香花枇杷與普通枇杷葉片提取物抑菌效果和抗氧化活性的比較研究

1、香花枇杷與普通枇杷葉片提取物抑菌效果和抗氧化活性的比擬研究論文摘要：采用牛津杯抑菌實(shí)驗(yàn)、最小抑菌濃度MIC的測(cè)定、DPPH自由基去除率的測(cè)定對(duì)香花枇杷和普通枇杷的不同萃取局部進(jìn)行了抑菌效果和抗氧化活性的研究，結(jié)果說(shuō)明：總體上，香花枇杷和普通枇杷相比，活性成分有較大的相似性，但具有更好的抑菌效果與抗氧化活性，可能存在潛在藥用價(jià)值，有著較為廣闊的開(kāi)展前景。論文關(guān)鍵詞：香花枇杷,普通枇杷,葉片提取物,抑菌,抗氧化我國(guó)是世界上最主要的枇杷生產(chǎn)國(guó)，且有豐富的枇杷屬野生種質(zhì)資源。批把葉為薔薇科植物枇杷EriobotryaJaponca(Thunb.)Lindl.的葉，性平，味苦，入肺，胃經(jīng)，是傳統(tǒng)的止咳平

2、喘常用中藥，有化痰止咳、和胃降逆的成效。現(xiàn)代藥學(xué)測(cè)驗(yàn)，批把葉的化學(xué)成分結(jié)構(gòu)多樣，含有皂苷、苦杏仁苷、烏蘇酸、齊墩果酸、蹂質(zhì)、維生素B、維生素C等，這些成份具有抗炎、止咳、降血糖、抗病毒和抗腫瘤等藥理活性。近年來(lái)，由于天然提取物的平安優(yōu)勢(shì)，從植物中提取活性物質(zhì)是天然物質(zhì)研究的熱門(mén)課題。而自然界的天然植物中存在許多生理活性物質(zhì)，如具有抗菌作用、抗氧化作用等，這可為植物源天然食品防腐劑、抑菌劑和抗氧化劑的研究和開(kāi)發(fā)提供了珍貴資源。但目前對(duì)枇杷葉的抑菌作用存在著很多爭(zhēng)議，需要做進(jìn)一步的研究。我國(guó)原產(chǎn)的枇杷屬植物有16個(gè)種(21個(gè)種類(lèi))，其中人工栽培的只有普通枇杷1種，其余的均零星分布在大山上，多處于野

3、生狀態(tài)，香花枇杷即為一種分布較廣的野生枇杷。目前，對(duì)普通枇杷葉片的活性及成分的研究較多，而對(duì)野生的枇杷屬植物其它種類(lèi)的相關(guān)研究卻近乎空白。本論文通過(guò)野生香花枇杷和人工栽培普通枇杷葉片提取物的不同溶劑萃取局部的抗菌和DPPH自由基去除率實(shí)驗(yàn)，以期比擬這兩個(gè)種類(lèi)的抑菌和抗氧化活性，探討香花枇杷潛在的藥用價(jià)值。1材料與方法1材料與方法1.1材料香花枇杷EriobotryafragransChampexBenth葉片采自廣州三角山，普通枇杷EriobotryajaponicaLindl.葉片取自華南農(nóng)大園藝學(xué)院果園。收集清理后室溫晾干，粉碎得葉片干粉。金黃色葡萄球菌G；大腸桿菌G、沙門(mén)氏菌G、綠膿桿菌

4、G、變形桿菌G；白色念珠菌酵母菌；木霉。以上菌株由龍巖學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室別離、保存。細(xì)菌：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；酵母：酵母培養(yǎng)基YPD；霉菌：馬鈴薯培養(yǎng)基PDA。儀器：DHP-9272型電熱恒溫培養(yǎng)箱，RE52-9型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，SHZ-3型循環(huán)水多用真空泵，96孔板，牛津杯藥品和試劑：DPPH1,1-二苯-2-苦肼基，批號(hào)085K1471購(gòu)置于Sigma公司；刃天青批號(hào)RR7017購(gòu)置于合肥博美生物科技有限責(zé)任公司，其他試劑均為分析純。1.2方法取香花枇杷、普通枇杷葉片干粉各4.5kg，分別用95%乙醇浸提，提取液減壓濃縮至無(wú)醇味剩下水為溶劑，通過(guò)過(guò)濾將沉淀脂溶性局部與上清液水溶性局部分開(kāi)，分別以

