《細胞工程》考試大綱

1、細胞工程考試大綱第一章 緒論一、名詞高技術、生物技術、細胞工程、生化工程.二、知識點現(xiàn)代生物技術是一項高技術；生物技術的基本內(nèi)容； 細胞工程在整個生物工程中的地位； 細胞工程主要的技術領域；細胞工程的主要應用。 第二章 細胞工程理論基礎一、名詞細胞、細胞周期、細胞凋亡、細胞分化、奢侈基因、管家基因.二、知識點細胞共性。第三章細胞工程基本技術一、名詞生物安全、p1級實驗室、清潔液、干熱滅菌、濕熱滅菌、無菌操作技術、細胞貼壁率、細胞計數(shù)、MTT法、活體染色、成集落試驗、污染。二、知識點細胞工程實驗室主要的儀器設備；細胞培養(yǎng)室的基本要求；p1級實驗室的基本要求；細胞培養(yǎng)室常見的消毒方法；玻璃器皿的清

2、洗方法；判斷清潔液失效的方法及延長其壽命的方法；無菌操作的技術要領與要求；培養(yǎng)細胞的觀察技術；培養(yǎng)細胞的主要污染與排除；細胞計數(shù)應注意的問題；細胞凍存與復蘇的技術要點及注意事項。第四章 細胞培養(yǎng)與代謝調控一、名詞分批式培養(yǎng)、流加式培養(yǎng)、半連續(xù)式培養(yǎng)、連續(xù)式培養(yǎng)、灌流式培養(yǎng)。二、知識點分批式培養(yǎng)、連續(xù)式培養(yǎng)、灌流式培養(yǎng)的特點。 第五章 植物人工繁殖一、名詞植物細胞工程、植物組織培養(yǎng)、外植體、脫分化、再分化、愈傷組織、胚狀體、大量元素、微量元素、器官發(fā)生途徑、胚狀體發(fā)生途徑、植物快速無性繁殖、植物脫毒、胚培養(yǎng)、胚乳培養(yǎng)、人工種子、體細胞胚。二、知識點植物細胞工程的主要內(nèi)容；植物組織培養(yǎng)的理論基礎；

3、植物細胞工程的技術手段；植物組織再分化的兩條途徑；植物組織培養(yǎng)的主要步驟與技術要點；影響植物細胞脫分化和再分化因素；愈傷組織有的特點及其在細胞工程中的重要性；愈傷組織再生植株的途徑；植物組織與動物細胞的超低溫保存原理及方法的不同；植物細胞的幾種大規(guī)模培養(yǎng)系統(tǒng)的特點及其影響因素；生長素、細胞分裂素的生理作用及其在組織培養(yǎng)中的意義。成熟胚培養(yǎng)與幼胚培養(yǎng)在技術上的異同；植物胚乳培養(yǎng)的類型；植物胚胎培養(yǎng)的意義及影響因素；愈傷組織的形成的三個階段及主要特征；人工種子的組成、構建與應用；體細胞胚胎發(fā)生的同步控制；植物脫毒的方法；植物快繁技術的主要步驟；微繁殖中芽的增殖方式；植物脫毒時外植體的預處理途徑。第

4、六章 動物人工繁殖一、名詞胚胎工程p96體外受精p97胚胎移植p97胚胎分割p115胚胎融合p6嵌合體p6胚胎性別鑒定p121胚胎冷凍技術p6試管嬰兒p103超數(shù)排卵p6同步發(fā)情p6胚胎細胞克隆p8同種體細胞克隆p8異種體細胞克隆p8核移植技術p108二、知識點胚胎工程的主要技術領域p6體外受精的基本過程p7試管嬰兒的基本步驟p104胚胎工程的意義p7克隆研究的主要內(nèi)容p8克隆的理論與技術基礎理論基礎是細胞全能性技術基礎：核移植技術胚胎移植技術核移植的技術要點、應用與發(fā)展前景p8“多莉”的制備步驟p9“多莉”引發(fā)的思考你對克隆人的看法。第七章 細胞重組與細胞融合一、名詞細胞重組p128胞質體p

