微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(3)講稿

1、關(guān)于微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) (3)第一張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月微生物的類群原生生物原核生物真菌病毒如酵母菌單細(xì)胞的動植物如草履蟲、單細(xì)胞藻類等微生物包含了除植物界和動物界以外的所有生物無細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻原核細(xì)胞第二張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)第三張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件：（1）為培養(yǎng)的微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件（2）確保其他微生物無法混入研究和應(yīng)用微生物的前提防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物第四張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月一

2、.培養(yǎng)基 1概念：人們按照微生物對 的不同需求，配制出的供其 的營養(yǎng)基質(zhì)。（1）按物理性質(zhì)來分：培養(yǎng)基可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。（2）按成分來分，可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。（3）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。2.分類：營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖第五張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月加入青霉素的培養(yǎng)基:不加氮源的無氮培養(yǎng)基: 不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基:加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:幾種選擇培養(yǎng)基舉例：分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌 分離自養(yǎng)型微生物加入唯一碳源為纖維素的培養(yǎng)基分解纖維素的細(xì)菌分離金黃色葡萄球菌第六張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月幾種菌落及其

3、形態(tài)第七張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月幾種菌落及其形態(tài)第八張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月微生物需要的四大類營養(yǎng)要素物質(zhì)是：3.培養(yǎng)基的構(gòu)成1.碳源 2.氮源 3.無機(jī)鹽 4.水凡是能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì)。無機(jī)碳源：CO2；NaHCO3等有機(jī)碳源：糖類、脂肪酸、蛋白質(zhì)、花生粉餅、石油等概念來源：不同微生物所利用的碳源不同：1.微生物的碳源異養(yǎng)型微生物的碳源為：含碳有機(jī)物（有機(jī)碳）自養(yǎng)型微生物的碳源為：含碳無機(jī)物（無機(jī)碳）第九張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月無機(jī)氮源：N2、銨鹽、硝酸鹽、NH3等有機(jī)氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠?yàn)槲⑸锾?/p>

4、供N元素的營養(yǎng)物質(zhì)。2.微生物的氮源概念：來源：固氮微生物所利用的氮源是：3.特殊要求培養(yǎng)基還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì),例如:生長因子(微生物生長不可缺少的微量有機(jī)物）如維生素、某些氨基酸、堿基)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。 氮?dú)獾谑畯?，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月例1、下列物質(zhì)可作為培養(yǎng)硝化細(xì)菌碳源、氮源和能源的依次是 （ ）A含碳無機(jī)物、氨、氨B含碳無機(jī)物、氮、硝酸鹽C含碳有機(jī)物、氨、光D含碳有機(jī)物、硝酸鹽、氨例2 、要將土壤中的自生固氮菌（如原褐固氮菌）與其它細(xì)菌分離出來，應(yīng)將它們接種到（ ）A加入指示劑的鑒別培養(yǎng)基 B含有蛋白胨的固體培養(yǎng)基C沒有有機(jī)氮的

5、選擇培養(yǎng)基 D營養(yǎng)要素全面的液體培養(yǎng)基練一練AC第十一張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月牛肉膏當(dāng)中含有肌酸、肌酸酐、多肽類、氨基酸類、核苷酸類、有機(jī)酸類、礦物質(zhì)類及維生素類。的水溶性物質(zhì)。牛肉膏為微生物提供碳源、氮源、磷酸鹽和維生素.蛋白胨主要提供氮源和維生素。 第十二張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月1.無菌范圍：實(shí)驗(yàn)操作空間,操作者的手、衣著消毒.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸.超凈工作臺二.無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染第十三張，P

6、PT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月耐高溫需保持干燥的 物品，160170 12小時(shí)接種環(huán)、接種針等 金屬用具7075、30min 80、15min100、56min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法，殺死部分微生物（不包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈的理化因素，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸或煤酚皂溶液等高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，100KPa、121、1530min2.消毒與滅菌：第十四張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月灼燒滅菌干熱滅菌箱高壓蒸汽滅菌鍋第十五張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑（70%

