對膽紅素的再認(rèn)識

1、對膽紅素的再認(rèn)識-從結(jié)構(gòu)(jigu)到功能共三十九頁內(nèi)容提要(ni rn t yo)膽紅素的新分類法及膽紅素膽紅素檢測的方法及其影響因素(yn s)對膽紅素功能的新認(rèn)識共三十九頁膽紅素研究(ynji)歷史 1942 年，德國化學(xué)(huxu)家Hans Fisher 首次報道了膽紅素的化學(xué)(huxu)結(jié)構(gòu)，他對膽紅素前體-血膽紅素的全合成研究工作使他在1930 年獲得了諾貝爾化學(xué)(huxu)獎共三十九頁膽紅素的來源和生成(shn chn)部位來源(liyun)：一切含血紅素的血色蛋白，如血紅蛋白、細(xì)胞色素和肌紅蛋白生成部位：主要（70%-80%）：衰老的紅細(xì)胞在肝臟、脾臟和骨髓中的單核-巨噬細(xì)胞

2、系統(tǒng)次要（10%-15%）：肝內(nèi)血色蛋白如P450、B5過氧化氫酶的分解和脾臟、骨髓內(nèi)未成熟紅細(xì)胞的分解，亦稱旁路膽紅素共三十九頁膽紅素的傳統(tǒng)(chuntng)分類法直接(zhji)反應(yīng)膽紅素(direct-reacting bilirubin） 能在水溶液中與重氮磺胺酸直接起反應(yīng)間接反應(yīng)膽紅素(indirect-reacting bilirubin) 需要諸如乙醇、甲醇、咖啡因、安息香酸鈉等促進(jìn)劑才能與其他試劑反應(yīng)共三十九頁血清(xuqng)膽紅素的最新分類法膽紅素/非結(jié)合膽紅素/游離(yul)膽紅素 unconjugated bilirubin，Bu 膽紅素/ 一元葡糖苷酸膽紅素monog

3、lucuronide bilirubin，mBc 膽紅素/二元葡糖苷酸膽紅素 diglucuronide bilirubin，dBc膽紅素/與白蛋白的配合物（共價結(jié)合）/膽蛋白 Albumin-bilirubin complex，B 與膽綠素的四種異構(gòu)體非對應(yīng)關(guān)系:膽紅素-,膽綠素-,膽綠素-和膽綠素-共三十九頁兩種分類法的對應(yīng)(duyng)關(guān)系間接膽紅素（IB）= 膽紅素=非結(jié)合(jih)膽紅素直接膽紅素（DB）=結(jié)合膽紅素+ 膽紅素 結(jié)合膽紅素= 膽紅素+ 膽紅素TB=Bu+mBc+dBc+B共三十九頁膽紅素線狀結(jié)構(gòu)(jigu)膽紅素的X線衍射(ynsh)結(jié)構(gòu)（即順式或Z 型結(jié)構(gòu)）未結(jié)合膽

4、紅素的結(jié)構(gòu)共三十九頁光照(gungzho)對膽紅素結(jié)構(gòu)的影響膽紅素經(jīng)400500nm 波長的藍(lán)光(綠光) 照射后，內(nèi)側(cè)氫鍵斷開，其1 個或2 個吡咯環(huán)旋轉(zhuǎn)180，形成3 種E 構(gòu)型的異構(gòu)體，具有(jyu)水溶性，可從膽汁直接排瀉形成不可逆的環(huán)形化合物(環(huán)膽紅素) ，清除很快，T1/ 2為2 h ,是新生兒黃疸病人光療后，在十二指腸和尿中排出的主要膽色素形成幾種水溶性的無色產(chǎn)物，產(chǎn)生慢，量小 新生兒黃疸光照療法的分子基礎(chǔ)共三十九頁雙葡萄糖醛酸酯占85-90單葡萄糖醛酸酯占10-15結(jié)合(jih)膽紅素的結(jié)構(gòu)共三十九頁膽紅素在血液中的存在(cnzi)形式與白蛋白結(jié)合(jih)作為運輸載體，可以進(jìn)入

5、血液循環(huán)到達(dá)肝臟 血漿白蛋白濃度： 500700umol/L 血漿膽紅素濃度：317umol/L變脂溶性為水溶性，阻止膽紅素過進(jìn)入血腦屏障和透過細(xì)胞膜。松散的結(jié)合，非共價結(jié)合！共三十九頁影響膽紅素結(jié)合(jih)白蛋白的因素pH環(huán)境和鈣離子某些陰離子藥物： 磺胺類抗菌素、巴比妥和水楊酸鹽、 游離脂肪酸、膽道造影劑等白蛋白的分子濃度(nngd)：過低導(dǎo)致結(jié)合不牢固！共三十九頁與白蛋白以酰胺鍵共價結(jié)合，二者不可分解具有良好的穩(wěn)定性，半衰期為17-23天不被肝細(xì)胞攝取，不能通過腎小球，不經(jīng)膽汁(dnzh)排出85%與重氮試劑呈直接反應(yīng)僅用干化學(xué)法能檢測到，濕化學(xué)法檢測不到膽紅素（膽蛋白(dnbi)）的

