《動(dòng)物傳染病學(xué)（人畜共患）》課件2－11流感

1、動(dòng)物傳染病學(xué)教研室動(dòng)物傳染病學(xué)流 感 (Influenza virus, IV)一、概述流感(流行性感冒）：是由流行性感冒病毒（流感病毒）引起的急性高度接觸性傳染病，傳播迅速，呈流行性或大流行性。在人和哺乳動(dòng)物：發(fā)熱、有急性呼吸道癥狀；在禽類：急性敗血癥、呼吸道感染等多種臨癥表現(xiàn)。3次人類流感大流行：19181919：西班牙流感（2100萬(wàn)人死亡）19571958：亞洲流感19681969：香港流感人類流感大流行前后均有豬流感的流行Influenza in the print media“Spanish Flu” A(H1N1): 1918 -19Approximately 20 millio

2、n people died worldwide, and 600,000 in US2001 Trish Perl. All Rights Reserved. JHH Healthcare Epidemiology and Infection Control.The “ Spanish Flu 1918“Asian Flu” A(H2N2): 1957 - 58More than a million people died worldwide and about 70,000 in US2001 Trish Perl. All Rights Reserved. JHH Healthcare E

3、pidemiology and Infection Control.流行性感冒的病原體為流感病毒(influenza virus)，分為A、B、C三個(gè)型，屬于正粘病毒科。A型流感病毒可自然感染豬、馬、禽類和人，貂、海豹、鯨等動(dòng)物也可感染：常突然發(fā)生，迅速傳播，呈流行性或大流行性。B型流感病毒在自然情況下僅感染人，一般呈散發(fā)。C型流感病毒常感染兒童，多呈散發(fā)。動(dòng)物的種間傳播是流感流行病學(xué)的一個(gè)重要問(wèn)題。 病毒蛋白質(zhì)病毒粒子的主要蛋白成分：血凝素（HA）神經(jīng)氨酸（NA） 核蛋白（NP） 基質(zhì)蛋白(M1,M2) 聚合酶 （ PB1、PB2、PA） 非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1、NS2）抗原結(jié)構(gòu)：表面抗原（纖突

4、）： 血凝素（HA)：使病毒吸附與易感細(xì)胞的表面受體，誘導(dǎo)病毒囊膜核細(xì)胞膜融合 神經(jīng)氨酸酶（NA)：水解細(xì)胞表面受體特異性神經(jīng)氨酸 A型亞型多,易變異：HA(H1-H16),NA（N1-N9) B型不易變異，無(wú)亞型 C型囊膜內(nèi)只有一種糖蛋白（HEF)內(nèi)部抗原：核蛋白（NP)、基質(zhì)蛋白（M1、M2)二、禽流感（Avian Influenza ，AI） 香港1997年流感事件中，有18人感染禽流感，6人死亡，嚴(yán)重制約了香港的經(jīng)濟(jì)發(fā)展，影響了社會(huì)穩(wěn)定，引起了世界恐慌。為撲殺150萬(wàn)只家禽， 損失超過(guò)10億港幣。 越南、泰國(guó)出現(xiàn)了H5N1亞型禽流感病毒感染人的病例。 （一）、概述1、病的特征 （1）A

5、I是由A型流感病毒（AIV）中任何一血清型毒株引起的各種家禽及野生禽類感染或發(fā)生疫病綜合癥的傳染性疾病。（2）臨診特征： 呼吸道癥狀、 精神萎頓、 食欲減退。 種雞的產(chǎn)蛋量和孵化率嚴(yán)重下降（3）有多種流行形式： 有時(shí)呈致死率極低的呼吸道感染， 有的僅引起短期的產(chǎn)蛋量下降， 有的引起額竇炎、腹瀉、腫頭和冠發(fā)紺等癥狀。死亡率1%至100% 1878年，意大利的雞群中暴發(fā)一種嚴(yán)重疾病。當(dāng)時(shí)稱雞瘟。 1901年，有人認(rèn)為本病由“可過(guò)濾”病毒引起。 1955年，證實(shí)雞瘟病毒是A型流感病毒。為與新城疫病毒相區(qū)別 由A型流感病毒引起的雞瘟就稱為真性雞瘟或歐洲雞瘟。 新城疫稱為亞洲雞瘟、假性雞瘟或偽雞瘟。2、

