食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定

1、.：.；食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定 發(fā)布單位:太原市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)視局報送時間:2007年12月19日閱讀次數(shù):342附件1GB/T4789.2-2003食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定 1范圍本規(guī)范規(guī)定了食品中菌落總數(shù)的測定方法。本規(guī)范適用于各類食品中菌落總數(shù)的測定。2術(shù)語菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過處置，在一定條件下培育后(如培基成分、培育溫度和時間、pH、需氧性質(zhì)等)，所得1mL(g)檢樣中所含菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定的培育條件下所得結(jié)果，只包括一群在營養(yǎng)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫性需氧的菌落總數(shù)。菌落總數(shù)主要作為斷定食品被污染程度的標(biāo)志，也可以運(yùn)用這一方法察看細(xì)菌在食品中繁衍的動態(tài)，以便對被檢

2、樣品進(jìn)展衛(wèi)生學(xué)評價時提供根據(jù)。3援用規(guī)范GB/T 4789.28食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗染色法、培育基和試劑4設(shè)備和資料4.1冰箱：04。4.2恒溫培育箱：361。4.3恒溫水浴鍋：461。4.4均質(zhì)器或滅菌乳缽。4.5架盤藥物天平：0g500g,準(zhǔn)確至0.5g。4.6菌落計數(shù)器。4.7放大鏡4X。4.8 滅菌吸管：1 mL具0.01 mL刻度、10 mL具0.1 mL刻度。4.9 滅菌錐形瓶：500 mL。4.10 滅菌玻璃珠。5 mm。4.11 滅菌培育皿：直徑90mm。4.12 滅菌試管。16X16 mm。4.13 廣口瓶或三角瓶：容量為500mL。 4.14 電爐。4.15試管架。4.16

3、酒精燈。4.17滅菌鑷子、滅菌刀或剪子等。5培育基和試劑5.1營養(yǎng)瓊脂培育基：按GB/T4789.28中4.7規(guī)定。5.2磷酸鹽緩沖稀釋液：按GB/T4789.28中3.22規(guī)定。5.30.85%滅菌生理鹽水。5.475%乙醇。6檢驗程序 菌落總數(shù)的檢驗程序如下。檢樣 選擇23個適宜的稀釋度各取1 mL分別參與滅菌培育皿內(nèi)做成幾個適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液每皿內(nèi)參與適量營養(yǎng)瓊脂菌落計數(shù) 361 48h2h報告7操作步驟7.1檢樣稀釋及培育7.1.1以無菌操作,取樣25mL或25 g放入225mL滅菌生理鹽水中，經(jīng)充分振搖作成1：10均勻稀釋液。 固體檢樣在參與稀釋液后,最好置均質(zhì)器中以8000r/min

4、10000r/min的速度處置1min,做成1:10的均勻稀釋液。7.1.2用1mL滅菌吸管汲取110稀釋液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)(留意吸管尖端不要觸及管內(nèi)稀釋液)，振搖試管，混合均勻，做成1100的稀釋液。7.1.3另取1mL滅菌吸管，按上條操作順序，做10倍遞增稀釋液，如此每遞增稀釋一次，即換用1支1mL火菌吸管。7.1.4根據(jù)食品衛(wèi)生規(guī)范要求或?qū)?biāo)本污染情況的估計，選擇23個適宜稀釋度，分別在做10倍遞增稀釋的同時，即以汲取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個稀釋度做兩個平皿。7.1.5稀釋液移入平皿后，應(yīng)及時將涼至46營養(yǎng)瓊脂培育基(

5、可放置于461水浴保溫)注入平皿約15mL，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。同時將營養(yǎng)瓊脂培育基傾入加有1mL稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對照7.1.6待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置361溫箱內(nèi)培育482h。7.2菌落計數(shù)方法做平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以防脫漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。7.3菌落計數(shù)的報告7.3.1平板菌落數(shù)的選擇選取菌落數(shù)在30300之間的平板作為菌落總數(shù)測定規(guī)范。一個稀釋度運(yùn)用兩個平板，應(yīng)采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌落生長時，那么不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，假設(shè)片狀菌落不到平板的一半，而