6、特性共三十九頁膽紅素可能的來源(liyun)與形成機制來源：結(jié)合膽紅素形成(xngchng)機制：當(dāng)結(jié)合膽紅素升高時，超過腎閾值，返流回血液的結(jié)合膽紅素在非酶促條件下與白蛋白結(jié)合形成的產(chǎn)物。膽汁淤積會加快膽紅素的形成共三十九頁膽紅素的結(jié)構(gòu)(jigu)非酯型共三十九頁酯型膽紅素的結(jié)構(gòu)(jigu)共三十九頁膽紅素存在(cnzi)的意義有助于理解臨床其他指標(biāo)好轉(zhuǎn)但黃疸不退的原因用測Bc代替?zhèn)鹘y(tǒng)DB測定，更加直接(zhji)地了解病情計算B/TBIL有助于判斷恢復(fù)期肝病的預(yù)后在正常人以及高Bu病人（新生兒黃疸）中缺乏，僅在那些酯型高膽紅素血癥的病人血清中被檢測到共三十九頁膽紅素的檢測(jin c)方法

7、研究進(jìn)展?jié)窕瘜W(xué)法：反應(yīng)(fnyng)均在液體試劑中進(jìn)行 重氮反應(yīng)法、 氧化酶法、 化學(xué)氧化法干化學(xué)法：反應(yīng)在干式試劑片上進(jìn)行，無液體試劑 Kodak建立薄膜分析技術(shù)( thin film analysis)其他：高效液相色譜法（HPLC）、分光光度法、熒光探針法、單克隆抗體法、傳感器法共三十九頁重氮法檢測(jin c)膽紅素（一）原理：血清中DB可直接與重氮試劑反應(yīng)產(chǎn)生偶氮膽紅素，Bu測定時則要以咖啡因、苯甲酸鈉為加速劑破壞膽紅素氫鍵，再與重氮試劑反應(yīng)。（DB包含Bc和大部分B）種類(zhngli)：改良J-G法、M-E法、P-L法共三十九頁優(yōu)點：可直接比色，手續(xù)簡單，易于自動化缺點：重氮試劑

8、不穩(wěn)定，須由亞硝酸鈉和氨基苯磺酸臨時生成；重氮試劑與Bu和Bc的反應(yīng)特異性不佳，在一定條件下測Bc，一部分Bu參與反應(yīng)；易受溶血、脂血等因素干擾(gnro)；膽紅素濃度過高時影響準(zhǔn)確度（稀釋）重氮法檢測(jin c)膽紅素（二）共三十九頁氧化酶法檢測(jin c)膽紅素（一）原理：膽紅素氧化酶（BOX）催化樣品中的膽紅素氧化，生成膽綠素，引起450 nm 處吸光度(A450 nm )值下降。通常條件下（pH值 3.74、NaF存在(cnzi)），BOX 試劑只與Bc 反應(yīng)，與Bu 與B不起反應(yīng)；改變條件（如pH值升至8.0），可測定TB。共三十九頁優(yōu)點(yudin)：靈敏度高，特異性好缺點：試

9、劑較昂貴，并受酶的穩(wěn)定性、純度等的影響；易受脂血、溶血的影響氧化酶法檢測(jin c)膽紅素（二）共三十九頁化學(xué)(huxu)氧化法檢測膽紅素（一）原理：膽紅素的四吡咯結(jié)構(gòu)具有還原性，因此各種低分子的無機(wj)氧化劑和在一定條件下具有氧化性的各種過渡金屬元素都可以氧化膽紅素種類：有釩酸鹽氧化法、亞硝酸鈉氧化法、高碘酸氧化法共三十九頁優(yōu)點(yudin)： 不受溶血、脂血等干擾物質(zhì)的影響， 準(zhǔn)確度高，特異性好 與酶法比較具有試劑價格低廉,精密度更高化學(xué)(huxu)氧化法檢測膽紅素（二）共三十九頁干化學(xué)法檢測(jin c)膽紅素（一）原理：Bu、Bc、B與媒染劑反應(yīng)后反射光波長不一，用反射計測定通過

10、透明底層(d cn)顯現(xiàn)的顏色即可將三者區(qū)分，因而可以在一張干片上同時檢測Bu 、Bc、B共三十九頁優(yōu)點：快速；受干擾最??；精確性好；唯一用于臨床的可直接測定B的方法缺點：需要另外(ln wi)的生化儀設(shè)備干化學(xué)法檢測(jin c)膽紅素（二）共三十九頁當(dāng)前(dngqin)膽紅素檢測中存在的突出問題膽紅素標(biāo)準(zhǔn)品不穩(wěn)定極易導(dǎo)致結(jié)果偏差膽紅素的概念混亂導(dǎo)致結(jié)果解釋困難抗干擾性差的問題(wnt)不同方法的可比性差的問題測準(zhǔn)高值與測準(zhǔn)低值的問題共三十九頁可能(knng)影響膽紅素檢測的干擾因素溶血脂血藥物及食物：維生素C（破壞重氮試劑）外來pH值：儀器清洗、避開強酸、強堿檢測(jin c)項目標(biāo)本處理

