重組人白細胞介素2課件

1、基因工程藥物之 重組人白細胞介素-2基因工程藥物 定義：先確定對某種疾病有預防和治療作用的蛋白質(zhì)，然后將控制該蛋白質(zhì)合成過程的基因取出來，經(jīng)過一系列基因操作，最后將該基因放入可以大量生產(chǎn)的受體細胞中去，這些受體細胞包括細菌、酵母菌、動物或動物細胞、植物或植物細胞，在受體細胞不斷繁殖過程中，大規(guī)模生產(chǎn)具有預防和治療這些疾病的蛋白質(zhì)，即基因疫苗或藥物。一、基本信息 （一）白細胞介素： 是由多種細胞產(chǎn)生并作用于多種細胞的一類細胞因子。由于最初是由白細胞產(chǎn)生又在白細胞間發(fā)揮作用，所以由此得名，現(xiàn)仍一直沿用。白細胞介素interleukin 縮寫為IL。 現(xiàn)在是指一類分子結(jié)構(gòu)和生物學功能已基本明確，具有

2、重要調(diào)節(jié)作用而統(tǒng)一命名的細胞因子，它和血細胞生長因子同屬細胞因子。兩者相互協(xié)調(diào)，相互作用，共同完成造血和免疫調(diào)節(jié)功能。白細胞介素在傳遞信息，激活與調(diào)節(jié)免疫細胞，介導T、B細胞活化、增殖與分化及在炎癥反應中起重要作用.（二）白細胞介素-2為多肽類免疫增強劑。是一種淋巴因子，能刺激T細胞增殖分化，誘導產(chǎn)生細胞毒性T淋巴細胞（CTL），增強自然殺傷（NK）細胞活性，激活產(chǎn)生淋巴因子的殺傷（LAK）細胞和腫瘤侵潤淋巴細胞（TIL），刺激B細胞增殖分化和分泌抗體，誘導干擾素和多種細胞因子的分泌。用于腫瘤輔助治療和癌性胸、腹水的治療il-2分子：il-2分子量為15kd，是含有113個氨基酸殘基的糖蛋白，

3、在人類由第4號染色體上的一個基因編碼。il-2具有一定的種屬特異性，人類細胞只對靈長類來源的il-2起反應，而幾乎所有種屬動物的細胞均對人的il-2敏感。il-2受體(il-2r)：il-2的靶細胞包括t細胞、nk細胞、b細胞及單核-巨噬細胞等。這些細胞表面均可表達il-2r。il-2r包含3條多肽鏈：1條為鏈，分子量55kd;1條為鏈，分子量75kd;另1條為鏈，分子量64kd。鏈的胞內(nèi)區(qū)較短，不能向細胞內(nèi)傳遞信號，而鏈和鏈的胞內(nèi)區(qū)較長，具有傳遞信號的能力。3種肽鏈單獨與il-2結(jié)合親和力較低，只有同時表達才能產(chǎn)生高度親和力。二、生產(chǎn)制備生產(chǎn)制備的方式主要有兩種：1、傳統(tǒng)工藝制備2、基因工程

4、制備其中以第二種方法為主基因工程制備流程IL-2 cDNA 文庫的構(gòu)建IL-2表達利用mRNA雜交篩選IL-2 cDNA克隆與質(zhì)粒載體pLY-4連接，并轉(zhuǎn)入大腸桿菌純化的IL-2制備包涵體，并用凝膠過濾層析純化cDNA文庫的構(gòu)建IL-2 mRNA逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄成單鏈cDNA末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶DNA聚合酶I雙鏈cDNA蔗糖密度梯度離心G-C加尾法插入到pBR322質(zhì)粒的PstI位點粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌得到IL-2 cDNA文庫cDNA末端連接dCMP殘基，寡聚（dG）1218為引物cDNA片段重組質(zhì)三、藥物信息 藥典中有以下三種藥物含有重組人白細胞素介素-2：1.注射用重組人白細胞介素-22.重組人

