草魚魚蛋白水解工藝的研究

1、草魚魚蛋白水解工藝的研究 1雖然已有文獻(xiàn)報(bào)道遲緩愛德華氏菌具有抵抗血清殺菌作用，但其分子機(jī)制尚不清楚。為此，將同等菌量的遲緩愛德華氏菌與不同體積的魚血漿孵育，獲取全菌蛋白，進(jìn)行基于等電聚焦雙向電泳的蛋白質(zhì)組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)YihK和GpmA為顯著上調(diào)的差異蛋白。這些發(fā)現(xiàn)有助于闡明病原菌對(duì)魚血漿反應(yīng)的分子機(jī)制。 根據(jù)中國(guó)金槍魚漁業(yè)觀察員項(xiàng)目于2006年211月在東太平洋水域作業(yè)的中國(guó)金槍魚延繩釣漁船上收集的數(shù)據(jù)，本研究對(duì)大眼金槍魚攝食強(qiáng)度的時(shí)空變動(dòng)進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，小個(gè)體大眼金槍魚的攝食強(qiáng)度較大個(gè)體大眼金槍魚高，叉長(zhǎng)小于140cm的大眼金槍魚攝食強(qiáng)度相對(duì)較大。34月的攝食強(qiáng)度較小，511月的攝食

2、強(qiáng)度相對(duì)較大。3月空胃率相對(duì)較高，511月，大眼金槍魚空胃率均低于15%。200350m水層中的大眼金槍魚攝食活動(dòng)非?；钴S。各月份和不同叉長(zhǎng)組大眼金槍魚攝食強(qiáng)度均存在顯著性差異，且不同水層大眼金槍魚攝食強(qiáng)度也存在顯著性差異。本試驗(yàn)比較研究了黃顙魚和青梢紅鲌?jiān)谛螒B(tài)學(xué)參數(shù)、營(yíng)養(yǎng)組成和A/E比值等方面的差異。結(jié)果表明，黃顙魚的臟體比、肝體比、腸脂比和性腺成熟系數(shù)顯著高于青梢紅鲌（P 0.05）。黃顙魚全魚、肌肉、卵巢中脂肪含量顯著高于青梢紅鲌（P 0.05），而全魚和卵巢中蛋白質(zhì)含量顯著高于青梢紅鲌（P 0.05）。這兩種魚肌肉和卵巢中脂肪酸組成也存在顯著差異（P 0.05）。黃顙魚與青梢紅鲌全魚和

3、肌肉中的氨基酸組成相似。然而，這兩種魚卵巢中氨基酸組成存在顯著差異（P岱衢洋自交子代正交子代官井洋自交子代。Gad-1座位對(duì)應(yīng)的1條酶帶，正交子代相對(duì)遷移率Rf 0.082低于其他3個(gè)家系的0.096，7528肉眼已能從凝膠上清晰分辨，可將此酶帶作為區(qū)別正交子代和其他3個(gè)子代間的標(biāo)記。采用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA（RAPD）技術(shù)對(duì)大黃魚四個(gè)子代各20個(gè)樣本進(jìn)行群體遺傳差異的檢測(cè)。14條引物共檢測(cè)到89個(gè)位點(diǎn)，各子代的多態(tài)位點(diǎn)比例在24.01%29.41%之間，平均遺傳雜合度為0.21350.2644，Shannon多樣性指數(shù)在0.08710.1673之間。遺傳多樣性水平，反交子代岱衢洋自交子代正交子

4、代官井洋自交子代，提示通過(guò)雜交試圖提高乃至恢復(fù)大黃魚的遺傳多樣性水平的方法是可行的。結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際情況，推測(cè)反交子代可能同時(shí)具有雙親的優(yōu)良性狀，顯示出較強(qiáng)的雜種優(yōu)勢(shì)，岱衢族雄魚與閩-粵東族雌魚的反交組合可能成為大黃魚雜交育種的最優(yōu)組合。研究探討了紫菜共附生真菌Cladosporium sp.的次生代謝產(chǎn)物的粗提物N5及兩種純化物DLF3、DLF4對(duì)壇紫菜（Porphyra haitanensis）葉狀體和絲狀體生長(zhǎng)的影響。研究結(jié)果表明：粗提物N5在低濃度10-8 10-6 mg/mL范圍時(shí)，對(duì)絲狀體和葉狀體的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，但隨N5濃度的升高，促進(jìn)作用降低，甚至表現(xiàn)抑制作用。5N5在10-6 m