6、別名：1、AIV屬于正粘病毒科(Orthomyxoviridae) 流感病毒屬的一個(gè)成員。（二）、病原2、核酸類型為負(fù)股單鏈RNA，由8個(gè)片斷組成，共編碼8種結(jié)構(gòu)蛋白和2種非結(jié)構(gòu)蛋白。血凝素（HA） 神經(jīng)氨酸（NA） 核蛋白（NP） 基質(zhì)蛋白（M1、M2） 聚合酶（PB1、PB2、A） 非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1、NS2）3、病毒粒子直徑80-120nm。呈球形、桿狀和長(zhǎng)絲狀。其表面有一層由雙層脂質(zhì)構(gòu)成的囊膜，囊膜鑲嵌著 HA 、NA。 4、基因變異決定病毒的抗原性和致病性。變異率最高的是HA，其次是NA。這兩種抗原變異可獨(dú)立發(fā)生，有時(shí)只涉及一個(gè)（HA或NA），有時(shí)兩個(gè)同時(shí)發(fā)生變異?？乖儺惪煞譃榭乖?/p>

7、漂變 和抗原漂移 病毒的變異 抗原的漂變（Antigenic shift） 2個(gè)或2個(gè)以上不同亞型的病毒感染1個(gè)細(xì)胞，病毒基因可在細(xì)胞內(nèi)重排，而導(dǎo)致HA或NA抗原的突變。 突變幅度大，產(chǎn)生新的亞型。導(dǎo)致大流性抗原漂移（Antigenic Drift） H 、N蛋白的基因組自發(fā)的點(diǎn)突變引起小幅度的抗原性變異。 常引起地方性流行。流感病毒基因重排示意圖抗原性重組株宿主細(xì)胞親代株病毒H3N2H1N1混合感染H3N2重組子代病毒H1N1H1N2H3N1通過(guò)基因重排有可能產(chǎn)生高致病力的毒株。來(lái)自不同宿主的病毒也易發(fā)生基因置換，病毒的這一特性，加之易感動(dòng)物的復(fù)雜、多種，使本病的防制更加困難。（三）、流行病

8、學(xué)特點(diǎn)1.易感動(dòng)物： 多種家禽和野禽。2.傳染來(lái)源：病禽及康復(fù)后帶毒禽。3.傳染途徑：病毒主要從呼吸道、眼結(jié)膜和糞便排出，污染飼料、飲水、器具等，同時(shí)也可以通過(guò)人和昆蟲、共用設(shè)備和市場(chǎng)服務(wù)而傳染。4.傳播途徑：水平傳播，尚無(wú)足夠的證據(jù)表明本病可垂直傳播。動(dòng)物的種間傳播是由于病毒發(fā)生了重組所致。（四）、病狀及病理變化潛伏期： 一般為4-5天，潛伏期的長(zhǎng)短依賴于感染病毒的數(shù)量和毒力強(qiáng)弱、被感染的禽種以及感染途徑不同而有較大的差異。1急性型 （也稱高致病性禽流感） 病狀特點(diǎn)：在本病發(fā)生初期，突然爆發(fā)，傳播迅速，在未出現(xiàn)前驅(qū)病癥時(shí)而發(fā)病死亡。病程稍長(zhǎng)的病例出現(xiàn)： 精神萎頓、食欲消失、羽毛松亂、 體溫升

9、高、呼吸困難、深度昏睡。病變特點(diǎn)：病程稍長(zhǎng)的病例，如下特點(diǎn)：（1）消化道病變明顯，如口腔粘膜、腺胃、肌胃角質(zhì)膜下及十二指腸粘膜出血，尤其是與肌胃連接部的腺胃粘膜表面有出血點(diǎn)。（2）腿部、胸部肌肉、胸骨內(nèi)面及腹部脂肪有散在性出血點(diǎn)。少數(shù)病例呈現(xiàn)脫水,干腳, 腳鱗片下出血。 （3）頭、頸及胸部皮下組織水腫。正常雞(左)和上海毒株(右)對(duì)比。病理變化：腳掌,脛部鱗片出血,呈紫黑色冠和肉髯發(fā)黑或高度水腫頭部和眼瞼水腫、流淚雞冠,肉髯出血,呈紫黑色（4）心包膜增厚、心包積液，心外膜有點(diǎn)狀出血或出現(xiàn)灰黃色壞死性病灶，心肌弛緩柔軟。（5）肝腫大出血，肺出血性壞死，胰臟有點(diǎn)狀壞死及出血。肝臟腫脹出血冠狀脂肪有

