血清二氧化碳酶反應(yīng)終點(diǎn)法測定

1、血清二氧化碳酶反應(yīng)終點(diǎn)法測定.實(shí)驗(yàn)原理Vitros CO 2試劑是一種干燥，多涂層的，在透明的聚合物支撐基片上涂有分析成份的 化學(xué)干片。將一滴患者樣品滴于干片上，分布層會使之均勻地分布。分布層中的高PH值能確保 樣品中所有的CO2以碳酸氫鹽的形式存在。碳酸氫鹽分布到凝膠層中，在磷酸烯醇式丙酮 酸羥化酶的作用下被用來羥化磷酸烯醇式丙酮酸，生成草酰乙酸和無機(jī)磷。反應(yīng)最后是蘋 果酸脫氫酶氧化NADH及還原草酰乙酸，生成NAD+和蘋果酸。本干片要在37 c下孵育。樣 品中的CO2濃度是通過用反射光譜法測定未反應(yīng)的NADH的吸光度來確定的。測定方式：酶反應(yīng)終點(diǎn)法波長：340nm測試時間和溫度：37 c約

2、5分鐘反應(yīng)過程：磷酸烯醇式丙酮酸羥化酶碳酸氫根+磷酸烯醇式丙酮酸-草酰乙酸 +磷酸根蘋果酸脫氫酶草酰乙酸+ NADH + H +蘋果酸+ NAD.標(biāo)本：2.1 病人準(zhǔn)備：無特殊。樣品類型：血清；肝素鋰/鈉抗凝血漿。標(biāo)本采集與處理：血清和血漿樣品：特別要注意的是：不要用枸檬酸鹽作抗凝劑。不要從正在靜脈注射 的手臂上采血。采血時盡量將真空管裝滿，否則測試結(jié)果最多會偏低3mmol/L。樣品采集 后4小時內(nèi)要離心標(biāo)本，吸出血清。處理樣品時要將其當(dāng)成生物污染品。.標(biāo)本的存放：血清、血漿室溫下密封保存最多24小時；48 c冷藏最多3天；-18 C 冷凍保存可長達(dá)1個月。.標(biāo)本的運(yùn)輸：樣品要放在帶蓋的容器內(nèi)

3、以防污染和蒸發(fā)，不加蓋的樣品杯在空氣中放 置1小時，CQ濃 度最多 要偏低6mmol/L 。.標(biāo)本拒收的標(biāo)準(zhǔn)：污染、抗凝劑不符合要求，標(biāo)本放置時間過長。. 試驗(yàn)材料：測試CO2所需的物品包括：Vitros 化學(xué)定標(biāo)物Kit2 ; Vitros 特制質(zhì)控液；生理鹽水 稀釋液。強(qiáng)生廠家提供原裝進(jìn)口，試劑盒外包裝上標(biāo)明了測試項(xiàng)目名稱，試劑標(biāo)簽代碼，有效期限和儲藏溫度。試劑組成：干片成分：反應(yīng)成份有磷酸烯醇式丙酮酸羥化酶，蘋果酸脫氫酶，磷酸 烯醇式丙酮酸和NADHo其它成份有粘合劑，緩沖齊I，抑制劑，染色劑，穩(wěn)定劑，表面活性 劑和聚合物交叉連接劑。干片標(biāo)記：試劑盒外包裝上標(biāo)明了測試項(xiàng)目名稱，試劑標(biāo)簽代