5、g/mL時(shí)，絲狀體日相對(duì)生長(zhǎng)速率可增長(zhǎng)18.8%（p0.01），同時(shí)藻膽蛋白的生物合成量相對(duì)增加了2.90mg/g；N5在10-8 mg/mL時(shí)，葉狀體日相對(duì)生長(zhǎng)速率變化較大，增加了2.76%（p0.05），同時(shí)藻膽蛋白相對(duì)增加量可達(dá)14.16mg/g（p0.01）。在10-8 10-4mg/mL范圍內(nèi)，純化物DLF3和 DLF4對(duì)絲狀體生長(zhǎng)均表現(xiàn)了完全的抑制作用，并且隨濃度升高，抑制作用加強(qiáng)。在10-8mg/mL時(shí)， DLF3和DLF4分別可降低絲狀體日相對(duì)生長(zhǎng)速率4.5%和76.5%。DLF3和DLF4對(duì)葉狀體生長(zhǎng)影響均極顯著（p0.01），低濃度時(shí)促進(jìn)其生長(zhǎng)，隨濃度升高而表現(xiàn)抑制作用，但

6、最適濃度范圍有所不同，分別在10-8mg/mL 和10-6 mg/mL時(shí)表現(xiàn)較強(qiáng)的促進(jìn)作用，葉狀體日相對(duì)生長(zhǎng)速率分別增加了7.94%和2.00%。 香魚(Plecoglossus altivelis)是一種名貴的經(jīng)濟(jì)魚類。本研究建立香魚巨噬細(xì)胞培養(yǎng)，檢測(cè)鰻弧菌對(duì)巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)和噬菌能力影響。巨噬細(xì)胞由頭腎組織經(jīng)梯度離心，貼壁分離來(lái)獲得，并通過(guò)姬姆薩染色證實(shí)。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)鰻弧菌（Listonella anguillarum）可以刺激香魚巨噬細(xì)胞產(chǎn)生呼吸爆發(fā)，其還原NBT的能力比靜息狀態(tài)顯著性增高。鰻弧菌加入到培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞，在4 h香魚巨噬細(xì)胞大量吞噬細(xì)菌，在12 h香魚巨噬細(xì)胞內(nèi)含的細(xì)菌

7、減少。這是我國(guó)香魚巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)的首次報(bào)道，香魚巨噬細(xì)胞對(duì)鰻弧菌有很強(qiáng)殺傷能力，是抵抗病原體侵染的重要防線。根據(jù)2007年秋季在黃海北部海域進(jìn)行的定點(diǎn)底拖網(wǎng)調(diào)查，對(duì)黃鮟鱇（Lophius litulon）的攝食生態(tài)進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明，北黃海的黃鮟鱇在秋季主要以底層魚類和蝦類為食，優(yōu)勢(shì)餌料生物是矛尾蝦虎魚（Chaeturichthys stigmatias）和脊腹褐蝦（Crangon affinis），其中矛尾蝦虎魚在食物組成中所占的比例最高，免費(fèi)發(fā)布廣告 jsx6是黃鮟鱇最重要的餌料生物。典范對(duì)應(yīng)分析表明，水深、經(jīng)度和緯度對(duì)黃鮟鱇的食物組成有顯著影響（P0.05）。黃鮟鱇攝食矛尾蝦虎魚

8、和脊腹褐蝦的體長(zhǎng)范圍分別是32152 mm和3479 mm，平均體長(zhǎng)分別為80.8 1.88 mm（S.E.）和53.2 3.11 mm（S.E.），它與兩種餌料生物的體長(zhǎng)之間沒(méi)有顯著的相關(guān)關(guān)系。黃鮟鱇與矛尾蝦虎魚和脊腹褐蝦體長(zhǎng)的比率分別為1.195.14和2.386.02，平均值分別為2.67 0.09（S.E.）和4.23 0.29（S.E.），黃鮟鱇與兩種餌料生物體長(zhǎng)的比率與黃鮟鱇的體長(zhǎng)之間存在極顯著的正相關(guān)關(guān)系。本文采用常規(guī)解剖、石蠟切片、蘇木精-曙紅染色（H-E）和顯微攝像等組織學(xué)研究技術(shù)，研究了雜食性的鯉魚和肉食性的鱸魚肝臟的解剖與組織結(jié)構(gòu)，并對(duì)其進(jìn)行了較為詳細(xì)的比較。結(jié)果表明：兩

