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文檔簡介
1、可以開發(fā)為植物源除草劑的十種植物顏桂軍朱朝華(華南熱帶農(nóng)業(yè)大學,海南儋州571737)摘要:綜述近幾年來國內(nèi)外植物源除草劑研究和發(fā)展現(xiàn)狀以及發(fā)現(xiàn)的具有他感作用的物質(zhì),著重介紹了十種具有開發(fā)價值的具有化感作用的植物:豬毛蒿、煙管頭草、核桃、飛機草、豚草、芒萁、蟛蜞菊、勝紅薊、桉樹屬植物、核桃楸及其各種化感植物的作用物質(zhì)、產(chǎn)生途徑以及生化特點。展望了一些具有開發(fā)成為除草劑的天然先導化合物的物質(zhì)。關(guān)鍵詞:生化他感作用他感物質(zhì)除草劑植物源應用傳統(tǒng)的隨機合成篩選模式成功開發(fā)新除草劑的幾率已越來越小,合成化學除草劑的環(huán)境毒性及藥害問題也日益嚴重。天然除草活性化合物具有易生物降解、毒性低、開發(fā)費用少、化學結(jié)
2、構(gòu)新奇、作用方式獨特、靶標選擇性高等合成除草劑無法比擬的優(yōu)勢,其研究日益受到人們的重視。對生化他感(Allelopathy)現(xiàn)象的觀察已有很長的歷史,但在1900年之后才開始真正進行科學的實驗和研究。Allelopathy詞是由Molisch(1937)首次提出的,通常指一種植物對其它植物的萌發(fā),生長發(fā)育的毒害作用。他感物質(zhì)是植物體在生命活動中和殘體分解產(chǎn)生的初級或次級代謝產(chǎn)物。植物之間通過生化物質(zhì)(即他感物質(zhì))相互促進和相互抑制的兩方面效應。已被鑒定的他感化學物質(zhì)大多數(shù)是莽草酸(shikimicacid)和乙酸途徑(acetatepathways)的產(chǎn)物,包括酚類、肉桂酸(cinnamica
3、cid)、苯甲酸(benzoicacid)、單寧、類黃酮(flavonoid)、類萜(terpenoids)、生物堿(alkaloid)、類固醇、甾類化合物(steroid)和醌。目前世界上已發(fā)現(xiàn)上百種具除草活性的天然化合物,有些已被開發(fā)為除草劑推廣應用。環(huán)庚草醚(通用名:Cin2methylin)就是以植物性化合物1,4一桉樹腦為先導化合物開發(fā)的一種新型除草劑;而捷利康公司研制的除草劑Triketones則是以植物次級代謝產(chǎn)物leptospermone為模板開發(fā)的。1999年,Dayan等報道人工合成的植物毒素和天然植物毒素作用的分子靶位很少有重疊,這樣,就可能通過植物源的次級化合物來發(fā)現(xiàn)具
4、有新的作用靶位,而且對環(huán)境友好的除草劑。越來越多的科研工作人員從事植物化感作用的研究,試圖找出植物之間相生相克的規(guī)律以及發(fā)現(xiàn)一些先導物質(zhì)去模仿從而得到高效低毒的具有除草、殺蟲或植物生長調(diào)節(jié)等作用的新的化合物,筆者總結(jié)為以下十種植物具有開發(fā)潛力。1豬毛蒿(濱蒿)(Artemisiascoparia)為菊科蒿屬植物,12年生草本,分布于全國各地,北方最為普遍。生于荒漠、路旁或農(nóng)田中。部分麥類、豆類、薯類、幼林等受害較重。水蒸餾法和石油醚萃取可得油狀的液體即為精油1。豬毛蒿含蒿屬香豆素(scoparone),即6,7-二甲氧基香豆素(6,7-dimethoxycoumarin),全草含揮發(fā)油,其中有
5、:側(cè)柏醇(thujicalcoho1),正丁醛,糠醛(furfuraldehyde),甲基庚酮(methylheptenone),葛縷酮(carvone),1,8-桉葉素(1,8-Epoxymethane)等10多種組分。除草生物活性測定發(fā)現(xiàn)豬毛蒿精油對稗草(Echinochloacrusgalli)、馬唐Digitariasanguinalis(L.)Scop.、含羞草(Mimosapudica.L)等雜草具有光活化防除效果2。在100mg/L的濃度下,豬毛蒿精油可引起稗草細胞結(jié)構(gòu)損傷,特別在有光照的條件下,損傷程度更加嚴重。供體植物為豬毛蒿,受體分為非共生的圈外受體,即日本牛藤(Achyr
6、anthesjaponica)和車前(Plantagoasiatica),以及與供體共生的圈內(nèi)受體北濱藜(Atriplexgmelini)2類,供體揮發(fā)性物質(zhì)對3種受體植物種子發(fā)芽及幼根伸長都有不同程度的抑制3。豬毛蒿精油為植物次生代謝產(chǎn)物,在環(huán)境中易降解,對人、畜低毒,加上此類物質(zhì)又具光活化特性,可利用自然界取之不盡的光能提高除草活性,將成為新型除草劑開發(fā)的重要內(nèi)容之一,豬毛蒿內(nèi)的光敏異株克生物質(zhì),將為開發(fā)光活化除草劑提供重要的線索。2煙管頭草(CarpesiumcernuumL.)菊科天名精屬,大部分分布于亞洲中部,作為天名精屬的模式種,在我國分布較廣,生長于山坡、草地、林緣、路邊。其根、
7、莖、葉、果實在民間長期入藥,主要活性成分為倍半萜內(nèi)酯類。而對其化感作用研究甚少,郝雙紅等4曾報道煙管頭草植物樣品對供試的4種作物種子油菜(BrassicacampestrisL.)、黃瓜(CucumissativusL.)、小麥(TriticumaestivumL)、高粱(SorghumvulgarePer.)幼芽的生長具有接近或大于70%的抑制作用。煙管頭草植物樣品對反枝莧(AmaranthusretroflexusL.)、野燕麥(AvenafatuaL.)和多年生黑麥草(AmaranthuspaniculatusL.)種子幼根和幼芽生長抑制率都在95%以上,對紫花苜蓿(Medicagosa
