醫(yī)學羅氏電化學發(fā)光原理專題課件

1、羅氏電化學發(fā)光原理免疫檢測技術的發(fā)展電化學發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢免疫檢測技術的發(fā)展電化學發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢技術創(chuàng)新領先的免疫檢測新技術ECL放免酶免熒光免疫化學發(fā)光電化學發(fā)光1960S197080S2000S1，抗體技術的革命，從使用多克隆抗體向使用單克隆抗體轉(zhuǎn)變2，從手工操作向全自動分析儀的轉(zhuǎn)變3，從液相放射免疫技術向均相和固相免疫分析技術的轉(zhuǎn)變1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法（RIA），大大提高了免疫測定的敏感度，這種標記免疫測定開拓了醫(yī)學檢驗的新領域 。 缺點 半衰期短，試劑貨架期不長。標記物不斷變化，試劑批間、批內(nèi)變化大，標準曲線

2、不能保存。反應時間長，操作步驟很難自動化。使用放射性核素，對人體有一定的危害性。分析的限度為 10 mol/ml 或 10 g/ml。在一定時期內(nèi)曾被采用，正在被逐步取代。放射免疫測定法1971年Engvall和Perlman建立了固相酶免疫測定方法（ELISA），這種非放射標記免疫測定在臨床檢驗，特別是感染性疾病的診斷中取得了廣泛應用。酶免疫測定法缺點 試劑制備困難。操作步驟復雜，耗時長。影響因素多，質(zhì)量控制難以保證。最后測定的是顏色的光密度，其精密度和敏感性不如發(fā)光免疫技術。 各實驗室操作不規(guī)范，質(zhì)量難以保證。有學者認為ELISA技術已逐步走向退化，可能會逐步退出臨床實驗室?；瘜W發(fā)光免疫測

3、定法出現(xiàn)于20世紀90年代初。由于最后測定的是光子的量，不但對檢測者無害，其敏感度和精密度均優(yōu)于RIA，而且試劑較穩(wěn)定，并可進行全自動分析。 化學發(fā)光免疫測定法采用標記催化酶（如辣根過氧化物酶）或化學發(fā)光分子（如魯米諾）的方法，其化學反應一般不穩(wěn)定，為間斷的、閃爍性發(fā)光，而且在反應過程中易發(fā)生裂變，導致反應結(jié)果不穩(wěn)定。檢測時需對結(jié)合相與游離相進行分離，操作步驟多。反應原理相對落后。缺點電化學發(fā)光免疫技術電化學發(fā)光免疫測定法（ECLIA）發(fā)展于 1996年，它在發(fā)光反應中加入了電化學反應，是繼放射免疫、酶免疫、化學發(fā)光免疫測定之后的新一代標記免疫測定技術，是電化學和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物。世界公認

4、的 最先進 的臨床免疫檢測技術免疫檢測技術的發(fā)展電化學發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢Elecsys系列全自動免疫分析儀1996年德國寶靈曼公司推出Elecsys 2010系統(tǒng)世界上第一臺 應用電化學發(fā)光技術的全自動免疫分析儀1998年羅氏公司收購寶靈曼公司2001年羅氏推出電化學發(fā)光免疫模塊E 170 羅氏是全球唯一 應用電化學發(fā)光免疫技術制造儀器的廠商2006年羅氏推出電化學發(fā)光免疫模塊e6012007年羅氏推出電化學發(fā)光免疫模塊e411ECL 2010 diskE170ECL 2010 racke601Elecsys系列全自動免疫分析儀e411 diske411 rack電化學發(fā)光反

5、應的原理三聯(lián)吡啶釕和三丙胺在電極表面發(fā)生的電化學發(fā)光反應電化學發(fā)光原理底物：三聯(lián)吡啶釕Ru(bpy)2+3 N羥基琥珀酰胺酯(NHS) 三丙胺(TPA) 在電極陽極表面，以上兩種電化學活性物質(zhì)同時失去電子發(fā)生氧化反應，2價的Ru(bpy)2+3 標記物被氧化成3價的Ru(bpy)3+3 的標記物，TPA被氧化成陽離子自由基TPA+* ， TPA+* 很不穩(wěn)定，自發(fā)地失去一個質(zhì)子而形成自由基TPA* ，其為強還原劑，將一個電子給3價的Ru(bpy)3+3 ，使其成為激發(fā)態(tài)的Ru(bpy)2+3 ，而TPA自身被氧化成氧化產(chǎn)物。激發(fā)態(tài)的Ru(bpy)2+3衰減時發(fā)射一個波長620nm的光子，重新形