5、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓濃縮去除溶劑，得沉淀各萃取部及剩余局部，以及上清液各萃取部及剩余水相局部。采用牛津杯抑菌實(shí)驗(yàn)法。對(duì)香花枇杷和普通枇杷各萃取樣品材料用二甲基亞砜DMSO配制成濃度為20mg/mL。各菌株活化后配置成菌懸液，終濃度為1010個(gè)/mL，各取0.1mL涂布于適合各菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基平板上。然后在各平板上放置2個(gè)牛津杯，一個(gè)供樣品參加，一個(gè)供對(duì)照液DMSO參加。用微量移液器在各牛津杯上參加配置好的樣品液和對(duì)照液各100uL，加好藥液后，將平板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，細(xì)菌37，酵母、霉菌30培養(yǎng)24h。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，測(cè)定各樣品所形成的抑菌圈大小，取平均值。對(duì)香花枇杷和普通枇杷各

6、萃取樣品材料用二甲基亞砜DMSO配制成濃度40mg/mL，采用試管二倍稀釋法進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)魈荻葷舛确謩e為40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156mg/mL。以刃天青為指示劑，研究各樣品的最小抑菌濃度MIC，具體方法如下。準(zhǔn)備無(wú)菌96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔依次加50uL適合各菌株生長(zhǎng)液體培養(yǎng)基、培養(yǎng)24h活化后菌液5uL菌濃：1010個(gè)/mL、不同梯度的各提取樣品溶液55uL、0.25g/L刃天青指示劑5uL。將96孔板放置在厭氧條件下培養(yǎng)，細(xì)菌37，酵母、霉菌30培養(yǎng)24h。以刃天青為指示劑，通過(guò)觀察孔中的顏色變化判斷不同提取樣品溶液是否有抗菌活性，濃度最低的一

7、孔樣品溶液劑量即為該樣品的最低抑菌濃度MIC。同時(shí)，配置80mg/mL的山梨酸鉀作為陽(yáng)性對(duì)照，測(cè)定山梨酸鉀的最低抑菌濃度MIC。采用DPPH自由基去除率研究萃取樣品的抗氧化活性。1,1-二苯基-2-苦肼基自由基DPPH分析法是用分光法進(jìn)行定量分析篩選自由基去除劑的簡(jiǎn)便方法。萃取物對(duì)DPPH自由基的去除率ThepercentageofscavengingradicalcapacitySR%的計(jì)算方法參考許申鴻等的方法，由于在測(cè)定體系中樣品本身的OD值很低，因此忽略不計(jì)，計(jì)算公式簡(jiǎn)化為：SR%=(A-A)/Ax100%。式中：ADPPH乙醇溶液的吸光值；A參加提取物溶液后的DPPH乙醇溶液的最終吸

8、光值。取各萃取樣品配制成20mg-mL母液，吸取母液2L，參加2mL濃度為0.025mg-mL的DPPH乙醇液中，即待測(cè)樣品終濃度為19.98g-mL，計(jì)算去除率。2結(jié)果與分析2.1香花枇杷和普通枇杷不同萃取樣品的抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果香花枇杷和普通枇杷不同萃取樣品編為1-7#，按極性大小排列，分別代表沉淀石油醚部、沉淀氯仿部、沉淀乙酸乙酯部、沉淀正丁醇部、沉淀萃取剩余部、上清液乙酸乙酯部、上清液正丁醇部，各樣品的抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明：不同溶劑的萃取樣品對(duì)各菌株的抑菌效果存在著較大的差異，7個(gè)樣品中抑菌效果最好的溶劑萃取局部是7#Table1Theantibacterialcircled

9、iameterofdifferentfractionalextractoffragrantloquatandcommonloquat 菌株 Strain 1# 2# 3# 4# 5# 6# 7# A B A B A B A B A B A B A B 葡萄球菌 Staphylococcus aureus - - 9 11 9 10 10 11 9 15 10 11 10 12 大腸桿菌 E.coli - - - - - - - - - - - - 11 11 沙門(mén)氏菌 Salmonella - - - - - - - - - - - - 10 11 綠膿桿菌 P. aeruginosa - -

10、 - - - - - - - - - - 11 10 變形球菌 Proteus vulgaris - - - - - - - - - - - - 9 11 白色念珠菌 Canidia Albicans 10 11 - - - - 10 10 10 11 10 11 - - 木霉 Trichoderma spp. 15 9 20 11 - - - - - - - - 9 9 注：表中字母A、B分別代表普通枇杷和香花枇杷，下同Note:A、Bstandforcommonloquatandfragrantloquatrespectivelyinthistable,thesameasbelow2.2香