8、tivaL.)種子幼根幼芽生長的抑制作用也很強烈。從煙管頭草的莖葉中分離并鑒定了11個化合物,其中包括6個倍半萜內(nèi)酯類化合物和3個芳香族化合物。說明某些植物體內(nèi)芳香酸和萜類物質(zhì)具有他感作用。3核桃(JuglansregiaL.)胡桃科核桃屬落葉喬木,在我國栽培歷史悠久,分布很廣,資源十分豐富,以山東、河北、河南、浙江、山西、陜西、甘肅、青海、四川、貴州、湖北西部及新疆南部所產(chǎn)尤多。據(jù)報道,核桃科植物具有化感作用和胡桃醌能夠抑制植物生長發(fā)育,故有核桃木下不長雜草等的記載。基于前人的研究,以核桃葉作為供試材料,選用萬苣(LactucasativaL.)、小麥、西紅柿(Lycopersiconesc
9、ulentumMill.)3種受體品種,首次通過發(fā)芽和生長試驗,研究了核桃葉的化感作用。結(jié)果表明,不同濃度的核桃葉提取物對3種受體材料分別有抑制或促進作用。這為開發(fā)新型無公害植物源農(nóng)藥生物調(diào)節(jié)劑和除草劑提供依據(jù)。胥耀平等5報道了高濃度的核桃葉提取物對萬苣、小麥、西紅柿3種受體幼苗的生長均有抑制作用,低濃度則有促進作用。核桃葉提取物中的主要化感物質(zhì)有黃酮類、酚類(包括有機酚酸)、鞣質(zhì)類化合物?;形镔|(zhì)一般都是次生代謝物質(zhì),種類繁多,既有水溶性的,也有醇溶性的等。這為開發(fā)新型無公害植物源農(nóng)藥生物調(diào)節(jié)劑和除草劑提供依據(jù)。4飛機草Eupatoriumodoratum(L.)為菊科澤蘭屬多年生草本植物,
10、又名香澤蘭,分布于海南、廣東、廣西、云南等地。它們發(fā)生區(qū)大肆排擠本地植物、影響林木生長和栽培植物生長,還堵塞水渠,阻礙交通。全草含揮發(fā)油、香豆素、a、P和Y谷甾醇。從飛機草的乙酸乙酯提取物中分離得到4個黃酮類化合物,經(jīng)光譜分析鑒定為:山萘酚-4-甲基醚、槲皮黃素-7,4-二甲基醚、刺槐素、柑桔素-4-甲基醚。從石油醚提取物中分離得到3個化合物,經(jīng)光譜鑒定及與標準品對照確定為豆甾醇、P-谷甾醇、P-胡蘿卜甙。凌冰等6報道了飛機草揮發(fā)油對黑麥草(LoliummultiflorumLam.)、水稻(OryzasativaL.)、蘿卜(RaphanussativusL.)、白菜(Brassicachi
11、nensisL.)和四季豆(PhaseolusvulgarisL.)5種植物幼苗的生長均有明顯的抑制作用。關(guān)于飛機草乙醇提取物對豇豆(VignasinensisL.)、青瓜(CucumissativusL.)、蘿卜、菜心(BrassicaparachinensisL.H.Bailey)、大白菜(Brassicapekinensis(Lour.)Rupr.)、小白菜(BrassicachinensisL.)和水稻、稗草生長具有高抑低促的特點的報道。飛機草揮發(fā)油的化學組成主要是單萜及倍半萜,這些化合物能在飛機草周圍形成“萜類云”,拒避和抑制病蟲侵害,如何將飛機草揮發(fā)油用于農(nóng)田,保護農(nóng)作物免遭病蟲危
12、害是值得研究的課題。5豚草(A.artemisiifolia)菊科豚草屬的一種,1年生惡性雜草,40年代傳入我國,至今已在東北地區(qū)廣泛蔓延。形成了對自然植被、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的巨大危害。新的研究發(fā)現(xiàn)豚草對其他植物具有化感作用也是其能暢通無阻的重要原因之一。王大力等7針對豚草的揮發(fā)物、莖葉和根的淋溶物、根區(qū)土壤水浸液等的化感活性進行了研究,發(fā)現(xiàn)豚草的揮發(fā)物對大豆(Soybean)和玉米(Maize)的種子萌發(fā)有一定抑制作用。豚草的莖葉水浸提液對蘿卜、綠豆(Vignarabiata)、番茄、甜瓜(Cucumismelo)、大白菜種子的萌發(fā)率和發(fā)芽速度指數(shù)及幼苗的苗高和根長均有不同程度的抑制作用。由此可以看
13、出豚草可能通過揮發(fā)、雨水淋溶和根系分泌等途徑向環(huán)境中釋放一些萜類、烯醇類和聚乙炔類等化合物,對周圍的植物的種子萌發(fā)和幼苗生長產(chǎn)生抑制作用,從而使自身在生長發(fā)育過程中處于優(yōu)勢。6芒萁(Dicranopterispedata)里白科,芒萁屬,是我國熱帶、亞熱帶地區(qū)廣泛分布的酸性土指示植物,為亞熱帶丘陵灌木草叢的“識別種”或“標志種”植物。羅麗萍等8報道了芒萁地上部分的水提取液對刺覽(Amaranthusspinosus)、鱧腸(Ecliptaprostrata)、豚草、稗草、牛筋草(Eleusineindica)、狗尾草(Setariaviridis)和蘿卜、白菜的種子萌發(fā)具有極顯著的抑制作用。對
14、蒼耳(Xanthiumsibir2icum)和油菜、綠豆的種子萌發(fā)作用不明顯。實驗指出,在高濃度芒萁水提液的作用下,受體植物種子淀粉酶活性降低,導致可溶性糖含量降低,從而影響種子萌發(fā),幼苗及植物后期1994-2008ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved. HYPERLINK 24廣西熱帶農(nóng)業(yè)2005年第4期(總第99期)的生長發(fā)育。根系活力降低,其吸收能力必將減弱,致使植物生長失調(diào)。受抑制植物的NR也有降低,這將影響植物對氮素的吸收和蛋白質(zhì)合成等生理生化過程。芒萁的生化他感作用具有選擇性和階段性,在種子萌
15、發(fā)階段,芒萁水提液對多數(shù)雜草種子有極顯著抑制作用,對農(nóng)作物種子抑制作用不明顯,部分還有促進作用;而在出苗后的生長過程中,對植株普遍具有抑制作用。芒萁在天然群落中主要通過雨水或霧、露的淋洗將葉部液態(tài)分泌物通過淋溶過程釋放到土壤中,然后通過根系產(chǎn)生抑制作用。7蟛蜞菊Wedeliachinensis(Osb.)Merr.菊科植物蟛蜞菊屬,是華南常見的園林綠化草本植物。植被調(diào)查表明其群落中雜草很少,形成蟛蜞菊純?nèi)郝洹T紊?用瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)蟛蜞菊發(fā)現(xiàn)其分泌物對蘿卜和黃瓜的種子萌發(fā)和幼苗生長有生化他感作用。蟛蜞菊的組織抽提物對蘿卜、稗草、馬唐、萬苣和苜蓿(Medicagosati2va)5種植物幼苗生
