魚(yú)病專(zhuān)題-日本國(guó)立北海道大學(xué)獸醫(yī)學(xué)部傳染病學(xué)講座8

1、魚(yú)病專(zhuān)題日本國(guó)立北海道大學(xué)獸醫(yī)學(xué)部傳染病學(xué)講座林子恩郭登賦兒玉洋十、魚(yú)病疫苗9.3 魚(yú)類(lèi)所使用的藥物及相關(guān)問(wèn)題(1)化學(xué)療法劑：如表 9 1 9 4 所列 9 個(gè)抗生素、4 個(gè)合成藥劑、7 個(gè)鶫喃劑、4 個(gè)磺胺劑，共計(jì) 24 種化學(xué)藥劑供參考。(2)生物制劑：隨著近年來(lái)化學(xué)藥劑的無(wú)效後，開(kāi)發(fā)生物制劑 ( 即疫苗或菌苗 ) 變得相當(dāng)重要。日本正在開(kāi)發(fā)中的 6 個(gè)是弧菌癥 ( Vibrio )，Aeromonas 感染癥 ( Aeromonas sp. )，類(lèi)結(jié)節(jié)癥 ( Pasteurella )，Norcardia 癥 ( Norcardia sp. ) 及鮭魚(yú)的 I P N、I H N。都以不

2、活化疫苗方式來(lái)使用。(3)一般化合物：a. Machilite greew ：據(jù)毒，水中霉菌去除時(shí)用 2.5 - 4 ppm1 小時(shí) 5 7 日3 周流水添加或 0.2 - 0.5 ppm池中散布。b. Methylene blue：水中霉菌或表在性害 去除時(shí) 1 5 ppm池中散布。c. Formalin：害 驅(qū)除 10 - 30 ppm池中散布。d.過(guò)錳酸鉀：害 驅(qū)除 3 - 5 ppm池中散布。e. Trichlonofonm ( 有機(jī)磷 )：害 驅(qū)除 0.2 - 0.5 ppm。f.硫酸銅：害 驅(qū)除 0.5 - 1 ppm。9.4 診療的基本技術(shù)魚(yú)病的發(fā)生多群體性，因此其診療法也以群體

3、為對(duì)象，但對(duì)所謂玩賞魚(yú)則牽涉到外科技術(shù)或物理療法，對(duì)獸醫(yī)師是發(fā)揮專(zhuān)長(zhǎng)的時(shí)候。(1)診斷要領(lǐng)：由於養(yǎng)殖池的集團(tuán)式發(fā)病，允許多量剖檢病魚(yú)，因此由剖檢最能夠且容易進(jìn)行診斷，而個(gè)別的疾病并不能解釋群體的發(fā)病現(xiàn)象。a.早期發(fā)現(xiàn)：魚(yú)和一般陸地動(dòng)物或人類(lèi)一樣，疾病發(fā)現(xiàn)得早，愈能早做處理，治療效果愈能奏效。事實(shí)上，天候也影響魚(yú)的生理變化，對(duì)魚(yú)異樣的觀察稍有影響。b.環(huán)境的觀察：做為一個(gè)診療魚(yú)病的獸醫(yī)工作人員，特別要留意季節(jié)和天候，因?yàn)榧膊≡诟骷竟?jié)的消長(zhǎng)，天候劇變影響的水質(zhì)變化和魚(yú)類(lèi)生理變化，都必要考慮。後者的例子如酸性雨 ( P H 4 - 5 ) 和水溫 3上下的變化都使魚(yú)的食欲低下。一位有經(jīng)驗(yàn)的獸醫(yī)師，在

4、開(kāi)始觀察魚(yú)體之前，對(duì)周遭的環(huán)境應(yīng)先詳細(xì)觀察。c.畜主的報(bào)告：對(duì)以下的重點(diǎn)，如畜主未涉及之時(shí)或未詳細(xì)報(bào)告時(shí)，應(yīng)主動(dòng)再問(wèn)清楚，記錄之。1.初發(fā)病的情形：異樣初出現(xiàn)是何時(shí)？死魚(yú)被檢出是何時(shí)？2.病歷：該場(chǎng)過(guò)去的病歷曾經(jīng)如何處理過(guò)，結(jié)果如何？3.病況經(jīng)過(guò)及預(yù)先做了何處理，投了何種藥劑？4.魚(yú)的產(chǎn)地來(lái)源及購(gòu)入徑路，應(yīng)掌握實(shí)在的資料。5.飼養(yǎng)期間、年齡及準(zhǔn)備上市的預(yù)定時(shí)間。6.飼料的種類(lèi)、廠牌和給飼方法，是相當(dāng)重要的。7.水的來(lái)源及流水量：河川水的污染及地下水空氣過(guò)飽和溶存是常發(fā)生的問(wèn)題。8.飼養(yǎng)尾數(shù)，是推算飼養(yǎng)管理方式的正確與否及投藥的參考。9.消毒、殺菌劑如何使用。劑量計(jì)算正確否。d.臨床癥狀的觀察：