11、花枇杷和普通枇杷不同萃取樣品最小抑菌濃度Table2TheMICofdifferentfractionalextractoffragrantloquatandcommonloquat 菌株 Strain 1# 2# 3# 4# 5# 6# 7# 山梨酸鉀 Potassium sorbate A B A B A B A B A B A B A B 葡萄球菌 Staphylococcus aureus - - 20 5 20 10 10 5 20 0.625 10 5 10 2.5 40 大腸桿菌 E.coli - - - - - - - - - - - - 5 5 40 沙門(mén)氏菌 Salmone

12、lla - - - - - - - - - - - - 10 5 40 綠膿桿菌 P. aeruginosa - - - - - - - - - - - - 5 10 50 變形球菌 Proteus vulgaris - - - - - - - - - - - - 20 5 50 白色念珠菌 Canidia Albicans 10 10 - - - - 20 20 10 5 10 10 - - 80 木霉 Trichoderma spp. 0.313 20 0.156 5 - - - - - - - - 20 20 30 表3香花枇杷和普通枇杷不同萃取局部的DPPH自由基去除率Table3Th

13、eDPPHSRofdifferentfractionalextractoffragrantloquatandcommonloquat 萃取樣品 Samples of fractional extract 普通枇杷 common loquat 香花枇杷 fragrant loquat OD值 O.D value 去除率/% Percentage of scavenging radical capacity OD值 O.D value 去除率/% Percentage of scavenging radical capacity 空白 Blank 0.456 0.456 1# 沉淀石油醚部 1#

14、Petroleum ether extract of deposi 0.415 8.851 0.430 5.706 2# 沉淀氯仿部 2# Chloroform extract of deposit 0.321 29.627 0.379 16.825 3# 沉淀乙酸乙酯部 3# EtOAc extract of deposit 0.364 20.117 0.272 40.380 4# 沉淀正丁醇部 4# n-BuOH extract of deposit 0.368 19.293 0.250 45.026 5# 沉淀萃取剩余部 5# Residue of deposit extraction

15、0.054 88.149 0.047 89.685 6# 上清液乙酸乙酯部 6# EtOAc extract of supernatant 0.126 72.275 0.049 89.247 7# 上清液正丁醇部 7# n-BuOH extract of supernatant 0.284 37.747 0.047 89.685 3討論本文對(duì)香花枇杷和普通枇杷的不同萃取局部進(jìn)行了抑菌效果和抗氧化活性的研究，結(jié)果說(shuō)明：1與陽(yáng)性對(duì)照山梨酸鉀的抑菌效果相比，香花枇杷與普通枇杷均有較好的抑菌效果，抑菌的作用部位也是一致的，說(shuō)明枇杷屬野生植物資源與普通枇杷相比擬，活性成分有較大的相似性，這與作者之前的三

16、萜酸指紋圖譜的分析結(jié)果有一致性。但總體上香花枇杷的抑菌效果要優(yōu)于普通枇杷。2香花枇杷與普通枇杷葉片提取物中極性較大的萃取局部5#、6#和7#比極性較小的萃取局部抑制細(xì)菌的能力較強(qiáng)，推測(cè)抑菌成分以極性相對(duì)較大的成分為主，根據(jù)洪燕萍等報(bào)道，在這3個(gè)萃取局部中黃酮多酚含量較高，可能是抑菌的有效成分；而對(duì)木霉的抑制效果那么是極性較低的萃取局部1#和2#效果較好，推測(cè)對(duì)霉菌的抑制可能以低級(jí)性成分如揮發(fā)油為主。3香花枇杷與普通枇杷相比具較強(qiáng)的抗氧化活性，同時(shí)這兩種枇杷葉片提取物的5#、6#和7#萃取部的抗氧化能力強(qiáng)。說(shuō)明極性較大的5#、6#和7#萃取部的抑制細(xì)菌的能力及抗氧化的能力均較強(qiáng)?？傮w上，香花枇杷

17、與普通枇杷相比，具有更好的抑菌效果與抗氧化活性，說(shuō)明香花枇杷可能存在潛在藥用價(jià)值，同樣也從一個(gè)側(cè)面說(shuō)明野生枇杷屬植物具有進(jìn)一步研究和利用的價(jià)值，如在食品防腐、化裝品消毒、醫(yī)藥領(lǐng)域可有著較為廣闊的開(kāi)展前景。參考文獻(xiàn)1 呂寒,習(xí)超鵬,陳劍,等. 不同枇杷葉藥材中三萜和黃酮類(lèi)成分含量的比擬.中成藥,2021,31(1):89-92.2 Hong Y P,Qiao Y C,Lin S Q,et al. Characterization of antioxidant compounds in Eriobotrya fragrans Champ leaf. Scientia Horticulturae,2

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