16、長都有抑制作用。用蟛蜞菊作覆蓋物對馬唐、大畫眉草(Eragrostiscilianensis)和空心蓮子草(Alternantheraphiloxeroides)幼苗生長有抑制作用。還有關(guān)于蟛蜞菊對異型莎草(CyperusdifformisL.)、雀稗草(PaspalumthunbergiiKunth)、蓮子草(AlternantherasessilisDC.)、狗牙根草(CynodondactylonPers.)等雜草種子萌芽和生長的影響的報道,經(jīng)蟛蜞菊浸液處理的雜草種子發(fā)芽率降低,植株生長勢弱,葉子枯黃,植株抵抗力下降,出現(xiàn)病蟲害。可以在種植作物以前直接噴施蟛蜞菊的浸提液,抑制雜草發(fā)芽。純
17、化合物用質(zhì)譜、紅外、核磁共振方法鑒定為2個倍半萜內(nèi)酯。生物測定表明此2個化合物有很強的生化他感作用。從結(jié)構(gòu)上看,此化合物十六烯酸甲酯和十八烯酸甲酯結(jié)構(gòu)可能對今后設計新型除草劑結(jié)構(gòu)有所啟發(fā)。8勝紅薊(AgeratumconyzoidesL.)菊科勝紅薊屬,原產(chǎn)墨西哥,我國分布于長江流域以南各地,低山、丘陵及平原普遍生長。是華南地區(qū)的重要雜草,具有顯著的化感作用,揮發(fā)是勝紅薊地上部化感作用的主要途徑。韋琦等10利用色譜和波譜技術(shù)對勝紅薊地上部化感活性成分進行分離和化學結(jié)構(gòu)鑒定,得到2個化感作用物質(zhì):勝紅薊素(6,7-二甲氧基-2,2-二甲基色烯)和5,22-二烯-30-豆甾醇。對這2個作用物的化感
18、作用研究表明:勝紅薊素對受體幼苗生長有抑制作用,500mg/L處理對稗草生長達到完全抑制,對蘿卜的抑制率也高達90%;濃度降到25mg/L對稗草和蘿卜幼苗生長仍具有顯著的抑制作用。勝紅薊揮發(fā)油的化學成分由勝紅薊素及其類似物和單萜及倍半萜組成。對稗草、油菜、反枝莧都有一定程度的抑制??状谷A等11通過柱層析從勝紅薊揮發(fā)油中分離出早熟素I、早熟素II、子丁香烯、3,3-二甲基-5-特丁基茚酮、紅沒藥烯、乙酸葑醇酯等6種主要化感物質(zhì)(占揮發(fā)油總量的97%)。發(fā)現(xiàn)早熟素II和無活性的3個化感物質(zhì)結(jié)合,則表現(xiàn)出強烈的化感活性,說明勝紅薊各化感物質(zhì)之間存在著明顯的協(xié)同作用。9桉樹屬(EucalyptusLH
19、er)桃金娘科,原產(chǎn)地為澳洲大陸及附近島嶼,桉樹是一類重要的速生優(yōu)質(zhì)樹種,其樹皮、樹脂、葉、花、果、種子、木材等皆可綜合利用,經(jīng)濟效益潛力很大。桉樹葉中含有桉樹腦,1,8-桉樹腦(不少芳香植物的一種單萜成分)具有高度的植物毒性。有人認為桉樹腦是抑制植物的呼吸作用,還有報道說桉樹腦可以抑制植物的某個代謝過程。曾任森等12報道了窿緣桉(Eucalyptusexserta)和尾葉桉(E.urophylla)葉片在密閉容器中產(chǎn)生的揮發(fā)性物質(zhì)對蘿卜、萬苣、新銀合歡(Leucaenaleucocephala)和馬占相思(Acaiamangium)的幼苗生長有顯著抑制作用。當揮發(fā)油濃度達到0.2mL/皿時,
20、可完全抑制馬占相思的幼苗生長。窿緣桉和尾葉桉水抽提物對蘿卜、萬苣幼苗生長有顯著抑制作用,尾葉桉對新銀合歡幼苗生長有顯著抑制作用。陳秋波等13報道了剛果12號桉葉片釋放的揮發(fā)性物質(zhì)對綠豆、大豆、熱研?號柱花草(Stylosanthesguianensiscv.ReyanNo.2)與大翼豆Macroptiliumatropurpureum(DC)Urban4種受體植物種子的萌發(fā)有強烈的抑制作用。桉葉水抽提物與根際土壤水浸液對4種受體植物種子萌發(fā)與幼苗生長也有一定抑制作用。近來的研究表明,1,4-桉樹腦衍生物是一類具有良好除草活性的化合物。1,4-桉樹腦衍生物除草作用機理的研究動態(tài),表明1,4-桉樹
21、腦衍生物可作為天冬酰胺合成酶抑制劑。10核桃楸(Juglansmandshurica)胡桃科胡桃屬,東北、華北都有分布。植物之間,由于種類不同,習性各異,在其生長過程中,為了爭奪營養(yǎng)空間,從葉面或根系分泌出對其他植物有殺傷作用的有毒物質(zhì),致使其與鄰近的他種植物“結(jié)怨成傷、你死我活”。如胡桃的根系能分泌出一種叫胡桃醌的物質(zhì),在土壤中水解氧化后,其有極大的毒性,能造成松樹(Pinusmassoni2anaLamb.)、蘋果(MalusPumilaMill)、馬鈴薯(Solanumtubero2sumL.)、西紅柿及多種草木植物受害或致死。胡桃樹產(chǎn)生的5-羥萘醌對一些草本和木本植物有劇毒。從核桃楸樹
22、的青果皮中分離出胡桃醌(5-羥基,1,4-萘醌)。對核桃楸化感作用進行研究,旨在了解其分泌物胡桃醌對植物生長的影響及尋找作為除草劑先導化合物的可能性,為其作為植物保護劑在無公害蔬菜生產(chǎn)上的應用尋找理論和實踐依據(jù)。豬毛蒿、煙管頭草、核桃、飛機草、豚草、芒萁、蟛蜞菊、勝紅薊、桉樹、核桃楸這10種植物的化感作用是很明顯的,不論對共同生存的環(huán)境中的植物還是對研究中的作物和雜草的種子發(fā)芽、幼苗的生長都有一定的抑制作用。值得注意的1994-2008ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved. HYPERLINK 2005年