11、：溫度、環(huán)境共三十九頁膽紅素對生化檢測項目(xingm)的影響肌酐血清(xuqng)鈣血氨尿酸 血糖 總膽固醇 甘油三酯使測定結(jié)果偏低： 膽紅素還原性較強，干擾了 rinder反應(yīng)（氧化反應(yīng)）消除方法：先使膽紅素氧化成膽綠素再進(jìn)行檢測；改終點法為兩點法共三十九頁膽紅素對腫瘤(zhngli)標(biāo)志物檢測的影響CA199：假陽性率達(dá)50%以上(yshng)，膽紅素越高水平CA199的水平越高！CA125CA153CEA共三十九頁膽紅素的功能(gngnng)研究進(jìn)展致病作用(zuyng)生理功能共三十九頁膽紅素引起(ynq)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害機制：Bu 沉積于腦組織特別是神經(jīng)核細(xì)胞(xbo)（黃染）引起

12、膜結(jié)構(gòu)損傷和線粒體功能障礙膽紅素腦?。耗懠t素對基底核及各種腦干神經(jīng)核的毒性所致中樞神經(jīng)系統(tǒng)的臨床表現(xiàn)急性膽紅素腦?。撼錾?周內(nèi)出現(xiàn)的膽紅素對中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性表現(xiàn)核黃疸：膽紅素毒性所致慢性、永久臨床后遺癥2004年美國兒科學(xué)會35 周新生兒高膽紅素血癥的診療方案共三十九頁急性(jxng)膽紅素腦病至少有3項表現(xiàn)：即激惹、肌張力增高伴早期頭后仰、角弓反張(jio gng-fnzhng)加下列表現(xiàn)中的1項：嗜睡，不愿進(jìn)食，肌張力交替改變，哭聲尖及腦干誘發(fā)電位篩選不能通過共三十九頁慢性(mn xng)核黃疸后的臨床表現(xiàn)錐體外系運動異常（基底神經(jīng)節(jié)）：張力失常、手足徐動癥注視異常（動眼神經(jīng)核）： 斜視

13、及凝視性癱、特別是不能上視 聽力(tngl)障礙（腦干聽神經(jīng)核神經(jīng)、四疊體下丘、上橄欖復(fù)合體）：神經(jīng)感覺性聽力喪失智力障礙（海馬）： 學(xué)習(xí)、記憶能力下降，僅少數(shù)為智力缺陷共三十九頁膽紅素的其他(qt)致病作用心肌細(xì)胞損害：心肌酶譜及ST-T改變腎損害：腎小管功能損害對免疫細(xì)胞的毒性(d xn)作用：T、B、粒、吞噬細(xì)胞促進(jìn)膽結(jié)石形成：膽紅素在胃腸道造成細(xì)胞損傷，引起粘蛋白分泌，使膽紅素鈣沉淀顆粒變大，易形成結(jié)石（色素型結(jié)石主要是其鈣鹽和銅鹽）；膽紅素可使膽固醇結(jié)晶幾率增加50%共三十九頁膽紅素具有(jyu)生理功能！抗氧化、抗氧自由基，占機體抗氧化能力的30%冠心?。嚎沟兔芏戎鞍籽趸揎?，預(yù)

14、防動脈粥樣硬化，降低冠心病的危險腦血管?。旱湍懠t素血癥為腦卒中和血管性癡呆的影響因素急性肺損傷（ALI）、ARDS：膽紅素有治療(zhlio)作用肝臟的缺血再灌注損傷：共三十九頁新生兒生理性黃疸(hungdn)的新認(rèn)識膽紅素是新生兒非酶類抗氧自由基系統(tǒng)的重要組成部分?。ù嬖诘木褪呛侠淼?？） 新生兒患自由基增多的疾病如循環(huán)衰竭、新生兒窒息、胎糞吸入性肺炎和敗血癥等，其膽紅素濃度亦降低(jingd)，提示膽紅素作為抗氧自由基系統(tǒng)被消耗！共三十九頁膽紅素的功能(gngnng)評價膽紅素濃度是關(guān)鍵(gunjin)！低濃度保護(hù)作用高濃度致病作用共三十九頁內(nèi)容摘要對膽紅素的再認(rèn)識-從結(jié)構(gòu)到功能。膽紅素的新分類法及膽紅素。 膽紅素/二元葡糖苷酸膽紅素。膽紅素/與白蛋白的配合物（共價結(jié)合）/膽蛋白。間接膽紅