5、魚(yú)在水中的各種動(dòng)作是提供診斷最好的資料方向，1.攝食量、搶食動(dòng)作，2.異常的游泳表現(xiàn)，如上浮、開(kāi)口、擦池壁、狂奔跳躍、蛇行回旋、離群。e.剖檢前的外觀檢查：外觀的異常充出血，顏色改變，肥瘦程度，眼及嘴吻的異常否，鰓蓋的閉鎖，都應(yīng)詳加記錄。9.5 投藥(1)經(jīng)口方法：可分為膠囊投入及混合在飼料中給飼 2 種方法。前者多應(yīng)用在觀賞魚(yú)行個(gè)別治療，後者對(duì)群體疾病時(shí)操作上省勞力，但效果頗受以下因素的影響，是為其缺點(diǎn)。a.必需正確算出總重量，即數(shù) 10 尾的平均體重乘以推定尾數(shù)，這點(diǎn)相當(dāng)難把握，常有誤差。過(guò)量投藥則易生藥害，不足則易造成抗藥性。b.養(yǎng)殖現(xiàn)場(chǎng)對(duì)藥物之稱(chēng)重，常忽略其精確性，且數(shù)百公斤的飼料與數(shù)

6、公克的抗生素混合應(yīng)小心混合才能均勻。c.投藥時(shí)為求正確給藥，常在投藥前數(shù)日開(kāi)始絕食，投藥當(dāng)天減少飼料量，是故魚(yú)在投藥期間幾乎不生長(zhǎng)，影響經(jīng)營(yíng)效益。d.魚(yú)對(duì)化學(xué)物質(zhì)的異味相當(dāng)敏感，常把已咽下口的飼料再吐出。e.有 20 - 30%的水吞下口後自鰓逸散，且飼料與水接觸的瞬間少部分溶於水，故應(yīng)考慮比常量多添加以補(bǔ)足這些損失。f.因個(gè)體間攝食量的差異，所進(jìn)入體內(nèi)的劑量也有差異，如以多次投藥方式可以減少不均的缺失。g.因病魚(yú)食欲已相當(dāng)?shù)拖?，故投藥餌時(shí)常造成健康魚(yú)的過(guò)量攝入，病魚(yú)卻不足。(2)浸漬法：常用於疫苗或化學(xué)藥劑的經(jīng)皮或經(jīng)鰓投藥法，達(dá)成預(yù)防或治療的目的。對(duì)體表真菌、害 的驅(qū)除也是常用的方法。疫苗的

7、浸漬法有所謂的“ 一浴法 ”和“ 二浴法 ”兩種，前者是直接浸漬魚(yú)體於疫苗液中，而二溶法則指以高張食鹽水 ( 5.32% ) 先浸 2 分鐘，再用疫苗液浸數(shù)分鐘，達(dá)到較好的效果。但浸漬法必需注意以下事項(xiàng)。a.水溫、P H、光線影響藥物濃度及安全量，故投藥時(shí)得先檢查水質(zhì)。b.止水池的池水量計(jì)算稍困難，對(duì)於安全劑量小的應(yīng)特別小心投藥。c.注水口應(yīng)停止注入，以高濃度短時(shí)間 ( 0.5 - 2 小時(shí) ) 完成投藥。(3)噴霧法：以噴霧器直接噴霧在鰓部達(dá)到目的。10.1 魚(yú)病疫苗開(kāi)發(fā)的歷史及現(xiàn)狀至目前為止，就魚(yú)病對(duì)策而言，已在魚(yú)群的衛(wèi)生管理、遺傳改良、藥物治療以及免疫預(yù)防方面做了相當(dāng)多的努力。但是，隨著