23、第4期(總第99期)廣西熱帶農(nóng)業(yè)25咖啡蔭蔽技術(shù)研究章傳政黎星輝朱世桂(江蘇省南京農(nóng)業(yè)大學,南京210095)小粒種咖啡(CoffeaarabicaL.)原產(chǎn)于非洲埃塞俄比亞的熱帶雨林地帶1,經(jīng)過系統(tǒng)發(fā)育,形成喜靜風、蔭蔽或半蔭、濕潤環(huán)境的習性,對強光比較敏感。但是由于種種原因,實際生產(chǎn)中常常采用大面積無遮蔭栽培,這就對小??Х鹊纳婧驼5墓夂闲阅軒砹颂魬?zhàn),光抑制減少植物的碳積累,嚴重的光抑制還可能影響到咖啡的生存2。我國對咖啡種植中的蔭蔽問題存在不同觀點,但大多數(shù)認為,適當蔭蔽有利于咖啡生長3。1蔭蔽的必要性和蔭蔽度潞江農(nóng)場曾在20世紀80年代推廣不種蔭蔽樹的咖啡栽培技術(shù),加大咖啡種植密
24、度,50007000株/hm2,有的甚至達到7500株/hm2以上,自然形成咖啡植株間的相互遮蔭,因此這項技術(shù)實際上是適應小??Х刃枋a蔽的一種栽培形式4。但是高密度的栽培因枝條相互蔭蔽,后期收成甚少。當種植密度增加到19000株/hm2時,第是這些植物的化感作用物質(zhì)對處理對象都有高抑低促的現(xiàn)象,以后的工作當中要加強不同濃度處理的影響和外界條件即光照、水分、溫度、濕度、土壤微生物等的影響方面的研究。從植物中提取的有效化感物質(zhì)直接應用于生產(chǎn)實際是不太現(xiàn)實的,因為化感物質(zhì)含量少,提取困難,獲得的量也非常少,直接施用成本也太高。因此,研究植物的化感作用,在提取、分離和鑒定化感物質(zhì)的基礎上,人工模擬合成
25、化感作用較強物質(zhì)或?qū)σ恍┗形镔|(zhì)進行結(jié)構(gòu)修飾,將有可能開發(fā)出新型除草劑。參考文獻1徐漢虹1植物精油對侖庫害蟲的活性與有效成分研究D1廣州:華南農(nóng)業(yè)大學,199212HABIGWH1Assaysfordifferentiationofglutathiones-S-transferaseA1WILLIAMBJ1MethodsofenzymologyC1NewYork:academicPress11981:3984053金海洙,金鍾熙1豬毛蒿對其他植物生長的他感作用J1煙臺大學學報(自然科學與工程版),2001,14(3):1801844郝雙紅,祝木金,馮俊濤,等135種菊科植物除草活性初步測定J1
26、西北農(nóng)林科技大學學報,2004,32(5):22265胥耀平,唐靜成,高錦明,等1核桃葉提取物化感作用的研究(I)J1林產(chǎn)化學與工業(yè),2003,23(3):45486凌冰,張茂新,孔垂華,等1飛機草揮發(fā)油的化學組成及其對植物、真菌和昆蟲生長的影響J1應用生態(tài)學報,2003,14(5):744-7467王大力,祝心如1豚草的化感作用研究J1生態(tài)學報,1996,16(1):11198羅麗萍,葛剛,陶勇,等1芒萁對幾種雜草和農(nóng)作物的化他感作用J1植物學通報,1996,16(5):5915979曾任森,林象聯(lián),駱世明,等1蟛蜞菊的生化他感作用及生化他感作用物的分離鑒定J1生態(tài)學報,16(1):2027
27、10韋琦,曾任森,孔垂華,等1勝紅薊地上部化感作用物的分離與鑒定J1植物生態(tài)學報,1997,21(4):36(36611孔垂華,徐濤,胡飛1勝紅薊化感物質(zhì)之間相互作用的研究J1植物生態(tài)學報,1998,22(5):40340812曾任森,李蓬為1窿緣桉和尾葉桉的化感作用研究J1華南農(nóng)業(yè)大學學報,1997,18(1):61013陳秋波,王真輝,林位夫,等1剛果12號桉對4種豆科植物的化感作用J1熱帶作物學報,2003,24(3):6872生物源除草劑研究與使用進展付穎葉非(東北農(nóng)業(yè)大學基礎部,哈爾濱150030)王常波(哈爾濱光宇蓄電池有限公司集團,哈爾濱150000)摘要綜述近幾年來國內(nèi)外生物源
28、除草劑研究及發(fā)展概況,介紹已商品化和具有開發(fā)潛力的微生物除草劑,同時指出目前生物源除草劑所面臨的問題。關(guān)鍵詞生物源除草劑綜述進入二十一世紀,除草劑仍將是同雜草作斗爭的有效武器,并將發(fā)揮更大的作用。隨著環(huán)境保護呼聲的日益提高,高毒性農(nóng)藥的大量使用對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)及生態(tài)環(huán)境造成的負面影響已引起世界范圍的廣泛關(guān)注。為了保護人類生存的環(huán)境和農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展,除草劑的研制與使用將嚴格受到環(huán)境和生態(tài)的制約。生物源除草劑以其資源豐富、毒性小、不破壞生態(tài)環(huán)境、殘留少、選擇性強、對非靶標生物和哺乳動物安全、環(huán)境兼容性好等優(yōu)點,正逐步引起人們的重視。生物除草劑是指在人們控制下施用殺滅雜草的人工培養(yǎng)繁殖的大劑量生物制劑。
29、它具有兩個顯著的特點:其一,是經(jīng)過人工大批量生產(chǎn)而獲得大量生物接種體;其二,淹沒式應用,以達到迅速感染,并在較短時間里殺滅雜草。不過,它像使用化學除草劑那樣被施用,即在產(chǎn)品的形式和應用技術(shù)上和化學除草劑類似,又區(qū)別于通常意義上的淹沒式釋放。因此,可以將生物除草劑更確切地定義為一類像化學除草劑一樣有效地被使用,防除特定雜草的活性生物產(chǎn)品。1生物除草劑的殺草機理與除草藥效生物除草劑的殺草機理涉及到對防除對象的侵染能力、侵染速度及對雜草的損害性等。侵染能力可以從侵染途徑(如直接穿透表皮或只經(jīng)氣孔)、侵染部位、侵入后在組織中的感染能力等反映。如某些菌可以侵染但不能在組織中感染發(fā)病。對雜草的損害常表現(xiàn)為
