101夏仙樹氯冉酸荷移分光光度法測(cè)定氨基己酸注射液的含量

1、1氯冉酸荷移分光光度法測(cè)定氨基己酸注射液含量屆別2014 屆系別化學(xué)系專業(yè)化學(xué)學(xué)口號(hào)2010121141姓名夏仙樹指導(dǎo)教師李省云 （教授)四年五月 氯冉酸荷移分光光度法測(cè)定氨基己酸注射液含量學(xué)生：夏仙樹指導(dǎo)教師：李省云太原師范學(xué)院化學(xué)系101摘要本文使用紫外分光光度法研究了氨基己酸與氯冉酸的荷移反應(yīng),再以此為基礎(chǔ)來測(cè)定氨基己酸注射液的含量。由實(shí)驗(yàn)可知，在無水乙醇介質(zhì)中，氨基己酸與氯冉酸在60C的水浴中加熱25min以后,可生成穩(wěn)定的荷移絡(luò)合物。此荷移絡(luò)合物的最大吸收波長ax=318nm ,表觀摩爾吸光系數(shù)3_1_1=0.80 相 L mol_ cm_ ,線性范圍 25-100 卩 g/mL關(guān)鍵

2、詞紫外分光光度法氨基己酸氯冉酸荷移反應(yīng)1引言荷移反應(yīng)是指電子相對(duì)豐富的分子與電子相對(duì)缺乏的分子之間通過電荷轉(zhuǎn)移而形成的絡(luò)合物的反 應(yīng)。由于這類荷移配合物具有特征吸收峰，摩爾吸光系數(shù)較高，這使分光光度法測(cè)定痕量含氮的有機(jī) 物成為可能，基于此反應(yīng)建立了測(cè)定有機(jī)化合物如氨基酸、芳胺、生物堿等物質(zhì)的新方法。該方法測(cè)定藥物含量，簡單準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，且具有較高的靈敏度2，因此近年來國內(nèi)外多見報(bào)道3_7。氨基己酸，又名6-氨基己酸（ACA），為白色或淡黃色結(jié)晶粉末，能溶于水，其3.52%水溶液為等滲溶液，熔點(diǎn)204_207C 8。本品是一種臨床常用的止血藥，能抑制纖維蛋白溶酶原的激活酶，使纖維蛋 白酶原不能

3、被激活為纖維蛋白溶酶，從而抑制纖維蛋白的溶解，達(dá)到止血的作用9。目前定量測(cè)定氨基己酸的方法主要有：柱前衍生高效液相色譜法10、分子熒光光譜法11、柱后衍生高效陽離子交換色譜法12_14等。利用與醌類試劑發(fā)生荷移反應(yīng)測(cè)定氨基酸含量的研究較多，如蘇氨酸、苯丙氨酸、L酪氨 酸、色氨酸等15_17方法相對(duì)成熟，而氨基己酸與醌類試劑發(fā)生荷移反應(yīng)的研究還未見報(bào)道。 故本文選用 氯冉酸為電子接受體，研究了氨基己酸與氯冉酸形成荷移絡(luò)合物的最佳條件。2 實(shí)驗(yàn)部分2.1主要儀器與試劑儀器 CARY300紫外可見分光光度計(jì)（美國Varian） ; HH_6電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永鑫實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備廠）；92M_202

4、A_DR電子天平（普利賽斯國際貿(mào)易上海 有限公司）；試劑 氨基己酸（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，生化試劑BR）;氯冉酸（恒興中遠(yuǎn)化工，化學(xué)純）無水乙醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司，分析純）；氨基己酸注射液（上海信誼金朱藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)110505，標(biāo)示量10mL : 2g）。實(shí)驗(yàn)用水為高純水。2.2溶液的配制方法氨基己酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱取 的容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻, 氯冉酸溶液的配制：準(zhǔn)確稱取氯冉酸 用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，配成0.10026g氨基己酸，用少量的無水乙醇溶解，轉(zhuǎn)移到 100mL 配成約 1.0026g/L的溶液，避光保存，待用。0.10034g,用少

5、量無水乙醇溶解，轉(zhuǎn)移到100mL的容量瓶中，1.0034g/L的溶液，待用。2.3實(shí)驗(yàn)方法首先準(zhǔn)確移取0.25ml氨基己酸試液，再準(zhǔn)確移取0.25ml氯冉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液于 10mL比色管中，用無318 nm水乙醇稀釋至刻度，搖勻，在60 C的水浴中加熱 25min，冷卻至室溫后，以試劑空白為參比，在最大吸收峰處，測(cè)定其吸光度。測(cè)定總的在測(cè)定后計(jì)算得知的氨基己酸樣品溶液中，加入一定量的氨基己酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液，反應(yīng)后，吸光度，用工作曲線計(jì)算回收率的氨基己酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的量除以加入的量，即得回收率。3結(jié)果與討論0.25mL3.1精密度的測(cè)定序號(hào)12345678910A0.41580.40140.41320.41

