同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科ISO15189體系文件07幽門(mén)螺旋桿菌IgA（ＨＰ－IgA）抗體測(cè)定

1、同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫組項(xiàng)目操作指導(dǎo)書(shū)TJYYJYKMY/XMZ707第2版標(biāo)題：幽門(mén)螺旋桿菌IgA（IgA）抗體測(cè)定第7章 第07號(hào)第 PAGE 4 頁(yè) 共 NUMPAGES 4 頁(yè) 目的：檢測(cè)血清標(biāo)本中的幽門(mén)螺旋桿菌IgA抗體。 適用范圍：同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室。 項(xiàng)目名稱(chēng)：幽門(mén)螺旋桿菌IgA（IgA ）抗體測(cè)定。 檢測(cè)方法：酶免疫分析法。 檢測(cè)原理：待測(cè)樣本加入已包被抗原的反應(yīng)空內(nèi)孵育，若標(biāo)本中含有抗抗體，側(cè)該抗體與微孔內(nèi)抗原形成抗原抗體復(fù)和物，加入酶標(biāo)抗抗體，經(jīng)孵育后，酶標(biāo)抗抗體連接至抗原抗體復(fù)合物上，在TMB底物參與反應(yīng)的情況下，產(chǎn)生顯色反應(yīng)。 試劑：6.1 品牌：美國(guó)Life

2、Key公司。6.2 包裝規(guī)格：96人份。6.3 內(nèi)含物:6.3.1 酶標(biāo)板：1塊，96人份；6.3.2 標(biāo)本稀釋液：1瓶，12ml；6.3.3 質(zhì)控（低）：1 vial；質(zhì)控（高）：1 vial；6.3.4 底物A：1瓶，6ml；底物B：1瓶，6ml；6.3.5 濃縮洗滌液（20*）：1瓶，25ml；6.3.5 酶聯(lián)物；1瓶，12ml； 6.3.6 終止液：1瓶，6ml；6.3.7 說(shuō)明書(shū): 1份。7. 儀器品牌、型號(hào)：BIO RAD UV-3550酶標(biāo)儀，測(cè)定波長(zhǎng)為450nm；參考波長(zhǎng)為965nm；8. 操作步驟：8.1 打印工作單:8.1.1 打開(kāi)電腦及打印機(jī)電源，8.1.2 雙擊齊效檢驗(yàn)

3、系統(tǒng)，登陸工號(hào)與密碼；8.1.3 雙擊報(bào)告處理，單擊標(biāo)本申請(qǐng)信息打開(kāi)標(biāo)本申請(qǐng)明細(xì)信息查詢(xún)，打開(kāi)左上角的所有信息，選擇未生成報(bào)告信息。8.1.4 在檢驗(yàn)項(xiàng)目處選擇IgA執(zhí)行查詢(xún)，點(diǎn)擊打印申請(qǐng)單，打印出工作單。8.2 排列被檢測(cè)標(biāo)本:根據(jù)工作單上的庫(kù)位號(hào)找出相應(yīng)標(biāo)本，并按工作單上的順序排列。8.3 按以下步驟開(kāi)始操作:8.3.1 濃縮洗滌液1瓶加入雙蒸水475ml稀釋?zhuān)从猛甑姆呕?-8。8.3.2 配置Calibrator：按需要量用樣品稀釋液1：4稀釋質(zhì)控（高），混勻。8.3.3 取出所需板條，其余仍密封放回2-8。8.3.4 每孔加入100ul標(biāo)本稀釋液，然后加入5ul已稀釋血清標(biāo)本。加入1

4、00ul質(zhì)控及Calibrator至各孔中，空白對(duì)照孔中加入標(biāo)本稀釋液100ul，用封板紙封 住反應(yīng)孔，在平板混合器上震蕩30秒鐘混合。3730分鐘。8.3.5 洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加入洗滌液350ul，靜置30秒后甩出液體，在后疊吸水紙上拍干，洗5次。8.3.6 每孔加入酶聯(lián)物100ul，3730分鐘。8.3.7 洗板同8.3.3。8.3.8 每孔加入底物A、B各50ul，混勻，37避光15分鐘。8.3.9 打開(kāi)平板混合器的電源，把平板放在平板混合器上震蕩，8.3.10 每孔加入終止液50ul，在450nm處讀數(shù)。8.4 結(jié)果：Cut-Off值為Calibrator的平均值。Index值

5、=樣品OD值/Cut-Off的OD值。Index1為陽(yáng)性；Index在0.91-0.99間為可疑；Index0.90為陰性。8.5 發(fā)送報(bào)告：詳見(jiàn)免疫報(bào)告發(fā)送程序。9. 參考范圍：正常人陰性。10. 臨床意義：幽門(mén)螺旋桿菌的存在與許多胃腸道疾病，非潰瘍性消化不良，胃腺癌和淋巴瘤有關(guān)，有95-98%的十二指腸潰瘍和60-90%的胃潰瘍病人存在此病原體試劑盒組成。研究也表明，微生物治療清除此病原體，與癥狀消退和疾病治愈相關(guān)。11. 病人準(zhǔn)備、標(biāo)本要求：標(biāo)本為血清時(shí)最好空腹采血，脂血、溶血不可使用。其它體液標(biāo)本時(shí)無(wú)特殊要求。標(biāo)本最好為新鮮采集，不可有溶血、脂血或渾濁。如需保存可于2-8冷藏不超過(guò)48

6、小時(shí)或冷凍長(zhǎng)期保存，要避免標(biāo)本反復(fù)凍融。12. 注意事項(xiàng)：12.1 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25，使用后立即冷藏保存試劑。12.2 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果，在加入酶聯(lián)物或底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。12.3 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。12.4 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。12.5 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。12.6 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。12.7 平衡至室溫后再打開(kāi)密封以防水滴凝聚在冷板條上。12.8 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。12.9 不