30、引起雜草嚴重病癥,如炭疽、枯萎、萎蔫、葉斑等,這些癥狀的發(fā)生,有時與真菌特異植物毒素的產(chǎn)生有關(guān)。真菌的侵害一開始和雜草生長處于相互拮抗和斗爭狀態(tài)。雜草的防御機制和生長會逐漸修復侵染物導致的損害,只有侵害速度高于雜草生長速度,才能控制住雜草。對于不同的生物除草劑其殺草機理不盡相同。如Cornexistin是一種來源于嗜糞擔子菌綱宛氏擬青霉的植物毒素,對單子葉和雙子葉雜草具有良好的除草活性。Cornexistin的作用機理可能是前體除草劑的作用機理,即它要被代謝為至少一種天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AAT)的同功酶的抑制劑。莎草素(cyperin)是一種天然產(chǎn)生的二苯醚類化合物,是由侵染香附子的殼二抱菌
31、、嗜糞真菌和侵染商陸的莖點霉菌產(chǎn)生的,它是一種中等活性的生長抑制劑和膜干擾劑,其在光照和黑暗條件下可引起葉綠素的缺失。Hydantocidin是吸水鏈霉菌的代謝產(chǎn)物,是一種強烈的腺苷酸琥珀酸合成酶抑制劑。AAL毒素是由侵染番茄的交鏈抱菌致病種產(chǎn)生的,其作用機理是抑制RNA的合成1。提高生物除草劑防效的途徑之一是復配使用低量的化學除草劑或植物生長調(diào)節(jié)劑。通常,低量化學除草劑的存在可以削弱雜草的防御機制,降低生長勢,有利于微生物的侵染,提高發(fā)病率,增強殺草效果。此外,通過基因工程或原生質(zhì)體融合技術(shù)將強致病基因?qū)氲姆绞剑纳粕锍輨┑乃幮А?生物源除草劑生物源除草劑按其來源可分為植物源除草劑、動
32、物源除草劑和微生物源除草劑。目前動物源除草劑未見報道,植物源除草劑報道的也很少,主要的研究與應用對象集中在微生物源除草劑上。2.1植物源除草劑黃花蒿素(artemisinin)是從黃花蒿中提取出來的一種倍半萜烯內(nèi)酯類化合物。它是一種潛在的植物生長抑制劑,對黃花蒿表現(xiàn)出自體毒性,但該植物通過將黃花蒿素分隔在細胞壁與葉和花表面上的腺毛狀體表皮之間的空隙內(nèi)而使自己免受毒害。農(nóng)藥第41卷第5期(2002)71,8-桉樹腦(不少芳香植物的一種單萜成分)具有高度的植物毒性。有人認為桉樹腦是抑制植物的呼吸作用,還有報道說桉樹腦可以抑制植物的某個代謝過程。在歐洲,一種合成的同類物質(zhì)環(huán)庚草醚已作為除草劑銷售。據(jù)
33、文獻報道,環(huán)庚草醚的作用機理是阻礙植物的分生細胞進行有絲分裂1。2.2微生物除草劑以微生物除草劑防除雜草是指利用植物病原微生物使目標雜草感病致死的方法。它包括傳統(tǒng)的微生物防治法與微生物除草劑應用兩方面。前者是指利用已有的方法,不通過培養(yǎng)繁殖等現(xiàn)代先進技術(shù),而只是在雜草上接種一種能自生自存和自然擴散的病原菌,不需要更多的處理。因此,又稱為古典性方法。該方法尤其適用于防治水生的、牧場或草原地區(qū)的雜草。而后者是指通過將大量的微生物象除草劑那樣使用后來全面殺死雜草的方法。該方法適用范圍廣、目標性強,是近年來發(fā)展較快的一種2。實際上,人們利用生物防除雜草已有近200年的歷史,但就生物除草劑來說,具有劃時
34、代標志意義的是1981年,DeVine在美國被登記注冊為第一個生物除草劑,它是棕櫚疫霉(Phytophthorapalmivora(Butl.)Butl.)制劑,用于柑橘園進行土壤處理防治莫倫藤(MorreniaodorataLindl.)。1972年,從佛羅里達州的Orange郡感病死亡的植株上首次分離得到該菌。將它用于田間試驗中,處理后10周,對莫倫藤防效達96%。在1978年和1980年使用過一次DeVine的桔園,到1986年仍保持95%100%的防效。繼之,Collego獲得登記,它是阿肯色州大學和Upjohn公司開發(fā)的一種合萌盤長抱狀剌盤抱合萌專化型(Colletotrichumg
35、loeosporioulesf.sp.aeschynomen)(簡寫為Cga),用于防除水稻及大豆田中的弗吉尼亞合萌。它的應用、貯藏和施用方式與一般苗后莖葉除草劑類似。Cga可以引起幼苗的炭疽病,感染其莖、葉柄和小葉。在小規(guī)模的田間試驗中,用Cga處理后幾周內(nèi),被接種的弗吉尼亞合萌幼苗100%被殺死。商品制劑大田常規(guī)使用防效在90%以上,在19821991年的10年內(nèi),每年美國稻田中Collego的使用面積為5千到1萬公頃。Biomal是由加拿大農(nóng)業(yè)調(diào)查研究所開發(fā)、PhilomBios公司于1992年商品化的一種長抱狀剌盤抱錦葵專化型(Colletortrichumgloeosporioide
36、sf.sp.malvae)(簡寫為Cgm)干粉劑,用于防治圓葉錦葵、苘麻。1982年從錦葵屬雜草圓葉錦葵(MalvarotundifoliaL.)的莖炭疽病斑上分離得到。該菌在可控環(huán)境條件下以2X106/ml的抱子液于30C以下、結(jié)露20小時以上的條件下噴灑接種于目標雜草,顯示了很好的效果,經(jīng)1720日雜草全部枯死。在田間試驗條件下,用60X106/ml的抱子濃度于施用后48小時內(nèi)降雨或結(jié)露1215小時,保持20C前后的冷涼天氣且在陰天的條件下防除雜草獲得成功。美國使用植物真菌炭疽病原平頭刺盤抱(Colletotrichumtruncatum(Schw.)Andr.etMoore)研制的真菌除
37、草劑用于水稻和大豆田間防除大麻,在其施入7天后大麻植株死亡。還用植物真菌(Colletotrichumgloeosporioidesf.sp.aeschynomene)研制的真菌除草劑,它是一種可濕性粉劑,含有15%活性真菌抱子和85%填充物,被用于水稻和大豆田間防除卷莖蓼,當在作物周圍的雜草小苗出現(xiàn)的時候噴灑地面,其生防效果高達95%。從土耳其引入美國的植物真菌縱溝柄銹菌(Pucciniacanaliculata(Schw.)Lagerh.)研制的真菌除草劑及其制品用于玉米、花生、蔬菜等一些作物的田間防除莎草,一次性施入的生物殺草效果可達90%98%。意大利從美國引入植物真菌酸模單胞銹菌(U