5、128核質體微細胞p128細胞融合p132HAT培養(yǎng)基p6單克隆抗體p239基因定位p6二、知識點細胞重組的方式與意義 1）胞質體與完整細胞的融合形成胞質雜種； 2）微細胞與完整細胞的融合形成微細胞異核體； 3）胞質體與核體（小細胞）融合形成重組細胞（核質雜種）HAT選擇的原理p6細胞融合的主要應用1)進行基因定位，繪制人類基因圖2）誘導PC染色體3）體細胞雜種的致瘤性分析4 )遺傳缺陷的基因互補5)分化功能表達調控的研究6)淋巴細胞雜交瘤技術與單克隆抗體7 )植物細胞的原生質體融合培育雜種植株8 )核質相互作用關系9 )基因治療10 )疾病診斷PEG誘導細胞融合的基本原理 PEG(polye

6、thylene glycol)是一種多聚化合物，分子式為H(OHCH2-CH2)nOH，平均分子量在20020000之間。誘導機制可能是由于帶有大量負電荷的PEG分子和原生質體表面的負電荷間在鈣離子的作用下形成靜電鍵，促使原生質體間的黏著而結合，導致電荷平衡失調并重新分配，使兩種原生質體上的正負電荷連接起來，進而形成具有共同質膜的融合體。融合體的基本類型及其篩選 1）同核體同源原生質體的融合 2）異核體非同源原生質體的融合3）多核體含有雙親不同比例核物質的融合體融合體的篩選方法1）遺傳互補篩選法2）抗性互補篩選法3）生長特性篩選法4）物理特性篩選法5）其他方法新品種培育名詞花藥培養(yǎng)p150植物

7、原生質體融合p13端體系統(tǒng):除了從細胞中去掉整條染色體外，還可以有計劃的去除某一染色體的某一側的臂。三體植物系統(tǒng):如果細胞中增加一條同種的染色體，則染色體數(shù)成為2n+1，稱為三體（trisome）。如果增加兩條同種染色體（非同源），結果有兩對染色體都變成三條，則稱雙三體。單體系統(tǒng)p13孤雌生殖p150染色體加倍p13染色體倍性改造工程:指有目的、有計劃的增加或減少一組或幾組同源或異源染色體，以創(chuàng)造我們所需的動植物新品種的一項染色體工程技術。植物染色體的非整倍體改造:是按照人們預定的目標,通過有計劃的削減、添加和代換同種或異種的一個或若干條染色體或其一部分，可以在一定程度上達到定向改變植物的遺傳

8、性、選育新品種的目的。單體植物:從細胞中去掉一條染色體，則染色體數(shù)成為2n-1，這樣的植物叫做單體植物。缺體植物:去掉兩條染色體(同源)，2n-2二、知識點花藥培養(yǎng)中外植體的選擇 （1） 材料的遺傳變異 首先，不同物種之間花藥培養(yǎng)的反應存在跟大差異；此外，同一屬內(nèi)不同種或品種之間也存在誘導性的差異。 母本材料的基因型是影響花藥培養(yǎng)的關鍵因素，不同基因型植株的花藥對培養(yǎng)的反應不同?；ㄋ幣囵B(yǎng)的誘導率也與雜種優(yōu)勢有關，一般情況下雜種比純種容易誘導。（2） 母本生理狀態(tài)的影響 母本生理狀態(tài)直接影響花藥培養(yǎng)力 母本的氮素營養(yǎng)水平是另一個重要的影響因素 （3） 花粉發(fā)育時期 被子植物的花粉發(fā)育過程經(jīng)歷三個