8、高頻度地使用抗生素和化學(xué)藥物的結(jié)果，使得由藥物引起的環(huán)境污染，魚(yú)體內(nèi)藥物殘留和藥物耐性菌的出現(xiàn)成為大家頭痛的問(wèn)題。因此，以疫苗為中心的預(yù)防衛(wèi)生，被認(rèn)為今後越來(lái)越重要了。但是，和哺乳類(lèi)及鳥(niǎo)類(lèi)相比，有關(guān)魚(yú)病疫苗的研究歷史還非常淺。開(kāi)發(fā)高效的魚(yú)病疫苗是當(dāng)務(wù)之急。開(kāi)發(fā)魚(yú)病疫苗的嘗試始於 1940 年代，首先是開(kāi)發(fā)了 Aeromonas salmonicida 的疫苗。乃將氯仿 ( chloroform ) 處理過(guò)的不活性菌體，經(jīng)口投與鱒魚(yú) ( Cutthroat trout )，證明該疫苗有效，同時(shí)，對(duì)疫苗成分、不活性的方法、Ajuvant 及疫苗投與法等也做了很多研究。其方法也被應(yīng)用於其它細(xì)菌性疾病

9、。表一乃列舉了現(xiàn)在已上市的各種實(shí)用疫苗及其使用國(guó)家。表 1：目前世界各國(guó)使用的主要魚(yú)病疫苗疫 苗國(guó) 名投與方法市販檢定制度 Vibrio disease Furunculosis Enteric vedmouth disease 澳洲 美國(guó) 挪威 丹麥、芬蘭、日本 紐西蘭、瑞士 英國(guó) 澳洲 美國(guó) 澳洲 美國(guó) 義大利 噴霧、浸漬、注射 噴霧、浸債 浸漬、注射 浸漬 浸漬 浸漬、注射 注射 噴霧、浸漬、注射 噴霧、浸漬 浸漬 有關(guān) Yersinia ruckeri ( enteric redmouth disease 的病原菌 ) 疫苗的開(kāi)發(fā)，首先報(bào)告於 1965 年，乃采用 Phenol 不活化

10、菌體，經(jīng)口或接種虹鱒。被免疫魚(yú)經(jīng)攻擊其後，耐過(guò)率達(dá)到 90%，為本病的疫苗向商品化方向打下了基礎(chǔ)。目前使用的疫苗為福馬林不活化疫苗。另外，1970 年初在美國(guó)首先研制了弧菌病 ( Vibrio disease ) 疫苗。隨後，世界各國(guó)也相繼開(kāi)發(fā)出其死菌疫苗。已知 Vibrio 菌有數(shù)種血清型，因此，目前使用的疫苗多為多價(jià)疫苗。此外，enteric vedmouth disease 和 furunculosis 病的混合疫苗已達(dá)到實(shí)用化的程度?，F(xiàn)在使用的疫苗中，Vibrio 病疫苗是最有效的魚(yú)病疫苗。除少數(shù)實(shí)用化疫苗外，更多的是尚處?kù)堆芯侩A段，還未達(dá)到實(shí)用化的程度。主要被研究的疫苗對(duì)象有 Aer

11、omonas hydrophila 感染癥，Edwardsiella disease、Cowmnavis disease、細(xì)菌性腎臟病 ( Bacterial Ridney disease )、Pasteurellosis、Streptococcosis、Nocardiosis 以及 Pseudomonas disease。傳染性胰臟壞死癥 ( infectious pancreatic necrosis ) 病毒性出血性散血癥 ( viral haemorrhagie septicemia ) 和傳染性造血器壞死癥 ( infectious hematopoietic necrosis )

12、等病毒性疾病的試驗(yàn)疫苗也陸續(xù)被研制出來(lái)，但都沒(méi)有得到令人滿意的效果?，F(xiàn)在尚無(wú)病毒性疾病疫苗市販。10.2 影響疫苗效果的諸因素免疫疫苗的開(kāi)發(fā)，其主要研究對(duì)象可分成以下幾個(gè)重點(diǎn)。(1)防御免疫反應(yīng)的解析。(2)免疫反應(yīng)誘導(dǎo)抗原的性狀。(3)抗原的大量生產(chǎn)。(4)投與條件。在此，就影響免疫效果的因素加以說(shuō)明：1.魚(yú)體重疫苗投與時(shí)機(jī)影響抗體產(chǎn)生所需的時(shí)間，抗體產(chǎn)生量及免疫持續(xù)期間。預(yù)防效果和魚(yú)體重有密切的關(guān)系。以 V. anguillarum 及 Y. ruckeri 的菌苗做浸漬免疫 ( batk immunization ) 的效果實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)體重 0.9 2.5 g 的鮭魚(yú)幼魚(yú)，投與後可獲得充分

