hla基因檢測(cè)修改稿ppt課件

1、長(zhǎng)沙能潤(rùn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所鄧鵬HLA 基因檢測(cè)1. HLA 和HLA分型檢測(cè)2. HLA 分型方法比較3. 強(qiáng)直柱脊椎炎Table of Contents1. HLA 和HLA分型檢測(cè)2. HLA 分型方法比較3. 強(qiáng)直柱脊椎炎Table of Contents什么是HLAMHC、HLA、亞型、關(guān)聯(lián)什么是HLA分型 I型，II型，III型，IV型HLA分型與疾病檢測(cè)骨髓與器官移植，免疫性疾病，代謝性疾病，神經(jīng)內(nèi)科疾病，骨科疾病等 基本概念 人類(lèi)白細(xì)胞抗原h(huán)uman leukocyte antigen , HLA MHCMajor histocompatibility complex，主要組織相容性復(fù)合

2、體（包括HLA、H-2、ChLA、RhLA、DLA、 SLA、RLA、GpLA、B等）1940年代，Snell和Gorer小鼠間的腫瘤及皮膚移植試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：決定小鼠間移植排斥與否（即組織相容性）的基因位于17號(hào)染色體短臂命名為組織相容性-2（H-2） H-2是一個(gè)由許多緊密連鎖的基因位點(diǎn)構(gòu)成的復(fù)雜系統(tǒng)1950年代Dausset經(jīng)產(chǎn)婦血清進(jìn)行個(gè)體之間抗體與白細(xì)胞凝集和細(xì)胞毒試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)人的MHC，命名為HLA 基因位于第6號(hào)染色體短臂 1960年代，Benacerraf 不同品系的豚鼠對(duì)一些抗原的免疫應(yīng)答能力比較發(fā)現(xiàn)：控制機(jī)體對(duì)不同抗原的免疫應(yīng)答能力的基因（Ir基因）位于MHC基因復(fù)合體內(nèi)。Benac

3、erraf、Dausset和Snell三位科學(xué)家分別從不同角度對(duì)MHC的免疫遺傳學(xué)進(jìn)行的開(kāi)拓性研究，榮膺1980年的諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理獎(jiǎng)。 HLA共分為4型：I型分子包括HLA-A、HLA-B和HLA-C，廣泛存在與各種組織細(xì)胞中；II型分子包括HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR，存在于B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和活化T細(xì)胞中；III型分子為補(bǔ)體系統(tǒng)，包括C2和C4位點(diǎn)，存在于血清中；IV型分子可能是一些分化抗原，只存在于淋巴細(xì)胞、某些細(xì)胞毒性T細(xì)胞和白細(xì)胞中。HLA分型 HLA基因系統(tǒng)的多態(tài)性及一些主要基因座位的等位基因數(shù)正式命名顯示多態(tài)性的HLA基因座位有31個(gè)，共2 320個(gè)等位基因。 圖中所

4、示為常見(jiàn)基因座位的等位基因數(shù)。及一些主要基因座位的等位基因數(shù)正式命名顯示多態(tài)性的HLA基因座位有31個(gè)，共2 320個(gè)等位基因。 圖中所示為常見(jiàn)基因座位的等位基因數(shù)。HLA分型的基本檢測(cè)方法： 細(xì)胞學(xué)方法測(cè)抗原特異性（型） 血清學(xué)方法測(cè)抗原特異性（型） （微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)） 分子生物學(xué)方法測(cè)等位基因 PCR/SSP PCR/Luminex PCR/SBT PCR/二代測(cè)序 PCR/流式細(xì)胞儀HLA抗原和等位基因命名:用血清學(xué)及細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)抗原特異性: HLA-B27, HLA-DR4（血清學(xué)方法） HLA-DPw2（細(xì)胞學(xué)方法）用分子生物學(xué)方法檢測(cè)等位基因： HLA-DRB1*04 05