9、階段，即第一期四分體時期、第二期單核期（小孢 子階段）、第三期雙核期和三核期（雄配子體階段）。單核期又分為單核早期、但和中期、單核晚期。 對大多數(shù)植物來說，單核中期和晚期是誘導花粉胚或花粉愈傷組織的最佳時期，尤其單核靠邊期是花粉誘導的關鍵時期。 不同植物的花粉對離體培養(yǎng)有其特定的、最敏感的發(fā)育時期，然而，對大多數(shù)植物，單核期的花粉比較容易培養(yǎng)。 具有無限數(shù)目花藥的植物，取材比較方便，具有有限數(shù)目花藥的植物，按順序找出小孢子發(fā)育時期不同的花藥。 將鏡檢結果與花蕾發(fā)育狀態(tài)進行對比，發(fā)現(xiàn)花蕾狀態(tài)與花粉發(fā)育時期的對應關系，為進一步取樣培養(yǎng)奠定基礎。 供體植物的遺傳背景對單倍體的誘導影響甚大?；ㄋ幣囵B(yǎng)與

10、花粉培養(yǎng)的不同點p12花藥培養(yǎng)中再生植株的形成途徑與再生植株倍性的關系p12花藥培養(yǎng)再生植株的途徑植物原生質體制備的方法原生質體再生植株的技術路線p13植物染色體的人工加倍方法p14植物遠緣雜交遇到的主要困難第九章 植物細胞代謝產(chǎn)物制備一、名詞看護培養(yǎng)p165：用一塊活躍生長的愈傷組織來看護單個細胞，使其持續(xù)分裂和增殖。這塊愈傷組織被稱為看護組織。飼養(yǎng)層培養(yǎng)p165：與處理過的（如X射線處理）無分裂能力或分裂很慢的細胞來飼養(yǎng)所需培養(yǎng)的細胞，使其分裂和生長。細胞固定化培養(yǎng)p168：是指將游離的細胞埋在支持物內(nèi)部或表面進行培養(yǎng)的一門技術。冠癭組織p186：是由根癌農(nóng)桿菌感染引起的植物腫瘤組織，它能

11、在無外加植物激素的培養(yǎng)基上生長。轉基因植物p266：是指將外源基因轉入到植物的細胞或組織獲得了新的遺傳性狀的植物。Ti質粒p14：是指在根瘤土壤桿菌細胞中存在的一種染色體外自主復制的環(huán)形雙鏈DNA。二、知識點植物細胞定向富集馴化方法p174：細胞株定向富集馴化是一種有效的篩選技術，主要包括:1激素自養(yǎng)型細胞株的篩選馴化：將愈傷組織或分離到的細胞接種在不含生長素、細胞分裂素的繼代培養(yǎng)基中進行傳代培養(yǎng)，挑選生長好的細胞進行反復繼代培養(yǎng)馴化可以獲得激素自養(yǎng)型細胞。2、耐受高劑量有毒物質的細胞株馴化：將愈傷組織或分離到的細胞接種在含高濃度的乙酸鹽、苯甲酸鈉等可能對細胞產(chǎn)生含毒化合物的培養(yǎng)基中反復繼代培

12、養(yǎng)馴化。不斷提高這些成分含量，可以獲得耐受高劑量有毒物質的細胞株。第十章 微藻培養(yǎng)及應用一、名詞微藻p190：一般指是那些在顯微鏡下才能辨別形態(tài)的微小藻類。二、知識點微藻的特點及分類p190；1、 特點：（1）利用太陽能和二氧化碳通過光合作用生產(chǎn)有機物，生長速度快，效率高，能耗低。（2）微藻提取有效成分不需要復雜的前處理。（3）種類多，許多微藻可以產(chǎn)生有生物活性的化合物。（4）可以利用貧瘠土地、鹽堿地等極端環(huán)境。（5）微藻培養(yǎng)簡單，容易產(chǎn)業(yè)化。2、 分類：微藻有原核微藻和真核微藻兩大類。根據(jù)微藻生長環(huán)境可分為水生微藻、陸生微藻和氣生微藻三類生態(tài)類群。水生微藻又有淡水生和海水生之分，根據(jù)分布又可