13、的預(yù)防效果。但是對(duì)體重 0.5 g 以下的幼魚(yú)，投與後就只得到較弱的免疫效果。免疫體重 1 g 的幼魚(yú)時(shí)，防御效果可持續(xù)大約 120 天，2 g 幼魚(yú)時(shí)，約 180 天，4 g 以上的幼魚(yú)時(shí)，免疫效果能維持達(dá)一年以上。由以上的結(jié)果，對(duì)象 I P N、I H V 只在幼魚(yú)期流行的傳染病，必須考慮開(kāi)發(fā)其它免疫預(yù)防法。在此，可以考慮移行抗體法。但至目前為止，有關(guān)魚(yú)類(lèi)是否存在母子免疫的問(wèn)題，持否定的意見(jiàn)較多。2.水溫抗體產(chǎn)生量及抗體產(chǎn)生所需的時(shí)間，或者二次免疫反應(yīng)等魚(yú)類(lèi)免疫反應(yīng)易受環(huán)境水溫的影響。因此，要獲得充分的免疫效果時(shí)，就必需考慮水溫的重要因素。關(guān)於鯉魚(yú)，低水溫不僅會(huì)延遲抗體產(chǎn)生細(xì)胞的出現(xiàn)時(shí)間，

14、而且使抗體產(chǎn)生量減少。用 V. anguillarum 菌苗免疫不同水溫飼養(yǎng)的 Sockeye Salmon 魚(yú)後，再用強(qiáng)毒細(xì)菌攻擊觀察其防御效果的表現(xiàn)，在 10飼養(yǎng)時(shí)，免疫防御效果 10 天後才能獲得，但在 18飼養(yǎng)時(shí)，只需 5 天就可獲得。在 4 飼養(yǎng)時(shí)，獲得同樣的防御效果花費(fèi)天數(shù)更長(zhǎng)，約 40 天。另外，在 6.7飼養(yǎng)的銀鮭，接種 A. Salmonicida 的 LPS 後 4 周才能檢測(cè)出抗體，但在 17.8飼養(yǎng)時(shí)，一周後就可檢測(cè)出抗體。3.緊迫因素 ( Stress )飼育水溫、飼養(yǎng)密度、水質(zhì)等飼養(yǎng)環(huán)境條件變化，會(huì)使魚(yú)產(chǎn)生緊迫。red sea bream 魚(yú)在飼養(yǎng)時(shí)的水中鹽濃度、水

15、溫急劇變化時(shí)，其血中類(lèi)固醇含量顯著增加。同樣的現(xiàn)象在 Striped bass 魚(yú)也可以觀察到。對(duì)鮭魚(yú)種種的緊迫因素不僅會(huì)使血中類(lèi)固醇量增加，而且會(huì)影響抗體產(chǎn)生細(xì)胞數(shù)，抗體價(jià)及淋巴球反應(yīng)性等免疫反應(yīng)。4.疫苗投與方法目前，主要疫苗投與法有以下四種：a.接種法 ( 注射法 )，b.浸漬法，c.噴霧法 ( Spray ) 或散布法 ( Shower ) 和 d.經(jīng)口法。從迅速性，效果性及易於調(diào)節(jié)投與抗體重而言，接種法乃為疫苗投與法中最理想的。在 V. anguillarum 菌苗免疫鮭魚(yú)，觀察不同投與法的效果實(shí)驗(yàn)時(shí)，腹腔內(nèi)接種，一周後就會(huì)出現(xiàn)免疫效果。和其相比，浸漬或噴霧法，約於 6 周後才有防御