7、酒精等）紫外線針對不耐高溫的液體接種室、超凈工作臺能耐高溫的，需要保持干燥的物品灼燒法干熱滅菌高壓蒸汽滅菌接種工具（接種環(huán)等）吸管實(shí)驗(yàn)操作者的雙手培養(yǎng)皿等玻璃器皿培養(yǎng)基1、消毒方法2、滅菌方法干熱滅菌第十六張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管（3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手 答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。旁欄思考第十七張，P

8、PT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g三.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：培養(yǎng)基用量依配方計(jì)算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，稱取時(shí)？牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解取紙蛋白胨、NaCl瓊脂補(bǔ)水定容4.調(diào)pH、分裝、封口：1mollNaoH調(diào)制微堿5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿第十八張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月?思考1溶化時(shí)為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱? 加瓊脂的目的是什么?可保證粘附在

9、稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中,減少誤差作為凝固劑第十九張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月思考2 在滅菌前, 用牛皮紙、舊報(bào)紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？ 培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？?在滅菌時(shí)能避免水蒸汽凝結(jié)時(shí)浸濕棉塞；在取出培養(yǎng)基錐形瓶時(shí)也能起到隔絕空氣中雜菌污染的作用不能,因?yàn)榕囵B(yǎng)皿要保持干燥,應(yīng)該用干熱滅菌第二十張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月倒平板約50防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基第二十一張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？

10、問題討論答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。第二十二張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要

11、用這個平板培養(yǎng)微生物。第二十三張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）純化大腸桿菌 微生物接種方法常見的有平板劃線法和稀釋涂布平板法。1.平板劃線法 通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。 在數(shù)次劃線后可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體稱菌落。第二十四張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)_在_旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞 將試管口通過火焰 .將已_的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液 左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃_條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基。.將

12、試管通過火焰，并塞上棉塞 火焰冷卻三至五灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的_開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。末端燒紅將平板_放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 倒置第二十五張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月劃3個平板1個不劃線（空白對照）第二十六張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月問題討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種

13、，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。第二十七張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。第二十八張，PPT共三十

14、七頁，創(chuàng)作于2022年6月 2.稀釋涂布平板法 將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)。 在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。 稀釋涂布平板法操作過程分兩個步驟，即系列稀釋操作和涂布平板操作。第二十九張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月系列稀釋操作101102103104105106 (1)將分別盛有9mL水的試管滅菌并編號。 (2)用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入第二支試管中，輕壓橡皮頭，吹吸三次使之充分混勻。 (3)從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入第三支試管中，重

15、復(fù)步驟2，直至到第六支試管。第三十張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月涂布平板操作(1)將涂布器浸在盛有70的酒精的燒杯中。(2)取少量菌液（不超0.1mL），滴加到培養(yǎng)基表面。(3)將沾有酒精的涂布器在火焰上引燃，火熄后冷卻810s。(4)用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。第三十一張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月b.涂布平板：不超過0.1ml各梯度分別涂布3個平板1個不涂布作空白對照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍第三十二張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2.菌種培養(yǎng)：3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h24h

16、后，觀察并記錄第三十三張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月涂布平板操作討論 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？ 應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。 將接種后和未接種（作為對照組）的培養(yǎng)基均放到370C的恒溫箱中，培養(yǎng)1224h后進(jìn)行觀察并記錄結(jié)果。第三十四張，PPT共三十七頁，創(chuàng)作于2022年6月 1.未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長？如果有菌落生長，說明了什么？ 未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。 2.在接種大腸桿菌的培養(yǎng)基上，能否觀察到獨(dú)立的菌落？它們的大小、形狀、顏色相似嗎？ 如果接種成功的話，在培養(yǎng)基的表面可觀察到大小、形狀、顏色相似的菌落。四、結(jié)果分析與評價(jià)第三