5、位點(diǎn)名主型等位基因序號(hào)HLA-B*27 07例如HLA-B27HLA-B*2701HLA-B*2702HLA-B*2703HLA-B*2704HLA-B*27051HLA-B*27052HLA-B*2706HLA-B*2707HLA-B*2708HLA-B*2709HLA-B*2710HLA-B*2711.HLA-B*2723Loci Considered to be Matched ACBDRDQDP4 M bpFathersMothersHLA: 無(wú)血源相關(guān) 10/10 同胞兄妹 單倍型全相合，半相合 父母親 半相合 17臍血干細(xì)胞移植外周血干細(xì)胞移植骨髓干細(xì)胞移植 常見(jiàn)HLA與疾病關(guān)聯(lián)疾

6、病 HLA抗原 相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)強(qiáng)直性脊椎炎 B27 89.8Behcet綜合征 B51 10-15多發(fā)性硬化癥 DR2 4.8乳糜瀉 DR3 10.8Graves病 DR3 3.7系統(tǒng)性紅斑狼瘡 DR3 5.8類(lèi)風(fēng)關(guān) DR4 4.2胰島素依賴型糖尿病 DR3/DR4 25.0重癥肌無(wú)力 DR3 2.5小結(jié) HLA的三個(gè)特性使其成為熱點(diǎn)：決定組織相容性 高度多態(tài)性與疾病關(guān)聯(lián)1. HLA 和HLA分型檢測(cè)2. HLA 分型方法比較3. 強(qiáng)直柱脊椎炎Table of ContentsHLA 基因分型 低分辨: SSPrSSO Luminex bead for class I & class II中等分辨H

7、LA分型24Next generation sequencing高分辨高通量HLA分型Illumina Sequencing by Synthesis (SBS) chemistryMiSeqPacific Biosciences - Single-molecule real-time sequencing27Sequencing based typing (SBT)高等分辨HLA分型 Sanger 測(cè)序原理Sanger 測(cè)序原理ATAGCTAGTGAACGTCAGT35TATCGA53ACGTACGdNTPddNTP- DyesATAGCTAGTGAACGTCAGT35TATCGCA53TA

8、TAGCTAGTGAACGTCAGT35TATCGCA53TTGATAGCTAGTGAACGTCAGT35TATCGCA53TGCTGAACACGTACGT Sanger 測(cè)序原理ATAGCTAGTGAACGTCAGT35TATCGA53ATAGCTAGTGAACGTCAGT35TATCGCA53TATAGCTAGTGAACGTCAGT35TATCGCA53TGATAGCTAGTGAACGTCAGT35TATCGCA53TGCTGAACHLA分型模板的擴(kuò)增Long PCR (each: HLA-A, -B, -C, -DR, -DQ, DP, MICA)2. Amplicons (PCR: e

9、xon + loci) Long PCR to amplify the target gene/cgi/doi/10.1073/pnas.1206614109Assembly and AlignmentProblems in sequence assemblyAmplicons - HLA CoverageHLA-AHLA-BHLA-CHLA-DQB1HLA-DPB1HLA-DQA1HLA-DRB1HLA-DRB3HLA-DRB4HLA-DRB5HLA-DPA14.1kb2.6kb4.2kb10.3kb9.7kb7.3kb7.1kb4.1kb1. HLA 和HLA分型檢測(cè)2. HLA 分型方法

10、比較3. 強(qiáng)直柱脊椎炎Table of ContentsAS的病因基因有關(guān)：HLA-B27的轉(zhuǎn)基因大鼠成功地培育出強(qiáng)直性脊柱炎的動(dòng)物模型。目前已發(fā)現(xiàn)包括B27在內(nèi)的3種基因與此病相關(guān)；并且有明顯家族發(fā)病傾向。免疫有關(guān)：MHC，T-Cells感染有關(guān)：相關(guān)學(xué)說(shuō)認(rèn)為，來(lái)自尿道、前列腺、精囊的抗原經(jīng)Batson循環(huán)到達(dá)骶髂關(guān)節(jié)、脊柱和眼睛等部位而發(fā)生相關(guān)病變，解釋了男性好發(fā)的原因。AS的經(jīng)典檢查體征： 骶髂關(guān)節(jié)炎檢查：“4”字試驗(yàn)、骶髂關(guān)節(jié)壓迫試驗(yàn)、髂棘推壓試驗(yàn)、骨盆擠壓試驗(yàn)附著點(diǎn)炎檢查：坐骨結(jié)節(jié)、肋軟骨、肋胸關(guān)節(jié)、恥骨聯(lián)合等壓痛脊柱和胸廓檢查：Schober試驗(yàn)、指地距、枕墻距、胸廓活動(dòng)度等骶髂關(guān)