6、成基態(tài)的Ru(bpy)2+3 。這一過程在電極表面周而復始進行，產(chǎn)生許多光子。使得光信號增強。Sandwich Principle雙抗夾心法 large molecular weight antigens are measured directly proportional measurement, means: low signal = low concentration high signal = high concentration e.g. TSH, CA 15-3 II assays雙抗夾心法 & 橋聯(lián)免疫法Competitive Principle競爭法 small molecul

7、ar weight antigens are measured indirectly proportional measurement, means: high signal = low concentration low signal = high concentration e.g. T4, Folate II assays競爭法電化學發(fā)光免疫系統(tǒng)核心原理電化學發(fā)光磁性微粒子固相親和素- 生物素間接包被流動池檢測系統(tǒng)簡單試劑管理，先進的定標概念直徑最小 2.8um表面積大而均一磁性微粒子呈懸浮狀態(tài)使異相反應變成類均相反應加快反應速度提高反應靈敏度磁性微粒子固相載體的優(yōu)點專利的鏈霉親和素-生

8、物素包被技術適用于包被各種化合物，如多肽、脂多糖等。親和素包被微粒子高效、均一、穩(wěn)定、通用。鏈霉親和素- 生物素間接包被的優(yōu)勢生物素結(jié)合物與標本液相反應。生物素- 親和素反應親和力強。由磁鐵將結(jié)合標記Ag-Ab復合物的磁性微粒（結(jié)合相）吸附于電極上，游離相被緩沖液沖走；電極表面的電化學發(fā)光的信號檢測完成后，磁鐵移走并使用系統(tǒng)清潔液沖走電極表面的結(jié)合標記Ag-Ab復合物的磁性微粒子；實現(xiàn)了結(jié)合相與游離相的全自動分離流動池檢測系統(tǒng)簡單的試劑管理適用于電化學發(fā)光全自動免疫分析儀各種型號 Elecsys 2010 and the Modular E 1702維條形碼自動輸入全部信息試劑聯(lián)體包 成分獨立

9、 穩(wěn)定好無需配制，打開即用自動開閉試劑瓶蓋，有效地防止揮發(fā)等電化學發(fā)光試劑極為穩(wěn)定兩點定標，節(jié)約成本二維條碼系統(tǒng)，信息量大先進的兩點定標方式羅氏研發(fā)部：建筑在參考標準上的 Master calibrator curve：10-12point每批試劑：Lot-specific master calibration curve (n = 5 or 6)客戶端：換批號兩點定標免疫檢測技術的發(fā)展電化學發(fā)光系統(tǒng)及其原理電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢同行業(yè)中最先進的分析原理專利的電化學發(fā)光分析技術（ECL） 最好的化學發(fā)光標記物-三聯(lián)吡啶釕分子量小，結(jié)構(gòu)簡單?？梢詷擞浻诳乖贵w，核酸等各種分子量，分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)。從而具有最齊全的檢測菜單。三聯(lián)吡啶釕為水溶性，且高度穩(wěn)定的小分子物質(zhì)。保證電化學發(fā)光反應的高效和穩(wěn)定，而且避免了本底噪聲干擾。 最先進的包被技術采用羅氏公司專利的鏈霉親和素-生物素包被技術。鏈霉親和素-生物素是最牢固和特異的結(jié)合。保證了牢固的包被效果和特異的檢測結(jié)果。電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢電化學發(fā)光技術的優(yōu)勢特殊的磁性微粒子載體以及分離技術由聚苯乙烯包被的磁性微粒子為載體，直徑僅為2.8um。同類型產(chǎn)品最小提供類均相的反應環(huán)境，增加反應面積，提高反應速度；保證最終檢測結(jié)果的高靈敏度；利用磁性分離技術，實現(xiàn)全自動化分析。與其它幾種標記免疫測定技