乳與乳制品病原微生物檢驗(yàn)方法金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)

1、乳與乳制品病原微生物檢驗(yàn)方法金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn) YLNB 4.1方法一：國標(biāo)法1. 儀器及器材 冰箱：0-4 恒溫培養(yǎng)箱：361 顯微鏡：10100 均質(zhì)器或滅菌乳缽。 天平：0-500g，精度0.5g 滅菌試管：10mm100mm、16mm160mm 滅菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度） 滅菌錐形瓶：500ml、100ml 滅菌培養(yǎng)皿：直徑90cm滅菌L型涂布棒滅菌刀、剪子、鑷子等培養(yǎng)基和試劑 胰酪胨大豆肉湯：按GB/T4789.28-2003中4.59規(guī)定 7.5氯化鈉肉湯：按GB/T4789.28-2003中4.61規(guī)定 血瓊脂平板：按GB/T4789.

2、28-2003中4.6規(guī)定 Baid-Parker瓊脂平板：按GB/T4789.28-2003中4.60規(guī)定 肉浸液肉湯：按GB/T4789.28-2003中4.1規(guī)定 0.85滅菌生理鹽水。 兔血漿：按GB/T4789.28-2003中4.63規(guī)定檢驗(yàn)程序：檢樣25g(ml)+225ml滅菌生理鹽水Baid-Parker平板0.3ml、0.3ml、0.4ml增菌培養(yǎng)方法直接計數(shù)方法7.5氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯血平板，Baid-Parker平板血平板361 24h361 24h361 24h報告血漿凝固酶試驗(yàn)觀察溶血涂片染色361 24h方法4.1 增菌培養(yǎng)法4.2 檢樣處理：按無菌操作取

3、檢樣25g（ml）,加入225ml滅菌生理鹽水，固體樣品研磨或置均質(zhì)器中制成混懸液。4.3 增菌及分離培養(yǎng)：吸取5ml上述混懸液，接種于7.5氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯50ml培養(yǎng)基內(nèi)，361培養(yǎng)24h，轉(zhuǎn)種于血平板和Baid-Parker平板，361培養(yǎng)24h，挑取血平板上金黃色（有時為白色）菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗(yàn)。4.4 形態(tài)：本菌為革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄球狀，無芽孢，無莢膜，致病性葡萄球菌的菌體較小，直徑約為0.5um1um.4.5 在肉湯中呈混濁生長，在胰酪胨大豆肉湯內(nèi)有時液體澄清，菌量多時呈混濁生長，血平板上菌落呈金黃色，有時也為白色，大而凸起，圓形，不透明，表面

4、光滑，周圍有溶血圈。在Baid-Parker平板為圓形，光滑凸起，濕潤、直徑為2mm3mm，顏色呈黑色到灰色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度，偶爾會遇到非脂肪溶解的類似菌落；但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。4.6 血漿凝固酶試驗(yàn)：吸取1：4新鮮兔血漿0.5ml，放入小試管中，在加入培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5ml，振蕩搖勻，置361溫箱或水浴內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固，即將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝塊者，被認(rèn)為陽性結(jié)果。同時以已知陽性和陰性葡萄

5、球菌株及肉湯作為對照。5. 直接計數(shù)方法5.1 吸取上述1：10混懸液，進(jìn)行，進(jìn)行10倍遞次稀釋，根據(jù)樣品污染情況，選擇不同濃度的稀釋液1ml，分別加入3塊Baid-Parker平板，每個平板接種量分別為0.3ml、0.3ml、0.4ml然后用滅菌L棒涂布整個平板。如水分多不易吸收，可將平板放在3611h，等水分蒸發(fā)后反轉(zhuǎn)平皿置361培養(yǎng)。5.2 在三個平板上點(diǎn)數(shù)周圍有混濁帶的黑色菌落，并從中任選5個菌落，分別接種血平板，36124h培養(yǎng)后進(jìn)行染色鏡檢、血漿凝固酶試驗(yàn)，步驟同增菌培養(yǎng)法。5.3 菌落計數(shù)：將三個平板中疑似金黃色葡萄球菌黑色菌落數(shù)相加，乘以血漿凝固酶陽性數(shù)，除以5，再乘以稀釋倍數(shù)，即可求出每克樣品中金黃色葡萄球菌數(shù)。方法二：紙片法1. 儀器及器材：同方法一中的設(shè)備和材料。2. 培養(yǎng)基和試劑 0.85滅菌生理鹽水 3M Petrifilm (第二代)金黃色葡萄球菌快速檢驗(yàn)測試片和確認(rèn)反應(yīng)片。按照操作說明進(jìn)行貯藏。3. 方法 檢樣處理：按無菌操作取檢樣25g（ml）,加入22