6、010.41120.38020.40820.42920.40120.36623.2工作曲線的繪制在選定的實(shí)驗(yàn)條件下，準(zhǔn)確移取不同量的氨基己酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.25 1.0 mL),在最佳條件下反應(yīng)，測(cè)定絡(luò)合物的吸光度，并繪制工作曲線,其結(jié)果見表2、圖1。結(jié)果表明：氨基己酸含量在45100呃/mL時(shí)符合比爾定律。線性回歸方程為A=0.00826c-0.0256 (單位：j g/mL),相關(guān)系數(shù)R =0.9983，表觀摩爾吸光系數(shù) =0B00X103l mol-1 cm-1。表2工作曲線的測(cè)定氨基己酸標(biāo)準(zhǔn)液（mL）濃度 c ( (jg/mL)Abs0.25250.16680.30300.22790.3

7、5350.28010.40400.30400.45450.3339在選定的最佳條件下，即:首先準(zhǔn)確移取氨基己酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25mL ,再移取氯冉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL比色管中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，在60 C下水浴加熱25min并冷卻至室溫后，以試劑空白為參比，在 300nm-500nm范圍內(nèi)進(jìn)行波長掃描，測(cè)其吸光度，按照實(shí)驗(yàn)方法平行測(cè)定10次，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，該方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.50%。表1精密度的測(cè)定0.50500.38020.60600.48400.70700.56560.80800.61540.90900.71951.001000.80090.90.7IB0.12030

8、405060708090100110ug/ml圖1工作曲線3.3絡(luò)合比測(cè)定3和圖2）,表明氨基己酸與氯冉酸所形成的荷用等摩爾連續(xù)變化法測(cè)定絡(luò)合物的組成（結(jié)果見表 移絡(luò)合組成比為 2:1。等摩爾連續(xù)變化法：配制濃度4.00 10-3mol/L的氨基己酸溶液（M ）:準(zhǔn)確稱取 0.13117g氨基己酸試劑，用無水乙醇溶解并定容至250mL的容量瓶中，保存?zhèn)溆?。配制濃?.00 XI0-3mol/L的氯冉酸溶液（N）:準(zhǔn)確稱取 0.20898g氯冉酸試劑，用無水乙醇溶 解并定容至 250mL的容量瓶中，保存?zhèn)溆谩?zhǔn)確移取系列 M和N溶液，改變 M溶液和N溶液的體積比，使總的物質(zhì)的量不變。按照實(shí)驗(yàn)方

9、法測(cè)定溶液的吸光度，結(jié)果見表3。以氨基己酸的物質(zhì)的量分?jǐn)?shù)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，作圖（見=2:1。圖2）,可確定絡(luò)合物的組成為氨基己酸：氯冉酸表3絡(luò)合物組成的測(cè)定M (mL)N (mL)0.200.400.600.801.001.201.401.601.80M/0.10.20.30.40.50.60.70.80.91.801.601.401.201.000.800.600.400.20(M+N)吸光度0.2240.3710.4890.7390.9111 . 2831.0120.8210.539圖23.4樣品測(cè)定3.4.1氨基己酸試液(1g/L)的制備用1mL的吸量管準(zhǔn)確吸取 0.50mL氨基

10、己酸注射液，轉(zhuǎn)移至棕色的100mL容量瓶，再用無水乙醇定容至刻度，搖勻，備用。3.4.2氨基己酸試液吸光度的測(cè)量首先準(zhǔn)確移取0.25ml氨基己酸試液，再準(zhǔn)確移取 0.25ml氯冉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液于 10mL比色管中，用無 水乙醇稀釋至刻度，搖勻，平行配置5份，在60C的水浴中加熱 25min，冷卻至室溫后，以試劑空白為參比，在318nm最大吸收峰處，測(cè)定其吸光度，結(jié)果見表4。結(jié)果表明，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.16%，氨基己酸樣品的含量為0.962ug/mL。表4氨基己酸試液吸光度的測(cè)量序號(hào)0.7440.8030.7320.7570.80923.5回收實(shí)驗(yàn)在測(cè)定后計(jì)算得知的氨基己酸樣品溶液中，加入0.30m