10、點(diǎn)狀出血 花斑腎 肺臟嚴(yán)重充血出血, 呈黑褐色腦部嚴(yán)重充血,出血腦部出血喉頭,氣管出血十二指腸出血盲腸出血（6）卵泡及輸卵管充血或出血，卵黃變稀，易破裂。以至病死的母雞腹腔有大量新鮮蛋黃。引起卵黃性腹膜炎。 2呼吸道型 病狀特點(diǎn)： 呼吸道癥狀：咳嗽、打噴嚏、呼吸有咯咯音。鼻竇腫脹，流鼻液，喉頭出血，氣管出血，有多量黏液。有些病例，水樣糞便，呈灰綠色?；记菀粋?cè)或兩側(cè)眼睛發(fā)炎，流淚。發(fā)病率高，死亡率低，如果有其他并發(fā)癥時(shí)，死亡率增高。蛋雞患病后產(chǎn)蛋量、孵化率突然下降。 病變特點(diǎn)：結(jié)膜炎、鼻竇炎、氣管炎。 濾泡變形、輸卵管退化。嚴(yán)重的病例可見氣囊及鼻竇內(nèi)有干酷樣滲出物。 （五）、診 斷 1病毒分離：

11、 取病料制成勻漿，用滅菌生理鹽水作5-10倍稀釋，加青鏈霉素各2000單位，30 1h 或4 6h，3000rpm30分鐘，取上清接種10-12日齡SPF雞胚收獲培養(yǎng)24、48、72h雞胚尿囊液在SPF胚上繼代2-3代。 2病毒鑒定：用HA試驗(yàn)測(cè)定雞胚成分中的血凝活性。排除NDV的存在：用新城疫抗血清與分離毒株進(jìn)行HI試驗(yàn)。用AGP抗原與陽(yáng)性血清進(jìn)行瓊擴(kuò)試驗(yàn)，在48h內(nèi)兩者之間產(chǎn)生白色沉淀線。 電鏡觀察。動(dòng)物回歸試驗(yàn)3、血清學(xué)診斷：國(guó)際通用的兩種主要的標(biāo)準(zhǔn)方法：（1）AGP:利用AIV的NP Ag檢查Ab，簡(jiǎn)便快捷、特異性強(qiáng)，不受病毒亞型的限制，但靈敏性較低。（2）HI:主要用來(lái)鑒定AIV的H

12、A亞型，采集急性期和康復(fù)期（發(fā)病后2-4周）的禽血清作比較很重要。禽流感系列快速檢測(cè)方法的建立與試劑盒研制抗原檢測(cè)試劑盒:NP-ELISA （通用型）NP-LAT （通用型）HA-LAT （H5亞型）H5試紙條 （H5亞型）HA-ELISA（H5亞型）陰性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照陰性樣品陽(yáng)性樣品 陽(yáng)性結(jié)果 陰性結(jié)果禽流感病毒H5亞型快速檢測(cè)試紙條成品1:16 稀釋度的檢測(cè)結(jié)果1:32 稀釋度的檢測(cè)結(jié)果與韓國(guó)試紙條敏感性的比較檢測(cè)帶（陽(yáng)性）1：1281：2561：512陰性對(duì)照與韓國(guó)試紙條敏感性的比較抗體檢測(cè)試劑盒H5 -LAT （H5亞型）NS1-ELISA （鑒別）NP-ELISA （通用型）H5 -

13、HA-ELISA H9- HA-ELISA試劑盒成品特異性為93.1%.敏感性為94.6%.批內(nèi)重復(fù)的吸收變異系數(shù)在3.28%-8.54%之間.批間重復(fù)的吸收變異系數(shù)在3.63%-9.49%之間.（六）、鑒別診斷1 HI試驗(yàn)排除NDV2急性暴發(fā)時(shí)，死亡急劇、潛伏期短、患雞深度昏睡，約80%病雞頭部或頸部出現(xiàn)滲出性腫脹。3禽流感能凝集馬、驢、騾、綿羊、山羊的紅細(xì)胞，而NDV與這些動(dòng)物的紅細(xì)胞不發(fā)生反應(yīng)。（七）、防 制 1、當(dāng)由禽流感高致?。℉PAI）毒株引起暴發(fā)時(shí)，禁止進(jìn)行免疫接種，采取撲滅的程序（檢疫、屠殺、處理和凈化）。 在HPAI疫區(qū)的防疫措施： （1）控制禽類及其產(chǎn)品貿(mào)易，屠宰受感染的禽