5、白細胞介素-2注射液3.注射用重組人白細胞介素-2（ ）注射用重組人白細胞介素-21.性狀及功效高效表達人白細胞介素-2的大腸桿菌，經(jīng)過發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的重組人白細胞介素-2凍干制成，含有適宜穩(wěn)定劑，不含添加劑和抗生素。外觀為白色或者微黃色疏松體，加滅菌注射水后迅速溶解為澄明液體。用于治療成人轉(zhuǎn)移性腎細胞癌（RCC）及黑色素瘤等惡性腫瘤，也適用于癌性胸腹水的控制 2.用法用量（1）. 全身用藥靜脈滴注：10萬一80萬國際單位；皮下注射：50萬100萬國際單位；介入動脈灌注：40萬l00萬國際單位（2）.區(qū)域與局部給藥 胸腹腔注射：30萬l00萬國際單位；腫瘤灶局部給藥：根據(jù)瘤體大小決

6、定用藥劑量。一般劑量為一次20萬國際單位(IU)。注：藥物采用氯化鈉溶解。重組人白細胞介素-2注射液1.性狀及功效(1).性狀高效表達人白細胞介素-2的大腸桿菌，經(jīng)過發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的重組人白細胞介素-2制成，含有適宜穩(wěn)定劑，不含添加劑和抗生素。外觀為無色或者微黃色澄明液體。(2).功效1.用于腎細胞癌、乳腺癌、膀胱癌、肝癌、直腸癌、淋巴癌、肺癌等惡性腫瘤的治療，用于癌性胸腹水的控制，也可以用于淋巴因子激活的殺傷細胞的培養(yǎng)。2.用于手術(shù)、放療及化療后的腫瘤患者的治療，可增強機體免疫功能。3.用于先天或后天免疫缺陷癥的治療，提高病人細胞免疫功能和抗感染能力。4.各種自身免疫病的治療，如

7、類風濕性關(guān)節(jié)炎等。5.對某些病毒性、桿菌性疾病、胞內(nèi)寄生菌感染性疾病，如乙型肝炎、麻風病、肺結(jié)核等具有一定的治療作用。 2.用法用量（1）.全身用藥：1)皮下注射：重組人白介素-2（125 Ala）60100萬IU/m2，皮下注射3次/周，6周為一療程。2) 靜脈注射：4080萬U/m2加生理鹽水500ml，滴注時間不少于4小時。3) 介入動脈灌注50100萬IU/次，24周一次，24次為一療程 。(2).區(qū)域與局部用藥： 1)胸腔注入：用于癌性胸腔積液，重組人白介素2（125 Ala）100200萬IU/m2次，盡量抽去腔內(nèi)積液后注入。2)腫瘤病灶局部給藥：根據(jù)瘤體大小決定用藥劑量，每次用量

8、不少于10萬IU，隔日一次,46次為一療程。 注射用重組人白細胞介素-2（ ）1.性狀及功效高效表達人白細胞介素-2 （ ）基因的大腸桿菌，經(jīng)過發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的重組人白細胞介素-2 （ ）凍干制成，含有適宜穩(wěn)定劑，不含添加劑和抗生素。外觀為白色或者微黃色疏松體，加滅菌注射水后迅速溶解為澄明液體。人白細胞介素-2 （ ）基因是人白細胞介素-2基因序列中原125位編碼半胱氨酸的序列突變?yōu)榫幋a絲氨酸的序列后的突變基因2.用法用量1.全身用藥：1)皮下(或肌肉)注射：重組人白介素-2()20-100萬國際單位/次，加2毫升無菌生理鹽水溶解，皮下(或肌肉)注射，1-2次/天。2)靜脈注射：6

9、0-200萬國際單位/次，加無菌生理鹽水500毫升，滴注時間不少于4小時。3)介入動脈灌注：100-200萬國際單位/次。2.區(qū)域與局部給藥：1)胸腹腔注入：用于癌性胸腹腔積液，重組人白介素-2()100-300萬國際單位/次，盡量抽去腔內(nèi)積液后注入，2-3次/周。2)心包積液：心包內(nèi)注射，200萬國際單位/次， 盡量抽去心包積液后注入，1次/周。3)腫瘤病灶局部給藥：根據(jù)瘤體大小決定用藥劑量，10-20萬國際單位/次，隔日一次。四、注意事項不良反應：各種不良反應中最常見的是發(fā)熱、畏寒、疲乏等，多與用藥劑量有關(guān)；個別患者可出現(xiàn)惡心、嘔吐、類感冒癥狀；皮下注射者局部可出現(xiàn)紅腫、硬結(jié)、疼痛；使用較

