(yàn)有實(shí)驗(yàn)室和田間幼苗癥狀檢驗(yàn)兩種。(1)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)：這種檢驗(yàn)是將種子播種在濕潤(rùn)吸水紙上，或水瓊脂培養(yǎng)基平板上，根據(jù)幼芽和幼苗癥狀做出初步診斷。 (2)田間幼苗癥狀檢驗(yàn)：此法常受到環(huán)境條件的影響。 在植物檢疫中，生長(zhǎng)檢驗(yàn)多作為初步檢驗(yàn)。（二）間接檢測(cè)1. 活菌檢測(cè)（1）分離培養(yǎng)法檢驗(yàn)A 分離病原細(xì)菌 一般用稀釋分離法。稀釋分離有以下兩種方法。 培養(yǎng)皿稀釋分離法 平板劃線分離法 培養(yǎng)皿稀釋分離法平板劃線分離法 取小塊病組織用滅菌玻棒研碎。靜置一定時(shí)間，用滅菌的

17、移植環(huán)蘸取以上組織液在瓊膠平板上劃線培養(yǎng)；先在平板的一側(cè)順序劃35條線，再將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)60將移植環(huán)滅菌后,從第二條線末端，順序劃出3-5條線。目的都是使細(xì)菌分開形成分散的菌落。 傳統(tǒng)鑒定方法 培養(yǎng)性狀觀察 培養(yǎng)性狀對(duì)細(xì)菌的鑒定是很重要的。不同屬的植物病原細(xì)菌，它們的培養(yǎng)性狀顯然不同。 培養(yǎng)性狀要分別在培養(yǎng)液、瓊膠斜面和瓊膠平板上觀察。描述時(shí)，要指明培養(yǎng)基、培養(yǎng)時(shí)間和培養(yǎng)溫度等。細(xì)菌的色素非水溶性色素:水溶性色素:細(xì)菌的形態(tài)革蘭氏染色法結(jié)晶紫初染碘液媒染乙醇脫色番紅復(fù)染涂片固定 陽性菌紫色 陰性菌紅色鞭毛染色涂片干燥固定染色1min水洗、吸干鏡檢制備涂片標(biāo)本染色生理和生物化學(xué)性狀用細(xì)菌的培養(yǎng)物接種

18、于一些特定的培養(yǎng)基上或檢測(cè)管內(nèi)，通過產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、顏色變化等反應(yīng)，檢測(cè)細(xì)菌的耐性、好氧或厭氧性、對(duì)碳素、氮素和大分子化合物的利用和分解能力等，以達(dá)到鑒定的目的。常見的生化反應(yīng)對(duì)糖的發(fā)酵甲基紅試驗(yàn)單糖發(fā)酵試驗(yàn)對(duì)蛋白質(zhì)的發(fā)酵吲哚試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)其他試驗(yàn)?zāi)蛩孛冈囼?yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)?zāi)壳?，在傳統(tǒng)測(cè)定的基礎(chǔ)上，發(fā)展了測(cè)定細(xì)菌多項(xiàng)生理生化指標(biāo)并且借助于計(jì)算機(jī)統(tǒng)計(jì)和決策的快速測(cè)定方法。常見的有生化測(cè)定試劑盒、Biolog測(cè)定、甲基脂肪酸氣相色譜分析法等。（2）濃縮接種及離體葉檢測(cè)法把繁殖材料或種子的提取液經(jīng)濃縮后，通過注射、針刺、摩擦、剪葉或噴霧接種等方法，接種到感病植物上觀測(cè)是否發(fā)病及其癥狀特點(diǎn)（3） 噬菌體檢

19、驗(yàn)原理：噬菌體侵染細(xì)菌，裂解寄主細(xì)胞，在固體平板上培養(yǎng)，則出現(xiàn)噬菌斑。噬菌體具有專化性，利用此特點(diǎn)，可鑒別細(xì)菌的種類。噬菌體是侵染細(xì)菌的病毒，能在活細(xì)菌細(xì)胞中寄生、繁殖，并裂解寄主細(xì)胞。 優(yōu)點(diǎn)：噬菌體法要是簡(jiǎn)便、快速，能直接用種子提取液測(cè)定。 缺點(diǎn)：非目標(biāo)菌量多存在時(shí)敏感性較差，噬菌體寄生的?；院图?xì)菌對(duì)噬菌體的抵抗性，都可能影響檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。過敏性反應(yīng)致病性的初步測(cè)定為了確定分離到的大量菌種哪些是致病性的，用常規(guī)接種方法比較費(fèi)事，有的要經(jīng)過相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。用植物的過敏性反應(yīng)，來快速篩選致病性細(xì)菌。方法是將濃度107/ml的細(xì)菌的懸浮液注射在煙草葉片的細(xì)胞間致病性細(xì)菌往往在6-24h內(nèi)就在注射點(diǎn)

20、周圍出現(xiàn)過敏性枯斑，而腐生性細(xì)菌則不表現(xiàn)這種反應(yīng)。注射Pseudomonas屬細(xì)菌的，一般在6-10h 即出現(xiàn)枯斑，注射 Xanthomonas屬細(xì)菌的要10-24h。 煙草、蠶豆葉片也是很好的試驗(yàn)材料。 用于植物病原細(xì)菌鑒定和檢測(cè)的主要方法2、非活菌檢測(cè)（1）免疫吸附分離檢測(cè)法原理：結(jié)合血清學(xué)與平板分離技術(shù)，利用與抗原高度親和性的抗體，來捕獲目標(biāo)細(xì)菌，樣本中其他細(xì)菌均被沖洗掉，再將目標(biāo)細(xì)菌轉(zhuǎn)移或釋放到培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。方法：平皿免疫吸附評(píng)價(jià)測(cè)定法和免疫吸附稀釋培養(yǎng)法 該法可以定性、定量檢測(cè)樣品中的抗體或抗原，具有靈敏、簡(jiǎn)單、快速等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛地用于植物病原細(xì)菌的檢測(cè)。 在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物）酶作用的底物（顯色劑）酶 底 物顯色反應(yīng) 測(cè)定波長(zhǎng) 辣根過氧化物酶 鄰苯二胺 四甲替聯(lián)苯胺氨基水楊酸 鄰聯(lián)苯甲胺2,2-連胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)銨鹽 橘紅色 黃色棕色 蘭色藍(lán)綠色492 460449 425642堿性磷酸酯酶 4-硝基酚磷酸鹽(PNP)萘酚-AS-Mx磷酸鹽+重氮鹽 黃色紅色 400500 葡萄糖氧化酶 ABTS+HRP+葡萄糖葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑蘭 黃色深藍(lán)色 40