14、 ， （2）屠宰后的禽舍進(jìn)行徹底清掃、消毒處理。 （3）空欄，經(jīng)過(guò)3-4周間隔期再重新飼養(yǎng)。 （4）控制人員流動(dòng)，實(shí)施嚴(yán)格的衛(wèi)生安全措施。 2、中等毒力以下的AI雞場(chǎng)，在劃定地區(qū)，在一定范圍內(nèi)，可用當(dāng)?shù)亓餍兄曛瞥蓽缁钣腿閯﹩蝺r(jià)苗或多價(jià)苗如：H5+H7+H9，減少雞群的發(fā)病率和死亡率，保護(hù)母雞的產(chǎn)蛋量。3、免疫程序：10-12日齡，首免，可接種AI油乳劑滅活苗 。 產(chǎn)蛋前三周后備母雞，可用加倍量的AI油乳劑苗進(jìn)行二免。整個(gè)產(chǎn)蛋期均可獲得保護(hù)。發(fā)展基因工程疫苗 H5亞型基因重組桿狀病毒昆蟲細(xì)胞表達(dá)亞單位疫苗。 H5、H7亞型AIV HA基因的重組禽痘病毒，可誘導(dǎo)雞產(chǎn)生有效的免疫保護(hù)反應(yīng)。AI滅活苗

15、在控制疫情的同時(shí)， 增加了疫病監(jiān)測(cè)中區(qū)分疫苗免疫與自然感染的難度。三、豬流感（Swine Influenza）豬流感感冒（Swine Influenza ,SI）主要引起豬發(fā)生急性、高度接觸性、群發(fā)性呼吸道疾病，臨床的突發(fā)、高熱、咳嗽、呼吸困難、反復(fù)發(fā)作、衰竭為特征可引起妊娠母豬流產(chǎn)或產(chǎn)弱仔。該病一旦發(fā)生，傳播迅速可直接引起患病豬死亡，各年齡性別和品種豬均能感染。發(fā)病率、肉料比降低，對(duì)豬群健康狀態(tài)和質(zhì)量影響很大。 （一）概述 正粘病毒科-流感病毒屬，A型流感病毒。 核酸類型為負(fù)股單鏈RNA 8個(gè)獨(dú)立片斷組成，編碼8種結(jié)構(gòu)蛋白和2種非結(jié)構(gòu)蛋白其表面有一層由雙層脂質(zhì)構(gòu)成的囊膜(二)、豬流感病原病毒

16、粒子直徑80-120nm。多形性呈球形、桿狀和長(zhǎng)絲狀。病毒的形態(tài)及結(jié)構(gòu)遺傳變異是流感病毒的重要特點(diǎn) 抗原性變異是A型流感病毒常見的一種自然變異，決定病毒的抗原性和致病性。變異率最高的是HA，其次是NA。這兩種抗原變異可獨(dú)立發(fā)生，有時(shí)只涉及一個(gè)（HA或NA），有時(shí)兩個(gè)同時(shí)發(fā)生變異。 抗原漂移（Antigenic shift) 抗原漂變（Antigenic drift）。（三）、臨床癥狀及病理變化病豬突然發(fā)病，體溫升高到420C；精神不振，食欲減退，飲欲增加。常臥地不起，打堆，不愿走動(dòng)；流清水或濃稠鼻涕，眼分泌物增多，眼結(jié)膜潮紅；陣發(fā)性咳嗽，痙攣性呼吸，有的呼吸極度困難；可表現(xiàn)肌肉和關(guān)節(jié)有痛感，觸

17、摸時(shí)敏感。母豬流感 懷孕期間感染，可引起流產(chǎn)，產(chǎn)死胎和早產(chǎn)； 產(chǎn)下后25天發(fā)病嚴(yán)重，有些在哺乳及斷奶前后死亡。 流產(chǎn) (5-10% 2-3 周 ) 產(chǎn)弱仔 主要在呼吸器官：咽喉、氣管、支氣管、細(xì)支氣管充血、水腫，并含有大量白色泡沫狀的粘液，有時(shí)混有血液；頸淋巴結(jié)和縱隔淋巴結(jié)腫大，充血和水腫。病變部主要集中在心葉，尖葉和中間葉，而膈葉沒(méi)有明顯的病變肺病變部呈紅色如鮮牛肉狀，界限分明，周圍組織有氣腫，呈蒼白色。常為不規(guī)則對(duì)稱。攻毒豬只的肺部有明顯的病變，其顏色為鮮紅色，與周圍組織界限分明氣管內(nèi)有白色泡沫從腹面可以看到肺部明顯的病變慢性病例，表現(xiàn)為胃腸炎。胃外壁有出血點(diǎn)，胃內(nèi)大面積的出血；腸道出血，