38、romycesrumicis(Schum.)研制的真菌除草劑用于谷物田間防除皺葉酸模、田薊、矢車菊等雜草有高效,還用植物真菌細極鏈格抱(Alternariatenuissima(Fr.)研制的真菌除草劑防除錦葵科的苘麻和青麻,生物防效可達90%95%。澳大利亞從地中海區(qū)域引入植物真菌Pucciniachondrillina研制的真菌除草劑,用于小麥田間防除粉苞苣菊科雜草的生防效果可達94%3。在60年代,我國已在實踐中使用“魯保一號”菟絲子盤長抱狀剌盤抱(又稱膠抱炭疽菌菟絲子專化型)(C.gloeosporoidesPenz.)的培養(yǎng)物防除大豆田菟絲子。“魯保一號”是世界上最早被應用于生產(chǎn)實踐
39、的生物除草劑之一。60年代中、后期,在江蘇、山東、安徽、陜西、寧夏等20個省區(qū)推廣面積達60萬公頃,防效穩(wěn)定在85%以上。目前,世界上很多科研機構(gòu)在研究微生物除草劑,只是商品化的很少。表1列舉了已商品化的微生物除草劑。由于微生物除草劑具有資源豐富、環(huán)境污染小8PESTICIDESVol141No15(2002)等化學除草劑所不具備的優(yōu)點,故有很大的開發(fā)利用的潛力,成為科研人員研究的熱點。目前,世界各國的研究機構(gòu)在相繼研究與開發(fā)出了一系列的具有除草活性的生物有機體,主要可分為真菌和細菌兩類,其他類型的微生物未見報道。真菌類有生物潛能的微生物主要集中有9個類型:盤抱菌屬(Colletotrichu
40、m)、鐮抱菌屬(Fusarium)、鏈格抱菌屬(Alternaria)和尾抱菌屬(Cercospora)、疫霉屬、柄銹菌屬(Puccinia)、葉黑粉菌屬(Entyloma)、殼單抱菌屬(Ascochyta)、核盤菌屬(Sclerotinia)。不過,總共有41個屬的真菌已經(jīng)或正在被考慮作為生物除草劑的候選。雖然首選的是那些可以引起致命性病害如炭疽病、萎蔫病、枯萎病及葉斑病的種群,但其選擇范圍仍是相當廣泛的。細菌類主要是根際細菌,有7個屬:假單抱菌屬(Pseudomonas)、腸桿菌屬(Enterobacter)、黃桿菌屬(Flavobacterium)、檸檬酸細菌屬(Citrobacer)、
41、無色桿菌屬(Achromobacter)、產(chǎn)堿桿菌屬(Alcalligenes)、黃單抱桿菌屬(Xanthomonas)4。表2列出了一些已報道的具有開發(fā)潛力的微生物除草劑。表1已商品化的微生物除草劑名稱防除對象棕櫚疫霉(Phytophthorapalmivora(Butl.)Butl.)致病菌株的厚垣抱子(DeVine)防除莫倫藤(MorreniaodorataLindl.)合萌盤長抱狀剌盤抱(Collego)水稻及大豆田中的弗吉尼亞合萌縱溝柄銹菌(Pucciniacanaliculata)(Bioseoge)油莎草決明鏈格抱(Casst)主要防除3種重要的豆科經(jīng)濟雜草,決明、望江南和美麗豬
42、屎豆錦葵盤長抱狀剌盤抱(Biomal)防除圓葉錦葵、苘麻銀葉菌(Biochon)野黑櫻和許多其他木本雜草鐮刀菌(Fusariumorobanches)菌絲體(制劑)煙草、莫合煙、大麻及向日葵上的寄生雜草列當魯保一號大豆菟絲子Camperico高爾夫球場草坪雜草F798制劑瓜列當磚紅鐮抱(MYX-1200)大豆和棉花田的豆科雜草雙丙氨膦葡萄、蘋果、白菜、葫蘆、桑科植物、杜鵑花、橡膠和其他作物田地內(nèi)雜草的防除Colletotrichumtruncatum大麻Colletotrichumgloeosporioidesf.sp.aeschynomene卷莖蓼Pucciniacanaliculata莎草
43、Microsphaeropsisamaranthi藜Phomaproboscis和Colletotrichumcapsici田旋花Uromycesrumicis皺葉酸模、田薊、矢車菊Alternariatenuissima苘麻和青麻Alternariaspp.南芥Colletotrichumgloeosporioidesf.sp.maivae錦葵銹菌(Pucciniachondrillina)麥田雜草燈心草粉苞苣(Chondrillajunce3生物源除草劑所面臨的問題目前,生物源除草劑得到了全面的開發(fā)和廣泛的應用,但其研究、開發(fā)和應用都還存在一些突出的問題和困難,困擾著生物源除草劑的發(fā)展。首
44、先是活性物質(zhì)不穩(wěn)定,制劑加工困難。生物源活性物質(zhì)往往因其品種和生長階段而異,甚至因地而異,各種生物各有其特點。因此,直接利用植物農(nóng)藥往往很難保證有效成分含量的穩(wěn)定性,如果沒有嚴格的分析檢測手段就不可能使產(chǎn)品含量得到保證。有些真菌不易繁殖、產(chǎn)抱量低、抱子活力差、加工成制劑后穩(wěn)定性差,或多代繁殖后致病力下降。微生物除草劑的制劑加工更困難。由于微生物都是顆粒物質(zhì),且多是不溶于水的,這種顆粒性和疏水性直接影響其制劑的濕潤性、分散性和懸浮性等物理性能5。其次是次生物質(zhì)化學成分的復雜性。極少植物只形成一種單一的次生物質(zhì),而往往是一組化學結(jié)構(gòu)類似的相關(guān)化合物。這為生物源除草劑的研究開發(fā)工作帶來許多困難,不僅
