氣相色譜方法驗證

1、方 案第1版頂空氣相色譜法測定原料藥中溶劑A和溶劑B含量的驗證*土*藥業(yè)有限公司大大大大有限公司方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原料 藥中溶劑A和溶劑B的含量方案號：版本號：第1版共21頁：第1頁生效日期：編寫人：日期：審閱人：日期：批準人：日期：QA經(jīng)理最終方案批準：總經(jīng)理：日期：質(zhì)量檢驗部經(jīng)理：日期：質(zhì)量保證部經(jīng)理：日期：大大大大有限公司 方法驗證名 稱：方案號：頂空氣相色譜法測定原料版本號：第1版藥中溶劑A和溶劑B的含量共21頁：第2頁錄日1.2.3.4.5.20大火*有限公司方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原料藥 中溶劑A和溶劑B的含量方案號：MVP- 017版本號：第1版共21頁

2、：第3頁一、目的驗證頂空氣相色譜法能否準確、精密的測定一定濃度范 圍內(nèi)的原料藥中溶劑A和溶劑B的含量。驗證頂空氣相色譜法測定原料藥中溶劑A和溶劑B含量 是否具有良好的選擇性。驗證方法在環(huán)境、條件發(fā)生一定變化時，能否有一定的 耐受性。二、范圍適用于大火大火藥業(yè)有限公司原料藥中溶劑A和溶劑B含 量的驗證，包括：空白試驗、精密度、定量限、線性范圍、準 確度、耐受性等。三、儀器與試劑及色譜條件儀器與試劑GC HP6890N (FID)Column: DB-1301 (30mx0.32mmI.D. X1m)Oven： 90CInlet: 1500Detector: 200CColumn Pressure

3、:4.8psiColumn flow rate: 0.8ml/minSplit rate: 1:25Sampler Condition:大大大大有限公司方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原料 藥中溶劑A和溶劑B的含量方案號：版本號：第1版 共21頁：第4頁Agilent 7694 Head-space SamplerEquilibration temperature: 80 CEquilibration time: 45minTransfer-line temperature: 105 CCarrier gas: 25ml/minPressurisation time: 0.5minInjec

4、tion time: 0.20min移液管：25 ml, 10ml, 2ml吸量管：2ml膠頭滴管分析天平 頂空瓶(22ml),容量瓶：50ml微量注射器：25ul試劑：DMF(AR)、溶劑B(AR)、溶劑A(AR)、原料藥(批號)無殘溶的原料藥 四、驗證實驗內(nèi)容空白試驗 (1) DMF用稱液管移取2mlDMF于22ml頂空瓶中，加蓋，作色譜處 理。可接受標準：在溶劑B和溶劑A出峰位置處無干擾峰驗證結(jié)果：結(jié)論：操作者：核對者：大大大大有限公司方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原料藥中溶劑A和溶劑B的含量方案號：版本號：第1版共21頁：第5頁(2)空白取無殘留溶媒(在水相結(jié)晶，不用溶媒處理)的普

5、青 g 于22ml頂空瓶中，用移液管加入2mlDMF，加蓋，搖勻，作色 譜分析。可接受標準：在溶劑B和溶劑A出峰位置處無干擾峰。驗證結(jié)果：結(jié)論：操作者：核對者：精密度2.1系統(tǒng)適應性 溶液配制貯備液：向50ml容量瓶中精確加入溶劑B0.05g，溶劑 A0.5g，用 DMF 定容。標準溶液A：稱取貯備液1.2800g于50ml容量瓶中，用 DMF溶液定容。精密稱1.0g無殘留的原料藥于22ml頂空瓶中，加入2mli=標準溶液A,加蓋作色譜處理，各重復4次，計算4次的平均 值，相對標準偏差。i=可接受標準：RSDW5% 驗證結(jié)果：g,溶劑Ag，用貯備液配制：稱取溶劑B DMF定容至50mlg,溶劑

6、Ag，用g于50 ml容量瓶標準溶液A:稱取貯備液 中，用DMFg于50 ml容量瓶稱 取 無 殘 留 的原料 藥 , , ,于 22ml 頂空瓶中，加入2 ml標準溶液A,加蓋作色譜處理。大大大大有限公司方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原料 藥中溶劑A和溶劑B的含量方案號：版本號：第1版 共21頁：第6頁標準溶液A色譜數(shù)據(jù)表瓶號溶劑A峰面積溶劑B峰面積1.2.3.4.平均RSD結(jié)論:核對者:操作者:核對者:線性范圍：3.1線性標準溶液配制：貯備液a:用移液管移取10ml貯備液于50ml容量瓶中，用DMF 定容，搖勻。1#標準液：用吸量管移取1.25ml貯備液于50ml容量瓶中，用 DMF定

