DNA的粗提取和鑒定 省賽獲獎-完整版獲獎?wù)n件

1、構(gòu)成生物體的遺傳物質(zhì)是什么？怎樣才能將細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)分離出來？ 討論2：討論：基礎(chǔ)知識0溶解度NaCl濃度0.14mol/L2mol/L 在NaCl溶液濃度低于0.14 mol/L時(shí)，DNA的溶解度隨NaCl溶液濃度的增加而逐漸降低; 在0.14 mol/L時(shí)，DNA溶解度最小；當(dāng)NaCl溶液濃度繼續(xù)增加時(shí)，DNA的溶解度又逐漸增大。基礎(chǔ)知識0溶解度NaCl濃度0.14mol/L2mol/L基礎(chǔ)知識0溶解度NaCl濃度0.14mol/L2mol/L思考2要使DNA溶解，需要使用什么濃度？要使DNA析出，又需要使用什么濃度？ 2mol/L濃度可使DNA溶解； 0.14mol/L濃度可使DNA析

2、出。基礎(chǔ)知識0溶解度NaCl濃度0.14mol/L2mol/L思考2要使DNA溶解，需要使用什么濃度？要使DNA析出，又需要使用什么濃度？基礎(chǔ)知識將DNA和蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離基礎(chǔ)知識DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，但是對DNA沒有影響大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受6080的高溫，而DNA在80以上才會變性洗滌劑可以溶解細(xì)胞的細(xì)胞膜，去除脂質(zhì)和蛋白質(zhì),但對DNA沒有影響基礎(chǔ)知識 思考4 提取DNA還可以利用DNA對酶、高溫和洗滌劑耐受性原理。利用該原理時(shí)，應(yīng)選用怎樣的酶和怎樣的溫度值？ 蛋白酶，因?yàn)槊妇哂袑Ｒ恍?，蛋白酶只水解蛋白質(zhì)而不會對DNA產(chǎn)生影響。溫度值為6080，因?yàn)樵摐囟戎档鞍?/p>

3、質(zhì)變性沉淀，而DNA不會變性。基礎(chǔ)知識 思考4 提取DNA還可以利用DNA對酶、高溫和洗滌劑耐受性原理。利用該原理時(shí)，應(yīng)選用怎樣的酶和怎樣的溫度值？ DNA的鑒定基礎(chǔ)知識 DNA的鑒定DNA與二苯胺（沸水?。境伤{(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑?；A(chǔ)知識DNA與二苯胺（沸水浴）會染成藍(lán)色，因此，二苯胺可以作為鑒定DNA的試劑。甲基綠（綠色）基礎(chǔ)知識 DNA的鑒定通過利用不同濃度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以從細(xì)胞中提取DNA；再利用酒精進(jìn)一步將DNA與蛋白質(zhì)分離開來，達(dá)到提純的目的；最后利用二苯胺試劑鑒定提取的物質(zhì)是否是DNA。原理總結(jié)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取 不同生物的組

4、織中DNA含量不同。在選取材料時(shí)，應(yīng)本著DNA含量高、材料易得、便于提取的原則。你認(rèn)為教材提供的材料中哪些不適合提取DNA？實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)哺乳動物血液和液體培養(yǎng)基中大腸桿菌。（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取 不同生物的組織中DNA含量不同。在選取材料時(shí)，應(yīng)本著DNA含量高、材料易得、便于提取的原則。你認(rèn)為教材提供的材料中哪些不適合提取DNA？實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 從核DNA數(shù)目來看，豬38條，雞78條，哺乳動物血0條，獼猴桃58條，洋蔥16條，豌豆14條，菠菜12條，大腸桿菌1條。請選擇動植物材料各一種。（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)雞血、獼猴桃。（一）實(shí)驗(yàn)材料的選取 從核DNA數(shù)目來看，豬38條，雞78條，哺乳動物血0條，

5、獼猴桃58條，洋蔥16條，豌豆14條，菠菜12條，大腸桿菌1條。請選擇動植物材料各一種。（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液1.動物細(xì)胞動物細(xì)胞的破碎較易，例如，在雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可。（二）破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液1.動物細(xì)胞討論為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？討論為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？答：蒸餾水對于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再加上攪拌的機(jī)械作用，就加速了雞血細(xì)胞的破裂（細(xì)胞膜和核膜的破裂），從而釋放出DNA。2. 植物細(xì)胞植物細(xì)胞需要先用一定的洗滌劑和食鹽溶解細(xì)胞膜2. 植物細(xì)胞討論加

6、入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？討論加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？答：洗滌劑是一些離子去污劑，能溶解細(xì)胞膜，有利于DNA的釋放；食鹽的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。植物細(xì)胞需要先用一定的洗滌劑和食鹽溶解細(xì)胞膜2. 植物細(xì)胞實(shí)例：提取洋蔥DNA時(shí)，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液討論如果研磨不充分，會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？討論如果研磨不充分，會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？答：研磨不充分會使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全，提取的DNA量變少，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。（三）去除濾液中的雜質(zhì)為了純化提取的DN

7、A需要將濾液作進(jìn)一步處理。討論此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？（三）去除濾液中的雜質(zhì)為了純化提取的DNA需要將濾液作進(jìn)一步處理。答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)討論此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？（三）去除濾液中的雜質(zhì)為了純化提取的DNA需要將濾液作進(jìn)一步處理。 方案一：30mL濾液35gNaCl同方向攪拌，DNA溶解加入蒸餾水DNA析出過濾得到過濾物放到2mol/LNaCl溶液中溶解DNA-NaCl溶解液 方案二：30mL濾液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）靜置1015分鐘DNA濾液 方案三：30mL濾液6067處理過濾獲得DNA濾液方 案討論為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除

8、雜質(zhì)？討論 答：用高濃度的鹽溶液溶解DNA，能除去高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？討論方案二與方案三的原理有什么不同？討論方案二與方案三的原理有什么不同？ 方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離。（四） DNA的析出與鑒定1. DNA的析出 在濾液中仍然含有一些雜質(zhì)，怎樣除去這些雜質(zhì)呢？得到的DNA呈何顏色？（四） DNA的析出與鑒定

9、1. DNA的析出 在濾液中仍然含有一些雜質(zhì)，怎樣除去這些雜質(zhì)呢？得到的DNA呈何顏色？ 濾液與等體積的冷卻酒精混合均勻，靜置23分鐘，析出的白色絲狀物就是DNA。DNA呈白色。2. DNA的鑒定2. DNA的鑒定 試管2支，編號為甲、乙各加等量5mL的NaCl溶液甲中放入少量白色絲狀物，使之溶解各加4mL二苯胺，混合均勻沸水浴5min觀察顏色變化3. 實(shí)驗(yàn)操作制備雞血細(xì)胞液加檸檬酸鈉，靜置或離心破碎細(xì)胞，釋放DNA 加蒸餾水，同一方向快速攪拌過濾，除去細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等溶解核內(nèi)DNA 加入2mol/L NaCl溶液，同一方向緩慢攪拌DNA析出加蒸餾水至0.14mol/L，過濾，再溶解到2mol/L NaCl溶液中除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)DNA初步純化 與等體積95冷卻酒精混合，析出白色絲狀物除去核蛋白、RNA、多糖等DNA鑒定 二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色1、以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每100ml血液中需要加入3g檸檬酸鈉，防止血液凝固。2、加入洗滌劑后，動作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟的操作。加入酒精和玻璃棒攪拌時(shí)，動作要輕