10、大劑量時，可能會引起毛細血管滲漏綜合征，表現(xiàn)為低血壓、體重增加等。神經(jīng)系統(tǒng)受到影響，可發(fā)生行為變化、認知障礙禁忌1、對本品成份有過敏史的病人。2、高熱、嚴重心臟病、低血壓者 嚴重心腎功能不全者、肺功能異?；蜻M行過器官移植者。3、重組人白細胞介素-2既往用藥史中出現(xiàn)過與之相關(guān)的毒性反應五、發(fā)展前景目前研究是對其在用藥前進行化學修飾，主要采用PEG修飾：1.具體有三聚氯氰活MPEG修飾2.MPEG 硝基苯基碳酸鹽修飾。3.修飾物和rhlu-2的投入比、反應環(huán)境的PH、修飾反應的時間、1%PEG4000的加入都會影響到修飾產(chǎn)物的活性。修飾后的產(chǎn)物經(jīng)過疏水層析和凝膠過濾即可被提純。目前已經(jīng)證明rhIL

11、-2 經(jīng)不同的 PEG 化處理后，其循環(huán)半衰期均有不同程度的提高。其水溶性也得到極大提高，可不用 SDS 助溶在常溫下保持長期穩(wěn)定。謝謝觀賞！一.白細胞介素1與白細胞介素2的區(qū)別？IL-1：又稱淋巴細胞刺激因子。1、細胞來源：主要由活化的單核巨噬細胞產(chǎn)生。2、存在形式：IL-1和IL-1。3、主要生物學功能：（1）、局部低濃度免疫調(diào)節(jié)：協(xié)同刺激APC和T細胞活化，促進B細胞增殖和分泌抗體。（2）、大量產(chǎn)生內(nèi)分泌效應：誘導肝臟急性期蛋白合成；引起發(fā)熱和惡病質(zhì)。IL-2：又稱T細胞生長因子，TCGF。1、細胞來源：主要由T細胞產(chǎn)生。2、作用方式：以自分泌和旁分泌方式發(fā)揮效應。3、主要生物學功能（1

12、）、活化T細胞，促進細胞因子產(chǎn)生；（2）、刺激NK細胞增殖，增強NK殺傷活性及產(chǎn)生細胞因子，誘導LAK細胞產(chǎn)生；（3）、促進B細胞增殖和分泌抗體；（4）、激活巨噬細胞。二.白細胞介素2對自身免疫疾病的作用機理?IL-2除可作為T細胞生長因子(TCGF) 促進T細胞的增殖分化外，還能限制T細胞的反應并產(chǎn)生免疫耐受.因而可用于自身免疫性疾病的防治。白細胞介素-2本身就是許多免疫抑制劑的作用靶點, 白細胞介素-2受體亞單位也是重要的治療靶點。因此, 應用特異的白細胞介素-2受體抗體進行選擇性治療可以最大程度地殺傷病原細胞,而對非亞單位細胞的不良反應限制到最小,因此用于治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡和類風濕性關(guān)節(jié)炎。三.IL-2受體怎樣與IL-2結(jié)合？白細胞介素-2通過與效應細胞膜上的專屬性受體( IL - 2R )結(jié)合而發(fā)揮作用。白細胞介素-2通過效應細胞膜上的白細胞介素-2受體發(fā)揮作用。白細胞介素-2受體由鏈、鏈和鏈3種亞基組成, 只有三者的聚合體才能構(gòu)成完整的高親和力的IL - 2R?？扇苄园准毎樗?2受體( sIL- 2R )是活化淋巴細胞膜表面白細胞介素-2受體鏈成分的Tac抗原。當IL- 2R從細胞膜上經(jīng)酶解脫落后進入血液，就形成了可溶性IL-2R( sIL-2R) ，在體液中，s1L-2R 可以與細胞膜