6、其他一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長時(菌落之間無明顯界限)，假設(shè)僅有一條鏈，可視為一個菌落；假設(shè)有不同來源的幾條鏈，那么應(yīng)將每條鏈作為一個菌落計。7.3.2稀釋度的選擇7.3.2.1應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之(見表1中例1)。7.3.2.2假設(shè)有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30300之間，那么視兩者之比如何來決議。假設(shè)其比值小于或等于2，應(yīng)報告其平均數(shù)；假設(shè)大于2那么報告其中較小的數(shù)字(見表中例2及3)。7.3.2.3假設(shè)一切稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，那么應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告

7、之(見表1中例4)。7.3.2.4假設(shè)一切稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，那么應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之(見表1中例5)。7.3.2.5假設(shè)一切稀釋度均無菌落生長，那么以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之(見表1中例6)。7.3.2.6假設(shè)一切稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，其中一部分大于300或小于30時，那么以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之(見表1中例7)。7.3.3菌落數(shù)的報告菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按其實有數(shù)報告，大于100時，采用兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來表示(見表1中“報告

8、方式欄)。 表1稀釋度選擇及菌落數(shù)報告方式例次 稀釋液及菌落數(shù)兩稀釋液之 比菌落總數(shù)cfu/g(mL)報告方式cfu/g(mL)10-110-210-31多不可計16420-16 40016000或1.6X1042多不可計295461.637 75038000或3.8X1043多不可計271602.227 10027000或2.7X1044多不可計多不可計313-313 000310000或3.1X105527115-270270或2.7X1026000-1X10 107多不可計30512-30 50031000或3.1X104附件2GB/T4789.3-2003 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗大腸菌群

9、測定 1范圍本規(guī)范規(guī)定了食品中大腸菌群的測定方法。本規(guī)范適用于食品中大腸菌群的測定。2術(shù)語大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染目的來評價食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的能夠。食品中大腸菌群數(shù)系以100mL(g)檢樣內(nèi)大腸菌群最能夠數(shù)(MPN)表示。3援用規(guī)范GB/T4789.28食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗染色法、培育基和試劑4設(shè)備和資料4.1溫箱：361。4.2冰箱：04。4.3恒溫水?。?4.50.5。4.4天平。4.5顯微鏡。4.6均質(zhì)器或乳缽。4.7平皿：直徑為90mm。4.8試管。4.9吸管。4.

10、10廣口瓶或三角燒瓶：容量為500mL。4.11玻璃珠：直徑約5mm。4.12載玻片。4.13酒精燈。4.14試管架。5培育基和試劑5.1乳糖膽鹽發(fā)酵管：按GB/T4789.28中4.9規(guī)定。5.2伊紅美藍(lán)瓊脂平板：按GB/T4789.28中4.25瀝規(guī)定。5.3乳糖發(fā)酵管：按GB/T4789.28中4.10規(guī)定。5.4EC肉湯：按GB/T4789.28中4.11規(guī)定。5.5磷酸鹽緩沖稀釋液：按GB/T4789.28中3.22規(guī)定。5.6生理鹽水。5.7革蘭氏染色液：按GB 4789.28中2.2規(guī)定。6檢驗程序 大腸菌群檢驗程序如下：圖略稀釋檢樣乳糖膽鹽發(fā)酵管361 48h2h產(chǎn)氣大腸菌群陰

11、性伊紅美藍(lán)瓊脂平板361 48h2h不產(chǎn)氣報告革蘭氏染色乳糖發(fā)酵管361 48h2h革蘭氏陽性革蘭氏陰性無芽胞桿菌產(chǎn)氣不產(chǎn)氣大腸菌群陰性大腸菌群陽性大腸菌群陰性報告報告報告7操作步驟7.1檢樣稀釋7.1.1以無菌操作將檢樣25mL(或g)放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)(瓶內(nèi)予置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成110的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器，以8 00010000r/min的速度處置1min，做成110的均勻稀釋液。7.1.2用1mL滅菌吸管汲取110稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管混勻，做成1100的