18、十二指腸出血。四、診斷技術(shù)1、病毒分離和鑒定 雞胚和MDCK細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng) 血凝抑制試驗(yàn)和神經(jīng)氨酸酶 抑制試驗(yàn)鑒定病毒 采取發(fā)熱初期的鼻咽分泌物， 接種于911日齡雞胚或犬腎細(xì)胞上370C培養(yǎng)35天，取羊水或細(xì)胞培養(yǎng)物作HAHI以確定其亞型 1:101:201:401:801:1601:3201:640RBCaloneRBC &virusSerum dilution2、血凝抑制試驗(yàn)：一般采取患豬急性期和恢復(fù)期（相隔1021天）的雙份血清樣品3、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)：方便敏感性好，特異性高，檢測(cè)抗原和抗體。豬免疫后7天可檢測(cè)抗體。 建立的ELISA的診斷方法 4、免疫組織化學(xué)試驗(yàn)：檢測(cè)新鮮病料，而且可

19、以檢測(cè)固定良好沒(méi)有喪失組織完整性的病料。TUNEL染色肺部Immunofluorescence4、熒光抗體試驗(yàn)：鑒別被病毒感染的細(xì)胞M：DNA MARKER1：上海毒株2：福建毒株3：湖北毒株4，5：陰性對(duì)照RT-PCR的模板為鼻拭子5、快速診斷RT-PCR：6、動(dòng)物試驗(yàn)： 病料常規(guī)處理后， 每只小白鼠或家兔顱內(nèi)接種0.10.5毫升， 或取0.52毫升腹腔或靜脈注射。 顱內(nèi)接種的動(dòng)物在2472小時(shí)后出現(xiàn)強(qiáng)直性或陣發(fā)性驚厥、痙攣或者死亡。 （五）、防 制 1、藥物治療飲水中加入金剛烷，加入止咳化痰的藥物，可以減輕患豬的癥狀；肌肉注射鎮(zhèn)痛藥物，如復(fù)方氨基比林或安乃近；防止并發(fā)或繼發(fā)感染患豬還需注射

20、抗菌藥，如丁胺卡那霉素或頭孢拉啶肌肉注射。清熱解毒，調(diào)解腸胃，保持畜舍清潔干燥，避免應(yīng)激刺激。平時(shí)飼料和飲水中加入藥物，也可以起到預(yù)防的作用。2、疫苗預(yù)防：滅活苗進(jìn)行兩次免疫，間隔一個(gè)月。一般為斷奶時(shí)首免。 自家疫苗：亞型很多，交叉保護(hù)力很弱，當(dāng)?shù)刎i流感分離株或當(dāng)?shù)匮逍偷亩局曛泼?，效果好?重組株和人工活載體疫苗：轉(zhuǎn)基因技術(shù)研制豬流感病毒重組株和人工活載體疫苗。PCR篩選重組中間轉(zhuǎn)移質(zhì)粒構(gòu)建IBRS-2 細(xì)胞檢測(cè)FITCWestern-blotTK-/gE-/ /gI-/ LacZ+轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)移載體pIECMVAIV基因克隆重組病毒獲得禽流感病毒免疫原性基因重組偽狂犬病毒毒株的構(gòu)建3、綜合防制

21、規(guī)范的飼養(yǎng)管理和嚴(yán)格的消毒措施。保護(hù)豬攔清潔及干燥、防寒和保暖。定期消毒和驅(qū)蟲 定期進(jìn)行血清學(xué)監(jiān)測(cè)，加強(qiáng)監(jiān)測(cè)豬流感。 全進(jìn)全出唯一的能在短時(shí)間內(nèi)引起世界范圍大爆發(fā)的傳染病流感的每次大流行都給人類帶來(lái)了巨大的災(zāi)難，20世紀(jì)人類爆發(fā)四次流感大流行。（六）、豬流感的 公共衛(wèi)生意義1、豬流感的歷史與人流感的歷史緊密相連 1918年:豬流感在美國(guó)中西部第一次被清楚認(rèn)識(shí)。1930年：肖普（Shope)第一次分離到豬流感病毒， 古典豬H1N1?，F(xiàn)在的研究表明：H1N1和H3N2豬流感病毒與同年引起人流感大流行的H1N1和H3N2人流感病毒遺傳關(guān)系十分密切。后經(jīng)血清學(xué)追朔研究認(rèn)為，西班牙流感流行病原為豬型（H1N1）流感病毒。1976年，美國(guó)一名新兵感染豬源的H1N1病毒而死于肺