最終滅菌注射劑的質(zhì)量控制

1、 最終滅菌注射劑質(zhì)量控制 1污染微生物的來源內(nèi)源性的影響因素空氣凈化系統(tǒng)水工藝過程物料 外源性的影響因素人員 2芽孢是關(guān)鍵控制點(diǎn)G+G-微生物無處不在氣源性微生物革蘭氏陽性菌較多它們可形成芽孢，難以殺滅因此，藥品生產(chǎn)需要HVAC水源性則革蘭氏陰性菌居多不會(huì)生成孢子但會(huì)形成細(xì)菌內(nèi)毒素3一、什么是芽孢？當(dāng)某些細(xì)菌遇到不良生存環(huán)境條件時(shí)，為保護(hù)自身，在細(xì)胞內(nèi)形成一外壁厚而堅(jiān)硬的體眠體，該體眠體即稱芽孢（Spore）或孢子。由于其對(duì)不良環(huán)境的耐受性遠(yuǎn)高于生長態(tài)細(xì)胞，常被用于挑戰(zhàn)滅菌工藝，以確認(rèn)被滅菌物品無菌的可靠性。4芽孢的特性主要產(chǎn)生于Gram+ 細(xì)菌的兩個(gè)屬芽孢桿菌屬 Bacillus梭菌屬 Cl

2、ostridium能抵御各種惡劣環(huán)境，可存活上百萬年，因?yàn)樗泻竦钠咏Y(jié)構(gòu)僅含核酸及少量萌發(fā)必需物含水量極低休眠體，內(nèi)生孢子，不可再生（每個(gè)細(xì)胞只產(chǎn)生一個(gè)芽孢）；真菌孢子屬于分生孢子，不具上述特性。5細(xì)菌芽胞（孢）的形成及其特性成熟芽孢孢子壁母細(xì)胞孢子壁的形成生長態(tài)細(xì)胞6熱對(duì)活細(xì)胞的作用有一種可引發(fā)克雅氏綜合癥 (Creutzfekldt- Jakob）的普里昴 ( prion）病原體，在132下加 一小時(shí)才可完全殺滅（克雅氏綜合癥：俗稱人體瘋牛?。┬柩蹙械难挎邨U菌屬(Bacillus)和厭氧菌中的梭狀芽孢桿菌屬(Clostridium)，耐熱性較強(qiáng)它們能產(chǎn)生內(nèi)源性孢子/芽孢，或胞間休眠體，

3、對(duì)熱、干燥及化學(xué)消毒劑的耐受性大大增強(qiáng)這類芽孢的干熱滅菌溫度一般在100 170，濕熱滅菌的溫度則在80 129之間。7從“欣弗”事件談滅菌工藝欣弗事件的發(fā)生2006年7月安徽華源克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液不良事件報(bào)告81例，涉及10個(gè)省份8欣弗到底怎么了？9克林霉素磷酸酯注射劑產(chǎn)品的調(diào)查克林霉素磷酸酯氯化鈉注射（100ml:0.6g）采用半無菌工藝生產(chǎn)滅菌條件100、7分鐘貯存條件陰涼有效期1年有些企業(yè)的處方中含有苯甲醇穩(wěn)定性考察有一批留樣的有關(guān)物質(zhì)為7.9有關(guān)物質(zhì)總雜不得過8.0 單雜不得過5.010克林霉素磷酸酯注射劑產(chǎn)品的調(diào)查克林霉素磷酸酯注射液（2ml:0.3g）滅菌條件100、31

4、0分鐘貯存條件遮光、密閉保存有效期2年處方中含有苯甲醇有關(guān)物質(zhì)總雜不得過6.0（2004年底改為8.0）單雜不得過4.011從上述調(diào)查看國內(nèi)滅菌注射劑生產(chǎn)的缺陷對(duì)滅菌的認(rèn)識(shí)不正確產(chǎn)品研發(fā)未考慮滅菌工藝的可行性忽視工藝的可行性，盲目跟風(fēng)報(bào)批注射劑用原料藥的雜質(zhì)控制不嚴(yán)忽視產(chǎn)品的安全性12中國醫(yī)藥報(bào) 2007年1月4日 A6版13無菌藥品常用滅菌工藝的比較類別Fo值微生物存活概率要點(diǎn)說明過度殺滅法Fo1210-6熱穩(wěn)定性產(chǎn)品以殺滅微生物作為實(shí)現(xiàn)無菌的手段殘存概率法8Fo710-3不能加熱的產(chǎn)品不能除去病毒、支原體等微生物L(fēng)RV=log reduction value 過濾對(duì)數(shù)下降值一般上游為107

5、下游為1，則LRV=7由于操作較多，最終產(chǎn)品達(dá)到的無菌保證水平遠(yuǎn)低于除菌過濾的水平14影響濕熱滅菌效果的因素待滅菌產(chǎn)品中含有微生物的種類和數(shù)量待滅菌產(chǎn)品的包裝形式待滅菌產(chǎn)品的裝載方式和裝載數(shù)量濕熱滅菌工藝條件濕熱滅菌設(shè)備15無菌保證水平SAL無菌保證水平（Sterility Assurance Level）表示物品被滅菌后的無菌狀態(tài)按國際標(biāo)準(zhǔn)，濕熱滅菌法的無菌保證值不得低于10-6，即滅菌后微生物存活的概率不得大于百萬分之一。16滅菌工藝驗(yàn)證的必要性滅菌產(chǎn)品的無菌保證不能依賴于最終產(chǎn)品的無菌檢驗(yàn)，而是取決于生產(chǎn)過程中采用合格的滅菌工藝、嚴(yán)格的GMP管理和良好的無菌保證體系滅菌工藝的驗(yàn)證是無菌保