7、容，搖勻，制成1#貯備液。然后精密稱 g無殘留的原料藥于22 ml頂 空瓶中，加入2ml上述溶液，混勻。（約含500ppm溶 劑A及50ppm溶劑B）ol=JI三三2#標準液：用移液管移取25ml1#貯備液于50ml容量瓶中，用 DMF定容，搖勻，制成2l=JI三三液。然后精密稱 g無殘留的原料藥于22ml頂空 瓶中，加入2ml上述溶液，混勻。（約含250ppm溶劑A 及25ppm溶劑B）。3#標準液：用移液管移取25ml2#貯備液于50ml容量瓶中，用 DMF定容，搖勻，制成3#貯備液。然后精密稱 g無殘留的原料藥于22ml頂空 瓶中，加入2ml上述溶液，混勻。（約含125ppm溶劑A 及

8、12.5ppm 溶劑 B）。大大大大有限公司方法驗證方案號：版本號：第1版 共21頁：第7頁方案號：版本號：第1版 共21頁：第7頁l=J頂空氣相色譜法測定原料 藥中溶劑A和溶劑B的含量l=J4#標準液：用移液管移取25ml3#貯備液于50ml容量瓶中，用 DMF定容，搖勻，制成4#貯備液。然后精密稱g無殘留的原料藥于22ml頂空瓶中，加入2ml上述溶液，混勻。（約含62.5ppm溶劑 A 及 6.25ppm 溶劑 B）o5#標準液：用移液管移取25ml4#貯備液于50ml容量瓶中，用 DMF定容，搖勻，制成5#貯備液。然后精密稱 g無殘留的原料藥于22ml頂空 瓶中，加入2ml上述溶液，混勻

9、。（約含31.3ppm溶劑 A 及 3.13ppm 溶劑 B）。分別取1#、2#、3#、4#、5#線性標準液，加蓋作色譜處理。按照線性標準液1#5#的濃度與其對應的溶劑B及溶劑A 的峰面積，作線性回歸得到溶劑B和溶劑A的工作曲線。 可接受標準：YN0.99線性范圍數(shù)據(jù)表序 號溶劑入濃度溶劑B 濃度溶劑A峰 面枳溶劑B峰面 積1#2#3#4#5#大大大大有限公司 方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原料 藥中溶劑A和溶劑B的含量方案號：版本號：第1版共21頁：第8頁溶劑A線性回歸結(jié)果：a =b =r=工作曲線： y =溶劑B線性回歸結(jié)果：a=b=r=工作曲線： 結(jié)論： 操作者：4. 定量限y =核

10、對者：3#貯備液逐級稀釋，作色譜分析，按照色譜峰的信噪比為1：10時的濃度作為溶劑A和溶劑B的定量限。結(jié)論：溶劑B的定量限：溶劑A的定量限：操作者：核對者：大大大大有限公司方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原料 藥中溶劑A和溶劑B的含量方案號：版本號：第1版 共21頁：第9頁5.準確度5.1系統(tǒng)適用性a：稱取貯備液 g于50ml容量瓶中，用DMF定容，搖勻。b：取a液2ml于22ml頂空瓶中，加蓋作色譜處理，各重復4次，計算4次的平均值，相對標準偏差?？山邮軜藴剩篟SDW5%瓶 號溶劑A峰面積溶劑B峰面積1.2.3.4.平 均RSD結(jié)論:5.2準確度稱取1.0g普魯卡因青毒素產(chǎn)品，測出其溶劑B

11、和溶劑A的殘留量，然后加入一定量的標準溶液，加入三次，計算其回收率，可接受標準：回收率應在90%110%之間。驗證結(jié)果:5.2.1溶劑B回收率稱取原料藥產(chǎn)品 g于22ml頂空瓶中，加入2mlDMF溶液作色譜處理,根據(jù)工作曲線計算出該批產(chǎn)品中的溶劑B和溶劑A的含I三三溶劑B峰 積溶劑A峰面積溶劑B峰 積溶劑A峰面積溶劑B含量i=jI三m溶劑A含量大大大大有限公司 方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原料 藥中溶劑A和溶劑B的含量方案號：版本號：第1版共21頁：第10頁稱取原料藥產(chǎn)品1.0g于22ml頂空瓶中，加入2mlDMF及10 ul,20ul,25ul 的貯備液 a，加蓋作色譜處理，根據(jù)工作曲

12、線計算溶劑B和溶劑A的含量。稱樣量(g)貯備液a(ul)溶劑B峰面 積溶劑B含 量丁醇峰面 積丁醇 含量溶劑B回收率：溶劑A回收率：結(jié)論：操作者：核對者:大大大大有限公司方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原料 藥中溶劑A和溶劑B的含量方案號：版本號：第1版共21頁：第11頁6.中間精密度對同一樣品進行三次平行測定，連續(xù)測定三天（三天均用 同一個標準品和檢品），由不同人測定?？山邮軜藴剩寒斕鞙y定結(jié)果的RSD溶劑BW20%；溶劑 AW15%大與天之間的測定結(jié)果RSD：溶劑BW30%；溶劑 AW20%6.1系統(tǒng)適用性（第一天）溶液配制:a：稱取貯備液ga：稱取貯備液g于50ml容量瓶中，用DMF定容