45、分離提取和化學成分的確定難度相當大,而且工作量也很大。再者,寄主單一性。生物源除草劑對目標生物的選擇性極強。如在一個復雜的農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)中往往是多種雜草并存,而生物源除草劑只能作用于一種或幾種靶標生物,很難達到理想效果,使其推廣及大規(guī)模生產(chǎn)受到限制。另外,環(huán)境因素影響防效。露水持續(xù)時間與濕度直接影響真菌抱子及繁殖體的萌發(fā)、入侵、抱子產(chǎn)農(nóng)藥第41卷第5期(2002)9生及再侵染,從而影響真菌除草劑的防效。如Col2lego開發(fā)成功的關(guān)鍵因素是使用的稻田及大豆田的高濕度條件。由于大多數(shù)真菌能在較寬的溫度范圍內(nèi)萌發(fā)和浸染,所以溫度比濕度對防效的影響小。但溫度影響入侵后病害的發(fā)展速度,一般溫度高時,發(fā)病
46、快防效高。土壤處理的生物除草劑效果還受土壤類型、質(zhì)地、水分、pH及土壤微生物種群的影響6。表2具有開發(fā)潛力的微生物除草劑表2具有開發(fā)潛力的微生物除草劑名稱防除對象C.coccodes(Wallr.)Huches苘麻平頭炭疽菌C.truncatum(Schwein)AudrusW.D.MooreS.exaltata瓜類炭疽菌XanthiumspinosumL.(刺蒼耳)柑橘褐腐疫毒(Phytophthoracitrophthora)MorreniaodorataLindl.(莫倫藤)AlternariacassiaeJurairkhun(一種交鏈抱屬真菌)大豆及花生田里的決明大交鏈抱(Alter
47、nariamacrospora)swpurredanoda蕨殼內(nèi)抱(AscochytapteridiumBres)蕨南瓜腐皮鐮抱(Fusariumsolanif.sp.cucurbitae)德克薩斯葫蘆核盤菌加拿大薊和TaraxacumolticinaleWeberinWiggerMicrosphaeropsisamaranthi莧屬雜草(Amaranthus)PhomaprobosxisHeing田旋花(ConvolvulusarvensisL.)羅得曼尼尾抱(Cercosporarodmanii)鳳眼藍(Eichhorniacrassipes)百日草鏈格抱(A.zinniae)蒼耳(Xan
48、thiumoccidentale)圓盤抱(C.orbiculare)剌蒼耳(X.spinosum)粗鏈格抱(Alternariacrassa)曼陀羅(Daturastramonium)柿子抱(Cephalosporiumdiospyri)柿屬雜草(Diospyrosspp.)飛機草尾抱(CercosporaeupatoriiorPhaeromulariaadenophora)和鏈格抱菌(Alternariaalternata)具腺澤蘭(Eupatoriumadenophorum)Colletotrichumgloeosporoidesf.sp.clidemiae毛單室藥草(Clidemiahi
49、rta)Exserohilummonoceras抱稗草Epicoccosorusnematosporus野荸薺(Eleochariskuroguwai)Mycoleptodiscusterrestris穗狀狐尾藻(Myriophyllumspicatum)高粱點霉千屈菜多抱銹菌(Phragmidiumviolaceum)黑莓小尾抱菌(Cercosporellaageratia)AgeratiaripariaBipolarissolaria稻田惡性雜草扁葉臂形草B.Sorghicola惡性雜草假高粱F.lateritium大豆、棉花和玉米田中的苘麻尖鐮抱(F.oxysporumf.sp.pern
50、iciosum)合歡(Albizzajulibrissin)F.Solani南瓜屬雜草(Cucurbitatexana)F.oxysporumf.sp.cannabii大麻(Cannabissativa)Colletotrichumorbicular蒼耳(Xanthiumstrumarium)CochliboluslunatusL2葉期稗草Epicoccosorusnemalosprous鐵荸薺拉賓黑粉菌(Ustilagorobenhorstiana)馬唐(Digtariasanguinalis)Colletotrichumtruncatum大麻Colletotrichumgloeospori
51、oidesf.sp.aeschynomene卷莖蓼Pucciniacanallcuiata莎草A.eichhorniae、cercosporapiaropi、C.rodmanii鳳眼藍(Eichhorniacrassipes)C.dematium圓葉牽牛(Ipomoeapurpurea)Dichotomophthoraindica馬齒莧(Portulacaoleracea)Bipolarissetariaepyriculariagriea牛筋草(Eleusineindica)Septoriatriticif.sp.avenae野燕麥(Avenafatua)(下轉(zhuǎn)第17頁)01PESTICIDE
52、SVol141No15(2002)進行分析,然后以質(zhì)量為橫坐標,相應的峰面積為縱坐標繪制曲線,繪制的標準曲線均為通過原點的直線,線性相關(guān)系數(shù)r=0.9999,試驗證明當異菌脲、多菌靈量在0.02mg/ml0.2mg/ml之間與其相應的峰面積之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。2.2方法精密度試驗對50%異多可濕性粉劑按上述操作條件進行多次重復測定,試驗表明該定量方法具有較好的精密度。其標準偏差均為0.18,變異系數(shù)分別為0166%、0.76%。2.3方法準確度試驗稱取數(shù)個已知含量的50%異多可濕性粉劑樣品,加入一定量的異菌脲、多菌靈標準品,按本方法分別測定其中異菌脲、多菌靈總質(zhì)量并計算回收率,得到該方法在