9、種魚肝臟的形態(tài)、大小、色澤、致密度及膽囊狀況等均有區(qū)別；組織結(jié)構(gòu)上兩種魚肝臟均外被薄層漿膜，切片上由于伸入肝臟實(shí)質(zhì)內(nèi)結(jié)締組織較少，很難區(qū)分為肝小葉的結(jié)構(gòu)。中央靜脈形狀多變，且分布很不規(guī)則。小葉周緣門管區(qū)有小葉間動(dòng)脈血管、小葉間靜脈血管和小葉間膽管分布。胰臟外分泌組織組織包于肝臟組織之內(nèi)，沿門靜脈分枝周圍分布，構(gòu)成肝胰臟，與肝臟組織有薄層結(jié)締組織界膜分開。肝胰臟主要由腺泡構(gòu)成，腺泡內(nèi)有泡心細(xì)胞。鯉魚肝胰臟較發(fā)達(dá)，所含腺泡較多，腺細(xì)胞主要含有大量嗜酸性的酶原顆粒，少量腺細(xì)胞核致密，胞質(zhì)被H-E染為桔黃色；花鱸肝胰臟較少且其中所含腺泡較少，腺細(xì)胞亦含大量嗜酸性的酶原顆粒?；|肝臟內(nèi)沿門靜脈分枝周圍分

10、布有大量黑色素巨噬細(xì)胞集合體，鯉魚肝臟中未觀察到類似組織結(jié)構(gòu)。7根據(jù)2007年秋季在黃海北部海域進(jìn)行的定點(diǎn)底拖網(wǎng)調(diào)查，對(duì)細(xì)紋獅子魚（Liparis tanakae）的攝食生態(tài)進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明，北黃海的細(xì)紋獅子魚在秋季主要以蝦類和底層魚類為食，屬于底棲動(dòng)物食性魚類，其優(yōu)勢(shì)餌料生物是脊腹褐蝦（Crangon affinis）。在調(diào)查海域最北部的一個(gè)站位，細(xì)紋獅子魚還攝食了較多的大瀧六線魚（Hexagrammos otakii）魚卵。典范對(duì)應(yīng)分析表明，水深、經(jīng)度、緯度和體長(zhǎng)對(duì)細(xì)紋獅子魚的食物組成有顯著影響（P0.05）。脊腹褐蝦與細(xì)紋獅子魚體長(zhǎng)之間呈顯著的正相關(guān)（r = 0.326，P0.0

11、5）；脊腹褐蝦（r = -0.372，P0.01）和中華安樂(lè)蝦（r = -0.799，P0.01）與細(xì)紋獅子魚體長(zhǎng)的比率與細(xì)紋獅子魚體長(zhǎng)之間均呈極顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系。回歸分析表明，細(xì)紋獅子魚的胃總重和空胃重均隨著體長(zhǎng)的增加呈指數(shù)增長(zhǎng)。從患暴發(fā)性出血性敗血癥中華鱉的腹腔液、腸、心、肝、和胃等組織中分離培養(yǎng)得到8株細(xì)菌。通過(guò)光、電鏡觀察和16S rDNA序列測(cè)定、比對(duì)，對(duì)所分離細(xì)菌進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明，它們分別為格氏乳球菌、假單胞菌、海氏腸球菌、屎腸球菌、人蒼白桿菌、惰性嗜血桿菌、弗氏檸檬酸桿菌和遲鈍愛德華氏菌。用含慶大霉素、頭孢唑啉、羅紅霉素、阿莫西林和阿米卡星的藥敏紙片對(duì)格氏乳球菌、弗氏檸檬酸桿菌

12、和遲鈍愛德華氏菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，格氏乳球菌對(duì)頭孢唑啉和阿莫西林中度敏感，抑菌圈直徑平均值分別為14 mm和16 mm；弗氏檸檬酸桿菌對(duì)阿莫西林敏感，抑菌圈直徑平均值為23 mm；遲鈍愛德華氏菌對(duì)慶大霉素和阿米卡星中度敏感，抑菌圈直徑平均值分別為15 mm和17 mm。北京DHL電話 jsx 8采用紫外分光光度法和酶學(xué)分析方法研究了鹽度（14和36）脅迫下12h內(nèi)經(jīng)溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）篩選過(guò)的三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）F2代（以下簡(jiǎn)稱篩選蟹F2）的血藍(lán)蛋白含量及血清酶活力的變化，用普通三疣梭子蟹F1代（以下簡(jiǎn)稱普通蟹F1）作為

