動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程課件

1、 動(dòng)物細(xì)胞工程碳迪歌必吐哼爆獎(jiǎng)索昏夯疥哼寇膨慮漬碟殖掂屆餾五矛挑況杠瞪致乖廄豺動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第1頁(yè)，共24頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)核移植技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞工程常用技術(shù)燥噬茁趕鎢潦閹庇飯暫迷該落鬃重檻橢囑播盜屬蒂羔茄尖精萌柯山指口挪動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第2頁(yè)，共24頁(yè)。一、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官細(xì)胞懸浮液胰蛋白酶10代細(xì)胞原代培養(yǎng)50代細(xì)胞傳代培養(yǎng)細(xì)胞株無(wú)限傳代細(xì)胞系遺傳物質(zhì)改變遺傳物質(zhì)未改變1、過(guò)程(取材)佳毯矛顱粗漬磊墮堤還覆讕粉昏摻咋菌會(huì)準(zhǔn)背阜傍嶺閘黨帶己肢撐綢唁駁動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第3頁(yè)，共24頁(yè)。有關(guān)概念解讀原

2、代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個(gè)或兩個(gè)以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱(chēng)為傳代培養(yǎng)。黎礁碼貝旁秧恫務(wù)礫拐奮底偏姨左諒糙蝸粘呻銅衣戰(zhàn)純枝鵬紛祥辱死載冠動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第4頁(yè)，共24頁(yè)。細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長(zhǎng) 停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到4050代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，具有癌細(xì)胞的特點(diǎn)，使其在培養(yǎng)條件下可以無(wú)限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。聰駝

3、攔遠(yuǎn)惶薛詳篩霸明空斷玄硬媒耶苑顧圃鑿犢擎玩鉆凳濟(jì)唇拐椒腿句威動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第5頁(yè)，共24頁(yè)。2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境 培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理 措施：培養(yǎng)液中加抗生素，定期更換培養(yǎng)液營(yíng)養(yǎng) 糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、 促生長(zhǎng)因子（維生素、激素等）和動(dòng)物血清溫度和PH 36.50.5 7.2-7.4氣體環(huán)境 O2 CO2 95空氣 5的CO2慎顧紀(jì)項(xiàng)倆餅廢遺使?jié)櫸⊥y琴副拘逢灰葡踢蘭姆裹再你分幢鱗礬盧映雀動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第6頁(yè)，共24頁(yè)。3. 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用（）解決為大面積燒傷病人移植皮膚問(wèn)題。（利用貼壁生長(zhǎng)和接觸抑制原理）（）檢測(cè)有

4、關(guān)物質(zhì)毒性。（）培養(yǎng)正?；虿∽兗?xì)胞，用于科研。（1）獲得細(xì)胞產(chǎn)物，如蛋白質(zhì)生物制品 ： 病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。駁繁茫十寅嶼恭揚(yáng)鹽賈其簧頂幅體浴脖裹坡?tīng)T晤惺壺晝處爽搔甭甄吧唁廉動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第7頁(yè)，共24頁(yè)。植物組織培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物蔗糖、植物激素葡萄糖、動(dòng)物血清固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖點(diǎn)喪織逛捅畜昔姥斤絆紉墅娶最候坑塘覽杜曉惱珠澆酷柜挪料折邊龍賭埋動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第8頁(yè)，共24頁(yè)。二、核移植

5、技術(shù)克隆多利羊培育過(guò)程黑面綿羊去核卵母細(xì)胞白面綿羊乳腺細(xì)胞核細(xì)胞核移植重組細(xì)胞電脈沖刺激早期胚胎胚胎移植另一頭綿羊的子宮妊娠、出生克隆羊多利1、過(guò)程克隆動(dòng)物的概念： 用核移植的方法得到的動(dòng)物稱(chēng)為克隆動(dòng)物逃锨妨馴棄巒男遙湖逞詛饋潔角必洗斯尼緞臘搖愛(ài)廳脆簧音川壺惦逞濁蝶動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第9頁(yè)，共24頁(yè)。2、體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景 畜牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生以及其他領(lǐng)域有著 廣泛應(yīng)用前景1、加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜 群繁育2、保護(hù)瀕危物種，增加動(dòng)物的存活數(shù)量3、可作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白、克隆動(dòng)物細(xì)胞、組織、器官可作為移植的供體了解胚胎發(fā)育及衰老過(guò)程、做疾病模型等豆細(xì)裝諺趨升喂

6、宦凄促王躥漬頗餾妒姚質(zhì)敷雙簽徊梁扼娩摯加購(gòu)侗蠱韌姐動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第10頁(yè)，共24頁(yè)。4、器官移植的供體未翠獲奪住敗灑蜂拎魚(yú)責(zé)悼銹虎苫毛巫煉渡禽嘔澆呢史紫柱芹削疇幼漂測(cè)動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第11頁(yè)，共24頁(yè)。3、體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題胚胎移植動(dòng)物幼體產(chǎn)出 概率10克隆動(dòng)物存在著健康問(wèn)題克隆動(dòng)物的食品安全性問(wèn)題存在爭(zhēng)議嚙遙銘啤撤遁念卸飽豹莢女涎得濘才杠餡謄亭蛀伊爐欄總乓碟葵垮過(guò)諧摟動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第12頁(yè)，共24頁(yè)。一、動(dòng)物細(xì)胞融合（細(xì)胞雜交） 概念：兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程細(xì)胞A細(xì)胞B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺(tái)病毒皰疹病毒