4、碼， 有效期限和儲藏溫度。試劑準(zhǔn)備 從冰箱中取出干片盒，在將干片盒打開封裝并裝入儀器內(nèi)的干片儲藏 器之前必須使其達(dá)到室溫狀態(tài)1828 C。因此從冰箱中取出的試劑盒至少要在室溫下要放 置60分鐘，而冷藏的試劑盒至少要在室溫下放置30分鐘。去 除內(nèi)包裝后立即將干片盒放 入儀器的儲藏器中。說明：在試劑盒達(dá)到室溫后的24小時之內(nèi)必須將其裝入儀器中。試劑穩(wěn)定性與貯存未開封的干片盒：存儲在28c或低于該范圍。在機(jī)內(nèi)干片儲藏器中的干片盒：在儀器上放置時間不能超過4周，否則要更換新試劑。 當(dāng)儀器關(guān)閉時間不超過2個小時時，可將干片盒留在儲藏器中。出 現(xiàn)以下情形要做質(zhì)控檢 測：儀器關(guān)閉時間超過2小時；再次裝載從儀

5、器儲藏器中取出的干片盒。如果儲藏正確， Vitros CO 2干片可保質(zhì)到包裝盒上標(biāo)明的有效期限。參見VITROS 250 干化學(xué)分析儀試劑 穩(wěn)定性及貯存.SOP文件。變質(zhì)指示：超過有效期的試劑干片不能使用。注意事項(xiàng)：為避免干片盒打開以前其內(nèi)包裝受損，不能摔打干片盒；不要讓尖利物 刺入內(nèi)包裝。校準(zhǔn)品：用Vitros 化學(xué)定標(biāo)物Kit2 。血清，尿液和腦脊液都用相同的定標(biāo)液，不過 各自的SAVs值不同。有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)液的配制，使用及保存的配制，保存和穩(wěn)定的詳情，可參 閱VITROS250干化學(xué)分析儀校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。質(zhì)控品：使用 Vitros 特制的質(zhì)控物品；若使用其它的一些質(zhì)控物品，當(dāng)與別

6、的CO2 測試方法比較時就會出現(xiàn)差異，如：用人血清/血漿混合物分離制成的質(zhì)控物品；含有高 濃度防腐劑，穩(wěn)定劑和其它化學(xué)添加劑的質(zhì)控物品；乙 烯乙二醇作穩(wěn)定劑的質(zhì)控物品不能 使用。有關(guān)質(zhì)控液的配制，保存和穩(wěn)定的詳情，可參閱VITROS250干化學(xué)分析儀校準(zhǔn)品和質(zhì) 控品.SOP文件。.儀器美國強(qiáng)生廠家VITROS250全自動干式生化分析儀。具體測試程序請參閱操作手冊的介 紹。.操作步驟：將試劑復(fù)溫后直接放入儀器，樣品編程，儀器5分后自動打印結(jié)果。具體 測試程序請參閱VITROS250操作手冊.SOP。具體定標(biāo)程序：參閱操作手冊的相關(guān)章節(jié)內(nèi)容。 何時進(jìn)行定標(biāo)：在維護(hù)和保養(yǎng)時更換了儀器的重要部件。質(zhì)控

7、結(jié)果持續(xù)超出線性范圍內(nèi)時，詳情參閱操作手冊。管理?xiàng)l例上指定的時間，在美國，CLIA要求至少每6 個月定標(biāo)一次。.檢驗(yàn)結(jié)果的判斷與分析.質(zhì)量控制：操作建議：將質(zhì)控物質(zhì)當(dāng)成生物污染品來處理；將質(zhì)控液與患者樣品同時 進(jìn)行測試；每天至少做一次質(zhì)控以檢測儀器運(yùn)行狀況；選擇質(zhì)控濃度來檢查與臨床的相關(guān) 性；其它詳情參閱操作手冊質(zhì)控章節(jié)的有關(guān)內(nèi)容。有關(guān)質(zhì)控操作的常規(guī)性條例可參照國際 質(zhì)控檢測（IQCT ）的內(nèi)容。在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把質(zhì)控血清作為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2S 為質(zhì)控警告限，3s為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見生化室室內(nèi)質(zhì)控 操作規(guī)程.SOP文件。.計算方法：以用Vitros 化學(xué)定標(biāo)