11、L(1-5)、0.50mL(6-10)、0.80mL(11-15)的氨基己酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，在最佳條件下反應(yīng)之后，測(cè)定總的吸光度，用工作曲線計(jì)算回收率的標(biāo)準(zhǔn)溶液的量除以加入的量，即得回收率，結(jié)果見表5,回收率的平均值為 99.09%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 2.15%。表5測(cè)定結(jié)果加入樣品量(mL)標(biāo)準(zhǔn)加入 量(mL)吸光度平均值回收率(%)0.250.301.0181.0121.0181.0160.9931.01197.660.250.501.1781.1801.1691.1701.1711.17498.06 0.250.801.4291.4181.4561.4581.4391.440101.54 3.6

12、文獻(xiàn)法測(cè)定 3.6.1氫氧化鈉滴定液的配制準(zhǔn)確稱取氫氧化鈉1.04587g于250mL燒杯中，加入少量新沸過的冷水溶解，在室溫下轉(zhuǎn)入250mL容量瓶中，用新沸過的冷水稀釋到刻度，搖勻。3.6.2氫氧化鈉滴定液的標(biāo)定準(zhǔn)確稱取取在105C干燥至恒重的基準(zhǔn)物質(zhì)鄰苯二甲酸氫鉀(Mr=204.22g/mol)2.04730g至50ml小燒杯中，加適量新沸過的冷水使之溶解，在室溫下轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，用新沸過的冷水稀釋到刻度，搖勻。用移液管準(zhǔn)確移取20ml鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液至錐形瓶中，滴兩滴酚酞，用氫氧化鈉滴定液滴 定至溶液變色為止。重復(fù)測(cè)定4次。記錄消耗的氫氧化鈉滴定液的體積，并計(jì)算氫氧化鈉滴定

13、液的濃度。測(cè)定結(jié)果見表6。表6測(cè)定結(jié)果測(cè)定次數(shù)1234V始/g0.100.400.300.40V 終/ml21.9522.2522.2022.30V/ml21.8521.8521.9021.90VNaoH/ml121.87-1CNaOH/mol 0.091683.6.3藥典法測(cè)氨基己酸注射液的含量準(zhǔn)確移取氨基己酸注射液(上海信誼金朱藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)110505，標(biāo)示量10mL : 2g)1ml于錐形瓶中，再加入甲醛溶液5ml，乙醇溶液20ml，酚酞指示劑兩滴，搖勻，用氫氧化鈉滴定液滴定。另取新沸過的冷水15ml，加甲醛溶液 5ml,乙醇溶液20ml，酚酞溶液兩滴至另-一錐形瓶中作空白試驗(yàn)

14、校正即得。每1ml的0.1mol/L氫氧化鈉溶液相當(dāng)13.12mg氨基己酸。重復(fù)測(cè)定5次。測(cè)定結(jié)果見7。表7測(cè)定結(jié)果測(cè)定次數(shù)12345V空白/g0.10.250.350.30.15V滴定/ml16.3016.4016.5016.6016.35V/ml16.2016.1516.1516.3016.20V NaOH/ml16.20mC6H13NO2/g0.1948w/ %97.403.7統(tǒng)計(jì)處理用t檢驗(yàn)法檢驗(yàn)本法與藥典法測(cè)定結(jié)果之間是否存在顯著性差異，經(jīng)計(jì)算，本法與藥典法測(cè)定結(jié)果之間無顯著性差異，即本方法不存在系統(tǒng)誤差。結(jié)果見表8。具體計(jì)算過程如下：畢%業(yè)2%I. 31/2=1.36I X - T

15、 ISx1經(jīng)查tp ,f值表，選置信度為 95%的值，f (n-1) =f(3-1)=f (2),此時(shí)理論值為4.30 1.36，說明本法與藥 典法測(cè)定結(jié)果之間不存在顯著性差異，即本方法不存在系統(tǒng)誤差。表8t=2.15%本法藥典法t99.09%97.40%1.36參考文獻(xiàn)12Mullike n RS. Structures of compi exes formed by haloge n molecules With aromatic and with oxyge nated solve ntsJ. J Am Chem Soc,1950,72:600.趙彥美，荷移光度法在藥物分析中的應(yīng)用J.咸

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20、 n Normal Un iversityClass 092C for 25 minutes. The apparentm at 318nm. The calibration curve was linear inAbstract The charge-tra nsfer reacti on betwee n amincap roic acid and chlora nilic acid in alcohol solutio n was studied sp ectro photometrically., and the n to determ ine the content of Aminocap roic Acid Inject ion. Exp erime nts in dicated that the charge-tra nsfer react ion was carried out at 603-1-1molar absoptivity was determined to be 0.5510 L mol二二 the concentrat