11、節(jié) AS的經(jīng)典檢查B27測(cè)序的AS檢查HLA-B27陰性的AS約5-10%的AS患者為HLA-B27陰性AS患者的HLA-B27陽(yáng)性率達(dá)90-95%我國(guó)漢族人群HLA-B27陽(yáng)性率2-7%（3千萬(wàn)-1億），AS患病率為0.3%（4百萬(wàn)），大部分HLA-B27陽(yáng)性者并不發(fā)生AS。HLA-B27與AS患病率：0.3%，20-30歲，男女比例 10:1，有家族傾向；主要侵犯：中軸關(guān)節(jié)（骶髂關(guān)節(jié)、脊柱骨突、脊柱旁軟組織）可伴發(fā)外周關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，嚴(yán)重者發(fā)生脊柱畸形和關(guān)節(jié)強(qiáng)直B27檢測(cè)可作為有相關(guān)癥狀或高危人群AS早期的篩選方法！AS不是RA的一種特殊類(lèi)型！強(qiáng)直性脊柱炎類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎地區(qū)分布種族差異大

12、世界性性別分布男女女男年齡20-3030-50家族史明顯不明顯類(lèi)風(fēng)濕因子（）（）HLA基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因處于緊密連鎖不平衡，而HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因，僅僅是遺傳標(biāo)志。連鎖不平衡學(xué)說(shuō)分子模擬學(xué)說(shuō)關(guān)節(jié)源性肽假說(shuō)其他：T細(xì)胞受體庫(kù)假說(shuō)超抗原假說(shuō)B27修飾因子假說(shuō)Cys67模型B27抗原與某些G（-）菌之間存在類(lèi)似的分子結(jié)構(gòu)，能發(fā)生分子模擬或交叉反應(yīng)，機(jī)體免疫系統(tǒng)把B27當(dāng)作病原體抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生免疫損害。認(rèn)為關(guān)節(jié)源性肽只存在于關(guān)節(jié)組織中，特異性地由HLAB27提呈，正常情況下遞呈水平低，反應(yīng)T細(xì)胞處于耐受狀態(tài)；當(dāng)某些具有同源結(jié)構(gòu)蛋白的病毒或細(xì)菌感染時(shí)，

13、則可致敏耐受的T細(xì)胞，從而識(shí)別以低水平遞呈的關(guān)節(jié)源性肽，引起自身免疫反應(yīng)而損傷組織。長(zhǎng)沙能潤(rùn)醫(yī)學(xué)公司的優(yōu)勢(shì) 長(zhǎng)沙能潤(rùn)醫(yī)學(xué)成立于2010年，專注于：基因資源與基因檢測(cè)、腫瘤基因研究與轉(zhuǎn)化、免疫細(xì)胞治療和存儲(chǔ)。為醫(yī)療機(jī)構(gòu)、制藥與健康體檢公司提供特色精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)解決方案。 集團(tuán)旗下?lián)碛幸韵聵I(yè)務(wù)版塊：基因檢測(cè)、細(xì)胞治療、生物培訓(xùn)、生物雙創(chuàng)項(xiàng)目投資、精準(zhǔn)醫(yī)療科研。集團(tuán)還參股投資了免疫診斷試劑國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室、國(guó)家基因檢測(cè)技術(shù)示范中心、智慧醫(yī)院工程建設(shè)公司燕通生物、海南樂(lè)城合家精準(zhǔn)醫(yī)療醫(yī)院等機(jī)構(gòu)。與中科院、中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院、湖南師大醫(yī)學(xué)院及斯坦福、猶他、華盛頓、UAB、耶魯?shù)却髮W(xué)教授合作共建實(shí)驗(yàn)室。 在未來(lái)，集團(tuán)將以“基因科技服