8、物校準(zhǔn)儀器后，在病人結(jié)果可報告范圍內(nèi)，儀器直 接報告可靠的檢測結(jié)果，以mmol/L報告。. 參考值范圍國際單位（mmol/L）血清/血漿22-30mmol/L此參考范圍是測試60位健康成人，然后取靶值附近95%的結(jié)果計算所得。參考值因性 別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)，每個實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己 的參考值。.臨床意義：碳酸一碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)是人體中維持血液PH平衡的重要緩沖系統(tǒng)。進(jìn) 行總二氧化碳（即碳酸氫鹽加上溶解的二氧化碳）測定，再結(jié)合臨床及實(shí)驗(yàn)室的其它測試 值，可用于確定人體酸堿平衡的失調(diào)?；己粑运嶂卸荆x性堿中毒和堿攝入過量都會 造成總CQ升高。CQ濃度下降見于代

9、償性呼吸性堿中毒，代謝性酸中毒和腎功能失調(diào)使氫 離子排泄不掉而導(dǎo)致的CO2降低。.操作性能線性范圍：血清5.0-40mmol/L。精密度：在Vitros 250生化儀上用質(zhì)控液來測精密度。結(jié)果反映了該方法的精密度。 當(dāng)儀器維護(hù)，周圍環(huán)境，干片處理和保存，質(zhì)控液的復(fù)溶以及樣品處理等方面發(fā)生變化都 會影響結(jié)果的重復(fù)性。日間精密度血清x(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)室間精密度n=20 天X(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)樣品1 n=78270.5樣品1270.72.5樣品2 n=78130.4樣品2130.53.9*日間精密度是將2至3份相同的樣品在一天中運(yùn)行兩次，然后對測

10、試結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計計算。*室間精密度是用同一個批號的干片每周定標(biāo)一次，然后對測試結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計計算。方法學(xué)比較：用Vitros700 儀器和康寧965型分析儀測總二氧化碳的方法分別測試相同血清樣品， 對比結(jié)果顯示Vitros 方法的準(zhǔn)確度 良好。用Vitros250 儀器與Vitros700 儀器測試相同 的血清樣品，對比結(jié)果顯示Vitros250 方法的準(zhǔn)確度良好，血清：Y=0.97X+0.23（ r=0.993,N=90 ,檢測范圍 6.8-28.4mmol/L）。靈敏度：本試劑的檢測下限為血清5.0mmol/L 。特異性：經(jīng)測試，以下物質(zhì)對 VitrosCO 2干片法均無干擾（偏差1.9mmo

11、l/L ）。撲熱 息痛20mg/dL、乙酰乙酸20mg/dL、乙酰水楊酸50mg/dL、a -酮已酸20mmol/L、氨基水楊 酸60mg/dL、氨0.5mmol/L 、精氨基琥珀酸20mmol/L L、維生素 C 3mg/dL、苯甲酰胺20mmol/L、 苯 磺酸鹽 20mmol/L、苯甲酸 20mmol/L、苯甲醇 20mmol/L、膽紅素（未 結(jié)合）20mg/dL 等 等。病人結(jié)果可報告范圍：血清5.0-40mmol/L。.超出范圍結(jié)果處理：本法線性上限為血清40mmol/L。如果樣品中CQ濃度超出系統(tǒng)的 測試線性范圍，請按下列步驟進(jìn)行稀釋：血清或血漿用生理鹽水稀釋，重新測試，將測試 結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)，就得到原始樣品中CQ的濃度。.病危報警值的處理.方法局限性本法線性上限為血清40mmol/L 。如果樣品中CO2CP濃度超出系統(tǒng)的測試線性范圍， 請按下列步驟進(jìn)行稀釋：血清或血漿用生理鹽水稀釋，重新測試，將測試結(jié)果乘以稀釋倍 數(shù)，就得到原始樣品中CO2CP的濃度。干擾物質(zhì)：乳酸脫氫