13、，搖l=J勻。b：取a液2ml于22ml頂空瓶中，加蓋作色譜處理，共重復 4次，計算4次的平均值，相對標準偏差。C:分別稱原料藥 批, g,g于22 ml頂空瓶中,加入2mlDMF,混勻,加蓋作色普處理，根據(jù)工作曲線計算出該批產(chǎn)品中溶劑A和溶劑B工作曲線計算出該批產(chǎn)品中溶劑A和溶劑B含量.i=4RSD大大大大有限公司方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原料藥 中溶劑A和溶劑B 的含量方案 號： 版本 號： 第1 版 共21 頁：第12 頁名稱溶劑B峰面積溶劑B濃度溶 劑 A 峰面 積溶劑A濃度樣1樣2樣3RSD操作人：6.2系統(tǒng)適用性（第二天）操作人：6.2系統(tǒng)適用性（第二天）核對者:溶液配制:

14、a：稱取貯備液ga：稱取貯備液g于50ml容量瓶中，用DMF定容，搖l=J勻。b：取a液2ml于22ml頂空瓶中，加蓋作色譜處理，共重復 4次，計算4次的平均值，相對標準偏差。C:分別稱原料藥 批 g, g,g于22 ml頂空瓶中,加入2mlDMF,混勻,加蓋作色普處理,根據(jù) 工作曲線計算出該批產(chǎn)品中溶劑A和溶劑B含量方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原料藥 中溶劑A和溶劑B 的含量方案 號： 版本 號： 第1 版 共21 頁：第13 頁名稱溶劑B峰 面積溶劑B濃度溶 劑 峰面 積溶劑濃度樣1樣2樣3RSD結(jié)論:操作人：核對人：6.3系統(tǒng)適用性（第三天）溶液配制：a：稱取貯備液 g于50ml容

15、量瓶中，用DMF定容，搖勻。b：取a液2ml于22ml頂空瓶中，加蓋作色譜處理，共重復 4次，計算4次的平均值，相對標準偏差。C:分別稱原料藥 批 , g,g于22 ml頂空瓶中,加入2mlDMF,混勻,加蓋作色普處理,根據(jù)工作曲線計算出該批產(chǎn)品中溶劑A工作曲線計算出該批產(chǎn)品中溶劑A和溶劑B含量.i=方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原料藥 中溶劑A和溶劑B方案 號：操作人：核對人:三天驗證結(jié)果統(tǒng)計時間溶劑A含量（%）溶劑B含量（%）操作人：核對人：7.耐受性對比如下條件的測量結(jié)果：a不同柱溫的耐受性b不同流速的耐受性可接受標準：RSDW5%大大大大有限公司方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原

16、料 藥中溶劑A和溶劑B的含量方案號：版本號：第1版共21頁：第15頁7.1使用不同柱溫的耐受性7.1.1第一種柱溫T = 88C系統(tǒng)精密度a：稱取貯備液 g于50ml容量瓶中，用DMF定容,搖勻。b：取a液2ml于22ml頂空瓶中，加蓋作色譜處理，共重復4次，計算4次的平均值，相對標準偏差。i=次，計算4次的平均值，相對標準偏差。i=操作人：核對人：7.1.2第二種柱溫T=90Cg于50mlg于50ml容量瓶中，用DMF定容,a：稱取貯備液名 稱：頂空氣相色譜法測定原料 藥中溶劑A和溶劑B的含量方案號：版本號：第1版共21頁：第16頁方法驗證系統(tǒng)精密度i=jI三三搖勻。b：取a液2ml于22m

17、l頂空瓶中，加蓋作色譜處理，共重復 4次，計算4次的平均值，相對標準偏差。操作人：核對人：7.1.3第三種柱溫T=92C系統(tǒng)精密度a：稱取貯備液 g于50ml容量瓶中，用DMF定容，搖勻。b：取a液2ml于22ml頂空瓶中，加蓋作色譜處理，共重復4次，計算4次的平均值，相對標準偏差。大大大大有限公司方法驗證名 稱：方案號：頂空氣相色譜法測定原料版本號：第1版藥中溶劑A和溶劑B的含量共21頁：第17頁操作人：核對人：7.1.4對比分析7.1.5結(jié)論：7.2不同流速的耐受性7.2.1 第一種流速 0.7ml/min系統(tǒng)精密度a：稱取貯備液 g于50ml容量瓶中，用DMF定容，搖勻。b：取a液2ml于22ml頂空瓶中，加蓋作色譜處理，共重復4次，計算4次的平均值，相對標準偏差。大大大大有限公司方法驗證名 稱：方案號：頂空氣相色譜法測定原料版本號：第1版藥中溶劑A和溶劑B的含量共21頁：第18頁操作人：核對人：7.2.2 第二種流速 0.8ml/min系統(tǒng)精密度a：稱取貯備液 g于50ml容量瓶中，用DMF定容，搖勻。b：取a液2ml于22ml頂空瓶中，加蓋作色譜處理，共重復 4次，計算4次的平均值，相對標準偏差。大大大大有限公司方法驗證名 稱：頂空氣相色譜法測定原料 藥中溶劑A和溶劑B的含量方案號：版本號：第