16、效果，經(jīng)口法，所需時(shí)間更長(zhǎng)，大約 6 周至 8 周。但接種法也有其缺點(diǎn)，一是得花費(fèi)大量的勞力，二是需技術(shù)熟練的操作者。特別在野外作業(yè)，接種大量幼魚(yú)時(shí)更顯得此方法不實(shí)用。和接種法相比，浸漬法一次則可以免疫大量的魚(yú)，甚為方便。此法乃將魚(yú)直接放入疫苗液中浸漬或放入高張溶液中浸漬。僅十多秒鐘就可獲得較好的免疫效果。含有抗原的高張溶液浸漬魚(yú)時(shí)，抗原會(huì)比一般溶液高效率地滲透進(jìn)血液中。噴霧法或散布法和浸漬法一樣，一次可以免疫大量的魚(yú)的優(yōu)點(diǎn)，而且效果良好。和以上三種投與法相比，經(jīng)口法可以大大地減少不必需的緊迫，且操作者不需花費(fèi)太多的勞力，為本法的優(yōu)點(diǎn)。本法的缺點(diǎn)是防御效果較差，需要多量的抗原，并且不易控制投與

17、抗原量。用 V. anguillarum 抗原經(jīng)口投與歐洲產(chǎn)的 Plaice 魚(yú)時(shí)，腸管粘液中的抗體價(jià)比血清中的要高。但用腹腔內(nèi)接種或皮下接種時(shí)，腸管或皮膚粘液中的抗體價(jià)比血中抗體價(jià)要低，明顯地可以看出不同的投與法影響抗體產(chǎn)生。因此，就腸管感染癥而言，可以檢討經(jīng)口法來(lái)免疫。5.抗原的種類(lèi)抗原的理化學(xué)性狀影響抗原進(jìn)入魚(yú)體及免疫抗體的產(chǎn)生。目前實(shí)用的疫苗幾乎都是福馬林不活化菌苗。用浸漬法或噴霧法投與時(shí)，抗原進(jìn)入魚(yú)體內(nèi)經(jīng)路主要有：鰓或頭部、側(cè)線 ( lateral line )。但不論何種經(jīng)路，菌苗直接進(jìn)入魚(yú)體內(nèi)是很難理解的。用 V. anguillarum 菌苗投與虹鱒的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表示，使用全菌體不

18、如使用可溶性有效抗原更容易進(jìn)入魚(yú)體。因此，今後有必要多考慮利用可溶性有效抗原或菌體成分來(lái)進(jìn)行免疫魚(yú)類(lèi)。實(shí)驗(yàn)證明，像 V. anguillarum、Y. ruckeri 及 E. tarda 的脂多糖類(lèi) ( L P S ) 是優(yōu)良的感染防御抗原對(duì)魚(yú)也沒(méi)有毒性，因此，由其引起的細(xì)菌性疾病可以考慮使用 L P S 作為免疫抗原。6.活疫苗對(duì)哺乳類(lèi)及鳥(niǎo)類(lèi)，弱毒性或無(wú)毒性的活菌或病毒常做為疫苗來(lái)使用。被接種的動(dòng)物不僅不發(fā)病，且保持感染性及免疫性。因抗原在體內(nèi)可以增殖，所以用較少的投與量就可以獲得較好的效果。關(guān)於魚(yú)類(lèi)的 V H S 病毒及 I P N 病毒的弱毒化及無(wú)毒化，以及免疫效果的研究早有報(bào)告。但是

19、，有無(wú)毒力的突然回復(fù)變異以及對(duì)宿主以外的魚(yú)種有無(wú)病原性都是應(yīng)該檢討的問(wèn)題。因?yàn)樵日J(rèn)為 I P N 僅是鮭魚(yú)科學(xué)的疾病，但後來(lái)從鰻魚(yú)、他種淡水魚(yú)、海水魚(yú)及貝等軟體動(dòng)物也分離出 I P N 病毒或類(lèi)似病毒。因此，目前使用活疫苗尚不安全。1984 年 O I E 會(huì)議上得出同樣的結(jié)論。7. Adjuvant使用 Adjuvant 將提高魚(yú)的免疫效果，在虹鱒體內(nèi)的抗原隨 Adjuvant 的添加而大大地增加了免疫效果。Adjuvant 還具有非特異性的免疫活性化能力，乃為免疫效果的一部份。將 A. salmonicida 的菌苗加在已做成的 Mycobacterium butyricum 的 Adjuvant 一起免疫魚(yú)時(shí)，不僅對(duì) A. salmonicida，而且對(duì) A. hydrophila 及 V. ordalii 也都有防御效果。僅用 Adjuvant 接種後的銀鮭，對(duì)以上的細(xì)菌攻擊也產(chǎn)生了部分的防御效果。免疫活性化因子被認(rèn)為在 M. butyricum 內(nèi)存在，能非特異地