6、證的必要條件滅菌工藝經(jīng)過驗(yàn)證后，方可正式用于生產(chǎn)17國內(nèi)企業(yè)滅菌工藝驗(yàn)證常見缺陷無包裝規(guī)格無裝載方式未對(duì)每一種產(chǎn)品每一種包裝規(guī)格的每一種裝載方式進(jìn)行驗(yàn)證采用留點(diǎn)溫度計(jì)監(jiān)測溫度無溫度探頭校準(zhǔn)記錄驗(yàn)證的滅菌工藝與實(shí)際工藝不一致未驗(yàn)證最差滅菌條件設(shè)定的驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)達(dá)不到無菌保證水平（SAL）10-6生物指示劑使用不規(guī)范18滅菌工藝檢查要點(diǎn)生產(chǎn)環(huán)境和待滅菌產(chǎn)品中含有微生物的種類和數(shù)量研究和監(jiān)控待滅菌產(chǎn)品的包裝形式、裝載方式和裝載數(shù)量滅菌工藝條件滅菌設(shè)備關(guān)鍵控制參數(shù)的控制和記錄儀表的校準(zhǔn)設(shè)備維護(hù)和維修滅菌的記錄滅菌工藝的驗(yàn)證選用的生物指示劑熱分布試驗(yàn)，找出最冷點(diǎn)位置無菌檢驗(yàn)樣品的取樣19無菌檢查20無菌

7、檢查的局限性無菌的定義理論上：無菌沒有任何活的微生物實(shí)際上：我們無法證明產(chǎn)品中沒有活微生物存在無法對(duì)整批產(chǎn)品進(jìn)行100%檢驗(yàn)無菌檢驗(yàn)的結(jié)果只是一個(gè)基于“可能性”的判斷無菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基有其局限性只進(jìn)行細(xì)菌和真菌的檢驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定是基于“是否在培養(yǎng)基中生長”培養(yǎng)條件（如溫度和時(shí)間）是有限的我們的工作環(huán)境及操作是在相對(duì)無菌的狀態(tài)21美國非腸道藥物學(xué)會(huì)注射劑無菌測試結(jié)果試驗(yàn)?zāi)康模翰缓细竦目赡苄?%)試驗(yàn)批量：60,000支試驗(yàn)方法：按美國藥典無菌測試方法真實(shí)的不合格率測試20支樣品不合格的可能性測試40支樣品不合格的可能性118.2%33.1%564.2%87.2%1596.1%99.8%3099

8、.9%100.0%22上述無菌測試結(jié)果的啟示含有少量微生物污染產(chǎn)品的批次也有可能“通過”無菌檢驗(yàn)一批產(chǎn)品的染菌率越低，根據(jù)無菌檢驗(yàn)的結(jié)果來判定整批產(chǎn)品的無菌，其風(fēng)險(xiǎn)就越大23如何用無菌檢驗(yàn)來證明整批產(chǎn)品無菌要求有一個(gè)取樣計(jì)劃來涵蓋整個(gè)批號(hào)有足夠的取樣量和檢驗(yàn)量選擇適用的培養(yǎng)基采用經(jīng)驗(yàn)證的無菌檢驗(yàn)方法良好的環(huán)境監(jiān)控24檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)制定依據(jù)2003驗(yàn)證指南 QC-751E注射劑藥液過濾前含菌量測定M-00 061A 注射劑滅菌前藥液污染水平及耐熱性檢查25大容量注射劑舉例滅菌前藥液的含微生物的計(jì)算過程：根據(jù)2003版藥品上產(chǎn)驗(yàn)證指南 lgP=lgN-F0/D121P:滅菌后產(chǎn)品內(nèi)微生物存活概率 N:滅

9、菌前藥液的含耐熱孢子的量 D121:微生物耐熱參數(shù)，系指一定溫度下將微生物殺滅90%或使之下降一個(gè)對(duì)數(shù)單位所需的時(shí)間（分）lgN = lgP+F0/D121= lgP+FT/DT(N值與FT成正比，與DT成反比)該產(chǎn)品（葡萄糖）采用115滅菌32min,產(chǎn)品滅菌的F08,為更嚴(yán)格的控制滅菌前產(chǎn)品的生物負(fù)載，F(xiàn)0取8計(jì)算。26大容量注射劑舉例DT與生產(chǎn)環(huán)境，以及過濾截留得到的微生物有關(guān)，需要確認(rèn)污染微生物的耐熱性，在未檢測到耐熱微生物時(shí)，DT通常按1計(jì)算。為更嚴(yán)格的控制滅菌前產(chǎn)品的生物負(fù)載， 取DT 為1計(jì)算。lgN =lg10-6 +8/1 N=100CFU/袋（產(chǎn)品規(guī)格為250ml）N=40CFU/100ml27檢測重點(diǎn)污染水平微生物耐熱性28取樣 滅菌前藥液直接取樣，每個(gè)樣品取樣大容量注射劑（兩個(gè)最小包裝，最少各 100mL）。小容量注射劑兩份，最少各100mL。滅菌后取樣大容量注射劑各約50mL。29檢測方法污染水平檢查先用滅菌的含5吐溫80的pH7.0氯化鈉蛋白胨潤濕0.45m濾膜，然后過濾100mL滅菌前藥液，有抑菌性的藥液需用已驗(yàn)證量的緩沖液沖洗濾膜，以消除藥液的抑菌性），再以無菌方式將濾膜菌面朝上貼于準(zhǔn)備好的胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）上，同時(shí)做1個(gè)陰性對(duì)照。胰