13、對(duì)照。結(jié)果表明：在高鹽和低鹽脅迫下，篩選蟹F2和普通蟹F1的血藍(lán)蛋白含量、三種保護(hù)酶（SOD、POD和CAT）和磷酸酶（ACP和AKP）活力隨時(shí)間變化呈現(xiàn)有升有降的不同變化趨勢(shì)。另外，無(wú)論在低鹽還是高鹽脅迫下，篩選蟹F2的血藍(lán)蛋白含量和各項(xiàng)血清酶活力分別在0h（正常水平）和鹽度脅迫下均顯著高于普通蟹F1（p0.05）?？偨Y(jié)：低鹽和高鹽脅迫對(duì)三疣梭子蟹的非特異性免疫影響顯著且表現(xiàn)出時(shí)間效應(yīng)；在正常和抗鹽度脅迫下，篩選蟹F2比普通蟹F1在非特異性免疫因子方面更具免疫優(yōu)勢(shì)。采用Winkler法測(cè)定水中溶氧含量，通過(guò)比較對(duì)照呼吸室與試驗(yàn)呼吸室水中溶解氧含量之差確定長(zhǎng)蛸耗氧率及窒息點(diǎn)，并在不同程度的溶氧

14、脅迫下測(cè)定長(zhǎng)蛸體內(nèi)多種酶的活力變化。結(jié)果表明：長(zhǎng)蛸耗氧率在一個(gè)晝夜內(nèi)呈現(xiàn)“低-高-低-高”的趨勢(shì)；耗氧率與水溫(1030 )呈正相關(guān)，與pH值(6.49.2)呈負(fù)相關(guān)；隨著鹽度的升高(1431)，長(zhǎng)蛸耗氧率表現(xiàn)為兩頭大, 中間平穩(wěn), 曲線呈凹狀分布；雌性長(zhǎng)蛸耗氧率高于雄性。窒息點(diǎn)隨長(zhǎng)蛸體重的增加而降低，平均體重為（30.56.0277）g的長(zhǎng)蛸窒息點(diǎn)為0.4179mg/L；平均體重為 (54.54.6547) g的長(zhǎng)蛸窒息點(diǎn)為0.3902 mg/L；平均體重為(9711.3578) g的長(zhǎng)蛸窒息點(diǎn)為0. 2738mg/L。隨著溶氧脅迫程度的增加，LDH活力呈先升后降趨勢(shì)，脂肪酶活力下降，SOD

15、、POD、CAT、ACP、AKP和蛋白酶活力均呈“降-升-降”趨勢(shì)。9 通過(guò)測(cè)定黃姑魚精子的激活率、運(yùn)動(dòng)時(shí)間及壽命研究了不同環(huán)境因子對(duì)黃姑魚精子活力的影響。結(jié)果表明，黃姑魚精液中精子濃度為（1.410.12）1010個(gè)/ ml；精子激活與運(yùn)動(dòng)的適宜鹽度為2535、適宜pH為7.58.5。在pH 8.08.3、鹽度25條件下，精子激活率達(dá)（87.005.54）%，運(yùn)動(dòng)時(shí)間及壽命分別為（33614.02）s及（405.3312.22）s。精子激活與運(yùn)動(dòng)的適宜NaCl、KCl、MgCl2及葡萄糖溶液濃度分別為300500mmolL-1、600mmolL-1、8001000 mmolL-1及900 m

16、molL-1；精子在CaCl2溶液中有聚集現(xiàn)象出現(xiàn)，且運(yùn)動(dòng)時(shí)間及壽命明顯縮短；精子在缺少HCO3-的人工海水中未能被激活；精子在無(wú)Ca2+或Mg2+的人工海水中激活率均超過(guò)80%，但運(yùn)動(dòng)時(shí)間及壽命均有所縮短。 于2008年11月在浙江新昌采集20尾光唇魚，采用垂直聚丙烯酰胺平板電泳，對(duì)光唇魚的肝臟、脾臟、心臟、腎臟、腦、鰓耙、眼睛、背鰭和肌肉等9種組織器官中的10種同工酶進(jìn)行研究，并分析了其酶譜表型。結(jié)果表明，除了過(guò)氧化氫酶（CAT）和酸性磷酸酶(ACP) 只顯示微弱且不穩(wěn)定的區(qū)帶外，乳酸脫氫酶(LDH)、蘋果酸脫氫酶(MDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、蘋果酸酶(MEP)、醇脫氫酶(ADH)、過(guò)氧化物酶(POD)、