12、稀釋液。7.1.3另取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管。7.1.4根據(jù)食品衛(wèi)生規(guī)范要求或?qū)z樣污染情況的估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種3管。7.2乳糖發(fā)酵實驗將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1mL及1mL以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管，置361溫箱內(nèi)，培育242h，如一切乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，那么可報告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，那么按以下程序進(jìn)展。7.3分別培育將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置361溫箱內(nèi)，培育1824h，然后取出，察看菌落形狀，并做革

13、蘭氏染色和證明實驗。7.4證明實驗在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落12個進(jìn)展革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置361溫箱內(nèi)培育242h，察看產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。7.5報告根據(jù)證明為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，報告每100mL(g)大腸菌群的MPN值(見表1)。 陽性管數(shù) MPN100mL(g)95%可信限1mL(g)X30.1mL(g)X30.01mL(g)X3下 限上 限000000000123303060905900000111101233060901205130000022220123609012016000003333

14、01239013016019011110000012340701101505102002101111111101237011015019010302303602222000001239014020026010303603703333000001232303906409504070150120013003800注1:本表采用3個稀釋度1mL(g)、0.1mL(g)、0.01mL(g)，每稀釋度三管注2：表內(nèi)所列數(shù)量如改用10mL(g)、1mL(g)和0.1mL(g)時，表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低10倍；如改用0.1mL(g)、0.01mL(g)、0.001mL(g)時，那么表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)添加10倍。其他

15、可類推。表1 大腸菌群最能夠數(shù)MPN檢索表附件3GB/T4789.15-2003 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗霉菌和酵母計數(shù)1 范圍本規(guī)范規(guī)定了食品中大腸菌群的測定方法。本規(guī)范適用于食品中大腸菌群的測定。2援用規(guī)范GB 4789.28食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗染色法、培育基和試劑3設(shè)備和資料3.1冰箱：04。3.2恒溫培育箱：2528。3.3恒溫振蕩器。3.4顯微鏡：10X100X。3.5架盤藥物天平：0500 g，準(zhǔn)確至0.5 g。3.6滅菌具玻塞錐形瓶：300 mL。3.7滅菌廣口瓶：500 mL。3.8滅菌吸管：1 mL具0.01 mL刻度、10 mL具0.1 mL刻度。3.9滅菌平皿。3.10滅菌試

16、管：16mmX160mm。3.11載玻片、蓋玻片。3.12滅菌牛皮紙袋、塑料袋。3.13滅菌金屬勺、刀。4培育基和試劑4.1馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培育基，附加抗菌素按GB/T 4789.28中4.78規(guī)定。4.2孟加拉紅培育基：按GB/T 4789.28中4.25瀝規(guī)定。4.3滅菌蒸餾水。5 檢驗程序檢樣糧 食塊狀食品粉狀食品液狀食品糊狀食品25g+225ml無菌水25ml+225ml無菌水做成幾個適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液 選擇三個適宜稀釋度，各取1mL參與滅菌平皿內(nèi)每皿參與適量培育基可先用馬鈴薯-葡萄糖瓊脂附加抗菌素、高鹽察氏培育基或孟加拉紅培育基菌落計數(shù) 2528 5d報 告6操作步驟6.1以無菌操作將檢樣25mL(或g)放于含有225mL滅菌生理鹽水的具塞錐形瓶中，振搖30min，即為110稀釋液。6.2用1mL滅菌吸管汲取110稀釋液10mL，注入滅菌試管中，另用1mL滅菌吸管反復(fù)吹吸50次，使霉菌孢子充分散開。6.3取1mL110稀釋注入含有9 mL滅菌水的試管中，另換一支1mL滅菌吸管吹吸5次，此液為1：100稀釋液。6.4按上述操作順序做10倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換用一支1mL，