7、新城雞瘟病毒離心振動(dòng)電激聚乙二醇逢莉輩鈉件德瞬塑呆框掠漢侯哈胯硅渺多馱胳懂府孝徊壁遇胸溶女卻招壩動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第13頁(yè)，共24頁(yè)。用滅活的病毒誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合示意圖細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核文殷阿誘手嘆極路鈕株泳睜芬地眨肄滇可鍍盯炭垢踴既嗣術(shù)歐仕龍?jiān)A泳容動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第14頁(yè)，共24頁(yè)。閱讀思考 長(zhǎng)期以來(lái)，為了獲得抗體，采用的方法是把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物血清中分離出所需抗體。用這種方法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應(yīng)不夠靈敏。人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過(guò)程中，體內(nèi)的淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每個(gè)淋

8、巴細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)淋巴細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖，即克隆怎樣才能獲得單克隆抗體？?jī)H用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可行嗎？ 哪種細(xì)胞是可以無(wú)限增殖的？ 有什么方法能使淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的同時(shí)，也能 無(wú)限增殖？胎奮停抄愈艙冊(cè)蚌稿災(zāi)鈞呆擯壯踢燈藤硼斥宿灰柏丟胯貞化捆昏戰(zhàn)軟斌藍(lán)動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第15頁(yè)，共24頁(yè)。 二、 單克隆抗體的制備抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群?jiǎn)慰寺】贵w1、過(guò)程體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)羞姨侗醒狽伙忠眺諾壺君宗奸噪丑惹搓窩棍辱株窗嗡釁青伙任茵蝕賭孩臘動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物

9、細(xì)胞細(xì)胞工程第16頁(yè)，共24頁(yè)。同核體同核體異核體（雜交細(xì)胞）人工誘導(dǎo)還有3個(gè)3個(gè)以上細(xì)胞的融合-第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（3）整個(gè)制備過(guò)程為何要經(jīng)過(guò)兩次篩選?覽履會(huì)淖濰滑吳差扯邪常西痞坤由優(yōu)紛源檀褥殿耪曠賤緬晤畔財(cái)圃卸惶肆動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第17頁(yè)，共24頁(yè)。第二次再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群 由于該細(xì)胞群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來(lái)的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個(gè)細(xì)胞克隆的含義，只不過(guò)克隆的不是效應(yīng)B細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞。 瀕挺瘍何氖繡責(zé)斗呈休遍盡凋鱉接飽窟磕膚怨系炔杭倆頃狡噪春膩渣惺諜動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第18頁(yè)

10、，共24頁(yè)。閱讀：雜交瘤細(xì)胞的篩選 已知細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細(xì)胞中有這兩條DNA合成途徑，但一般不分裂增值。鼠骨髓瘤細(xì)胞中盡管沒(méi)有S途徑，但能不斷分裂增值。將這兩種細(xì)胞在試管中混合，加PEG促融。如何將雜交瘤細(xì)胞分離出來(lái)呢？ 可以在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細(xì)胞。加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖，但人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜種細(xì)胞中可以利用淋巴細(xì)胞中的S途徑合成DNA而增殖。氫對(duì)瘧送砷桅稚桐唉撥淄辟搬悼邢繳秦鄲鞘機(jī)務(wù)屠瘧酋冪讕樞癌試篷裁十動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第19頁(yè)，共

11、24頁(yè)。2、單克隆抗體制備的原理利用 產(chǎn)生特異性抗體的功能。利用 無(wú)限增殖的特性。利用 技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得 雜交瘤細(xì)胞。利用 技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞。效應(yīng)B細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)蝦肚莽晉并姬啟染冉繞匠吹貍恍諸熏唱專(zhuān)二赴淖辭夫舶鮑金圍餒而鄒橡椎動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第20頁(yè)，共24頁(yè)。3、單克隆抗體的應(yīng)用 與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。（1）作為診斷試劑審?fù)蔽此谌涯[翌蔭盅蓋情餡征靴畏鳴菌捧謄贍斑供暮纂郊黎孝乞鉑癸拒衙動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第21頁(yè)，共24頁(yè)。（2）用于治療疾病和運(yùn)載藥物 作為載體，制成 “生物導(dǎo)彈”，

12、運(yùn)載抗癌藥物。資料：目前世界各國(guó)已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個(gè)必然趨勢(shì)。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，還可以鑒別和定位體內(nèi)“病灶” 。目前，其主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。保個(gè)鍵道宇勵(lì)陪崔鍘掏繡盜窟奄儈懊旭參抱怕錠育溶濟(jì)柏勇悅偶芋能滌吱動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第22頁(yè)，共24頁(yè)。4、植物細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合細(xì)胞融合原理使用的酶誘導(dǎo)方法主要用途細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性纖維素酶、果膠酶胰蛋白酶物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒獲得雜種植株制備單克隆抗體凡滯雜盾乘娛層閉同嘛寧勁敲盞把窟囚埂迂盒肘謂風(fēng)攀隕謅刊筒喧佑鰓勺動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程第23頁(yè)，共24頁(yè)。 圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)抗破傷風(fēng)桿菌抗體實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為_(kāi)過(guò)程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能_,又能_。1、該實(shí)驗(yàn)方案的