花粉試驗(yàn)論文

1、超聲提取蜂花粉中黃酮的工藝研究饒金輝 付志玲 袁巖巖 陳素娥 朱小梅 李源（西南大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院）摘要：為了確定提取蜂花粉中黃酮的最佳提取條件，我們對(duì)兩種不同的蜂花粉進(jìn)行了提取 工藝研究。方法：采用超聲技術(shù)提取總黃酮，用比色法測(cè)定總黃酮含量.以產(chǎn)丁為考察黃酮 含量的指標(biāo)，以提取溫度和提取時(shí)間為考察因素，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定蜂花粉中黃酮的 含量并最終確定了最佳的提取條件。結(jié)果表明：超聲提取的時(shí)間和溫度對(duì)提取率有一定影 響且溫度對(duì)提取的影響較大；最佳工藝條件為：以油菜花粉為原料，提取溫度為40 C,提取時(shí)間為20 min。關(guān)鍵詞：蜂花粉；黃酮；超聲提?。缓繙y(cè)定花粉是植物的雄性生殖細(xì)胞，它存在于

2、雄蕊的花藥之中。蜂花粉是蜜蜂采集花粉后用 自己的唾液和花蜜粘合形成的顆粒，比單一花粉更有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值1 o現(xiàn)代科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，花粉中除含有蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、維生素和礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)元素 外，還含有磷脂、黃酮類化合物、乙酰膽堿、番醇類化合物等生物活性成分，被人們譽(yù)為“微型營(yíng)養(yǎng)庫(kù)?！彼幚韺?shí)驗(yàn)研究表明，花粉具有降血脂、抗輻射、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、保 護(hù)肝臟、治療前列腺增生及抗衰老等作用2,因此，在國(guó)內(nèi)外引起了研究和開(kāi)發(fā)利用蜂花 粉的熱潮。我國(guó)有極其豐富的蜂花粉資源，由于蜂花粉含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)其應(yīng)用已有很悠久的歷史。其提取成分廣泛用于保健品及化妝品的生產(chǎn)。為了合理地開(kāi)發(fā)、利用這一營(yíng) 養(yǎng)寶庫(kù)，確定蜂花粉營(yíng)養(yǎng)

3、成分的最佳提取條件具有重要意義。因?yàn)辄S酮類化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化、降糖等多種生理活性。因此利用超聲技術(shù)提取蜂花粉中黃酮網(wǎng)可大大地加快反應(yīng)速度，有效地提高回收率和藥材的利用率。本試驗(yàn)旨在確定蜂花粉的最佳提取工 藝。1材料與方法1.1材料樣品與試劑 油菜花粉、養(yǎng)麥花粉由唐氏蜂業(yè)有限公司提供； 產(chǎn)丁純品由天津市海光 化工有限公司提供；乙醇由西南大學(xué)制藥工程實(shí)驗(yàn)室提供；亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉 由西南大學(xué)制藥工程實(shí)驗(yàn)室提供主要儀器 超聲提取儀KQ5200型，昆山市超聲儀器有限公司；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 752S,上海棱光技術(shù)有BM公司；電子天平 JT210N,上海精天電子儀器有限公司。2方法產(chǎn)

4、丁標(biāo)準(zhǔn)液及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 將98%勺產(chǎn)丁溶液（第1組0. 5ml,第2組為1.0 ml, 第3組為2.0ml ,第4組為3.0 ml,第5組為4.0 ml）放入試管中；再加入5%勺亞硝酸鈉0.3 ml;振蕩6 min后加入10%的硝酸鋁溶液；搖勻再放置 6 min ,最后加入1%的氫氧化鈉 溶液4.0 ml ,力口水稀釋到10 ml,在510nnft測(cè)得的吸收度 A寸濃度C回歸。超聲提取工藝流程 取2 g蜂花粉溶入20 ml的乙醇溶液中，超聲提取、過(guò)濾、 分離取上精液，取2 ml樣品（蜂花粉的提取物）測(cè)定吸光度，最后計(jì)算總黃酮類物質(zhì)的 提出率.黃酮含量的測(cè)定準(zhǔn)確量取2 ml樣品加入試管中，再加

5、入5%勺亞硝酸鈉0.3 ml;振蕩6 min后加入10%的硝酸鋁溶液；搖勻再放置 6 min ,最后加入1%的氫氧化鈉溶液 4.0 ml ,加水稀釋到10 ml ,在510nm處測(cè)樣品的吸光度。正交試驗(yàn)試驗(yàn)因素水平主要考察提取時(shí)間、溫度和不同藥材對(duì)吸光度的影響。從而 確定提取黃酮的最佳工藝條件。2結(jié)果與分析2.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果花粉吸光度因素5 (min)10 (min)15 (min)20 (C)40 (C)20 (C)40 (C)20 (C)40 (C)10.2011.6450.3752.0780.5012.23720.2851.2030.4011.6540.5202.124油菜花粉30.245

6、1.3050.3641.7650.5112.21410.2151.2440.1961.1880.1791.16320.2011.0320.1860.9860.1620.869養(yǎng)菜花粉30.2101.1320.1991.0210.1790.8672.2 實(shí)驗(yàn)分析從表中可以看出當(dāng)都是油菜花粉時(shí)，提取時(shí)間越長(zhǎng)吸光度就越大但是當(dāng)都是養(yǎng)菜花粉 時(shí)，提取時(shí)間越長(zhǎng)吸光度反而越?。粶囟却蟮奈舛纫葴囟刃〉奈舛却笮?。由此可見(jiàn)， 花粉含量的不同、溫度的不同、時(shí)間的長(zhǎng)短會(huì)影響吸光度進(jìn)而影響黃酮的提取率。3討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果的直觀分析和方差分析表明，蜂花粉黃酮提取的最佳超聲工藝為：時(shí)間15min 溫度40 C。超聲提取

7、與傳統(tǒng)水煎法、乙醇回流法等相比，具有節(jié)約、簡(jiǎn)單，省時(shí)幾個(gè)特點(diǎn)，最重 要的是提取收率高。此方法是中藥提取的一個(gè)發(fā)展趨勢(shì)。超聲提取的影響因素很多，也十分復(fù)雜，限于時(shí)間和實(shí)驗(yàn)條件，對(duì)超聲波功率、頻率、 提取次數(shù)和溶劑等因素未作考察，尚待進(jìn)一步研究。本研究的實(shí)驗(yàn)條件主要適用于實(shí)驗(yàn)室。大生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)條件和儀器等有待于進(jìn)一步研究， 以便用于保健品及化妝品的大規(guī)模生產(chǎn)。4結(jié)論1）本文僅對(duì)2種蜂花粉進(jìn)行超聲波提取黃酮的方案研究，我們可以初步的得出影響其提取 率的因素。2）超聲提取的時(shí)間和溫度對(duì)提取率有一定影響切提取溫度的影響要大于提取時(shí)間的影響； 最佳工藝條件為：以油菜花粉為原料，提取溫度為 40 C,提取時(shí)間為20 min。附：標(biāo)準(zhǔn)曲線表濃度(ug/ml)用量（ml）吸光度1500.50.0962501.00.1363501.50.17945020.237標(biāo)準(zhǔn)曲線圖標(biāo)準(zhǔn)曲