13、分為浮游微藻和底棲微藻。微藻的應用p190：微藻生物能源、藻類生物柴油、藻類生物制氫、生物活性物質制備、水產(chǎn)餌料、微藻基因工程、其他應用。第十一章 動物細胞培養(yǎng)一、名詞動物細胞工程細胞培養(yǎng)組織培養(yǎng)器官培養(yǎng)原代培養(yǎng)p215繼代培養(yǎng)p217細胞系p220克隆接觸抑制p207密度抑制p207天然培養(yǎng)液合成培養(yǎng)液“一代”細胞p217組織塊培養(yǎng)法單層細胞培養(yǎng)法大規(guī)模細胞培養(yǎng)技術p223二、知識點體外培養(yǎng)細胞的主要類型及其生長特點p206細胞系的生長過程的主要階段及其特征血清的主要用途及注意事項p208209細胞培養(yǎng)液配置的技術要點p211原代細胞培養(yǎng)的方法、主要步驟、技術要點以及各自的適用范圍 原代培養(yǎng)

14、方法:組織塊培養(yǎng)法,組織消化培養(yǎng)貼壁細胞傳代的主要方法及技術要點 酶消化法懸浮細胞傳代的主要方法及技術要點 直接傳代、離心法傳代細胞模型的建立與應用細胞培養(yǎng)的作用意義 生產(chǎn)實踐方面1）有害物質的快速檢測（2）大面積皮膚燒傷的修復（3）遺傳病的產(chǎn)前 診斷（4）建立各種醫(yī)學模型（5）大量生產(chǎn)生物活性物質 理論研究方面（1）細胞與細胞之間的相互作用（2）細胞內(nèi)部與細胞外界之間的作用（3）細胞內(nèi)胞質的活動4）胞質與核質之間的流動第十二章 轉基因生物反應器一、名詞轉基因動物p259基因治療p9基因打靶p9動物生物反應器p249二、知識點遺傳物質導入受體細胞的方法 1 物理法 ；包括電穿孔法、顯微注射法和

15、裸露DNA直接注射法。 2 化學法：DEAE-葡聚糖法、磷酸鈣DNA沉淀法和脂質體載體包埋法。 3 生物學方法：指病毒介導的基因轉移。常用DNA病毒載體和反轉錄病毒載體。轉基因動物的制備方法 1）原核期胚胎顯微注射法2）反轉錄病毒感染法 3）胚胎干細胞方法（ES細胞途徑）4）精子載體法5）人工酵母染色體（YAC）轉基因法6）受精前卵細胞顯微注射法7）其它方法:包括電脈沖法、染色體片段注入法、磷酸鈣共沉淀法、微彈轟擊法、基因剔除和基因嵌入法等動物生物反應器的類型與特點 乳腺生物反應器、血液生物反應器、基因改良動物第十三章 干細胞與組織工程一、名詞干細胞p278胚胎干細胞p280成體干細胞p287ES細胞p7EC細胞p7EG細胞p7組織工程：利用細胞生物學和工程學原理，將人體某部分的組織細胞種植和吸附在一種生物材料的支架上進行人工培養(yǎng)繁殖、擴增，然后移植到人體內(nèi)所需要的部位，從而達到器官修復或再造的治療目的的一種技術。二、知識點干細胞的分類與特點按其分化潛能可分為三類： 全能干細胞具有形成完整個體的分化潛能多能干細胞具有分化成一種器官的多種組織細胞的潛能，但卻失去了發(fā)育成完整個體的能力。專能干細胞只能向一種類型或密切相關的兩種類型的細胞分化。按干細胞來源分為兩類： 胚胎干細胞從早期胚胎中分離出來的干細胞，具有全能性?？梢苑只扇魏谓M織類型的細胞。 成體干細胞