53、50%異多可濕性粉劑中異菌脲、多菌靈平均回收率分別為100.0%100.4%,具有良好的準確度。2.4操作條件的確立2.4.1檢測波長的確定根據(jù)異菌脲、多菌靈的紫外光譜圖可以看出,異菌脲、多菌靈在215nm附近,均有較大的吸收且單位質(zhì)量吸光度相近,故檢測波長選定在215nm。2.4.2流動相的選擇我們首先摸索用甲醇+水作流動相,發(fā)現(xiàn)采用不同比例時,多菌靈峰形均明顯拖尾且譜峰比較寬,多菌靈在弱酸、弱堿流動相中均能得到較好的峰型。故本方法采用國際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會(CIPAC)分析異菌脲采用的流動相甲醇+乙酸-乙酸鈉緩沖溶液,實驗發(fā)現(xiàn)在甲醇:乙酸-乙酸鈉緩沖溶液=60:40時,多菌靈、異菌脲均能得
54、到良好的分離,且保留時間適中。2.4.3試樣溶液的選擇多菌靈在水中和甲醇中溶解度都比較小,其在酸中可溶解形成鹽,試驗發(fā)現(xiàn)30ml冰乙酸可溶解0.5g多菌靈,溶解后形成的鹽在流動相中不析出。異菌脲在甲醇中有較大的溶解度,本方法配制樣品溶液時加入10ml冰乙酸、10ml甲醇振搖使異菌脲、多菌靈溶解,用甲醇溶液稀釋至刻度。2.5結(jié)論本標準的分析方法采用了國際上先進、可排除雜質(zhì)干擾的高效液相色譜法,它不僅可以滿足工廠控制生產(chǎn)的需要,而且可以作為各級質(zhì)量監(jiān)督部門的檢測依據(jù)。TheAnalysisMethodofCarbendazimIprodioneWPbyHPLCMeiBaoguietal.(Shen
55、yangResearchInstituteofChemicalIndustry,Shenyang110021)Abstract:ThequantitativeanalysisofcarbendazimiprodioneWPbyHPLCwithC18columnatUV215nmwasintroduced.Theresultsshowedthatstandarddeviation,variationcoefficientandaveragerecov2erywas0.18,99.1%10018%and0.76%,respectively,fastlyandaccurately.Keywords:
56、carbendazim,iprodione,HPLC,analysis.收稿日期:200114117(上接第10頁)隨著在世界范圍內(nèi)對雜草天敵資源調(diào)查的廣泛深入的開展,人們將會更深刻地了解天敵生物對雜草侵染和控制的機理,將有更多的材料可供選擇,用于發(fā)展高效、對環(huán)境安全的生物除草劑。我國幅員遼闊,天敵資源豐富,大力開展生物源除草劑及其應用技術(shù)的研究,有著廣闊的發(fā)展前途。參考文獻1歐曉明,唐德秀1作為新除草劑作用機理的先導物的天然產(chǎn)物.農(nóng)藥譯叢,1998,3(20):692羅小勇1微生物除草劑的發(fā)展現(xiàn)狀與展望1甘肅科學學報,1995,3(27):54603王拱原,葉琪銘.鐮刀菌在生物防治中的應用.
57、生物防治通報,1990,6(2):80844陳勇強等1國外微生物除草劑的研究及應用現(xiàn)狀1天津農(nóng)業(yè)科學,1998,2(4):595申繼忠1微生物農(nóng)藥劑型加工研究進展1中國生物防治,1998,14(3):1291336李揚漢等1有關(guān)真菌除草劑研究的進展1生物防治通報,1994,10(2):3539TheProgressofReasearchandApplicationonBio-herbicideFuYingetal.(NortheastAgricultureUniversity,Harbin150030)Abstract:Thispaperreviewstheprogressofreasearc
58、handapplicationonbioherbicidesinrecentyears.Somecommercialandpotentialmicrobialherbicideswereintroduced.Keywords:bioherbicide,植物源除草劑研究新進展張愛芹,王景順(安陽工學院生物與食品工程學院,河南安陽455000)摘要:植物源除草劑是除草劑發(fā)展的一個方向。目前,植物體內(nèi)有除草活性的物質(zhì)主要是植物的次生代謝物質(zhì),如生物堿、萜類、酮類等,部分植物成分以及轉(zhuǎn)抗除草劑的基因植物。本文介紹了以上種類及其應用狀況和研究的新進展。關(guān)鍵詞:植物源除草劑;次生代謝物質(zhì);基因中圖分類號:
59、S48214+9文獻標識碼:A文章編號:10021302(2006)05005703(上接第56頁)式產(chǎn)在棉葉反面,一個卵塊通常能孵化出100200頭幼蟲,3齡前的幼蟲在田間呈聚集分布,到3齡才分散危害,因此田間普查幼蟲數(shù)并不能正確地衡量斜紋夜蛾在棉花上的危害程度。到目前為止,在棉花上只對棉鈴蟲、紅鈴蟲、蚜蟲等少數(shù)幾種害蟲建立了一套公認的、標準的抗蟲性鑒定方法,以及相應的棉花品種抗蟲性分極標準。雖然本研究提出了在田間自然蟲源條件下,在斜紋夜蛾的危害高峰期分期多次目測估計棉花葉片受損率作為抗斜紋夜蛾的鑒定方法,但目測鑒定實際操作時會有人為誤差,因此,如何建立更科學的抗性分級標準,是今后值得研究的
60、問題。參考文獻:1柏立新,束春娥,郭志剛,等.抗棉鈴蟲棉花新品系的室內(nèi)和田間抗蟲性鑒定與綜合評估J.江蘇農(nóng)業(yè)科學,2001(6):26-29.2柏立新,陳志石,肖留斌等.抗蟲棉新品系對棉鈴蟲抗性水平的綜合量化評估J.江蘇農(nóng)業(yè)科學,2006(3):41-43.3柏立新,束春娥,張龍娃,等.棉花新品種(系)抗棉鈴蟲鑒定與綜合量化評估J.中國棉花,2004,31(1):19-22.4蓋鈞鎰,崔章林.大豆抗食葉性害蟲育種的鑒定方法與標準J.作物學報,1997,23(4):400-407.5孫祖東,蓋鈞鎰.大豆品種對斜紋夜蛾的抗性機制初探J植物保護學報,1999,26(4):329-332.6曾竹生,張
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