臨床微生物質(zhì)譜鑒定技術(shù)及其應(yīng)用初探

1、檢驗(yàn)科 微生物室質(zhì)譜技術(shù)及其應(yīng)用初探現(xiàn)代感染性疾病和臨床微生物檢測(cè)現(xiàn)狀耐藥菌株增多疑難菌株增多現(xiàn)代感染性疾病新特點(diǎn)條件致病菌增多人員少、鑒定速度較慢感染菌種類增多臨床微生物當(dāng)前現(xiàn)狀病原生長(zhǎng)時(shí)間報(bào)告時(shí)間需氧菌24h3-4個(gè)工作日厭氧菌48h酵母菌2-5天5-7個(gè)工作日絲狀真菌2-5天 第一天 第二天 第三-四天分純培養(yǎng)常規(guī)微生物檢驗(yàn)遇到的困惑：呼吸道、腸道標(biāo)本的細(xì)菌種類繁多，常規(guī)的鑒定成本高或者操作麻煩， 容易漏掉或者忽視某些細(xì)菌。厭氧菌、彎曲菌、分枝桿菌和真菌：培養(yǎng)的難點(diǎn)，鑒定的死角，技術(shù)上不好掌握或者成本高、時(shí)間長(zhǎng)，難以實(shí)施。血培養(yǎng)的分級(jí)報(bào)告制度：存在很多變數(shù)，使得初次報(bào)告的結(jié)果可靠性 得不

2、到臨床的認(rèn)可。（比如：直接革蘭染色涂片，初步能估計(jì)細(xì)菌大類，但是無(wú)法確切到種。比如：L型菌無(wú)法確定其革蘭染色性。）操作方便的，成本便宜的。不僅是實(shí)驗(yàn)室要求的，更是臨床迫切需要的。將實(shí)驗(yàn)室人員從一些技術(shù)要求較低的、能由儀器完成的工作中解脫出來(lái)，提高標(biāo)本處理效率，縮短報(bào)告時(shí)間。 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化 MALDI-TOF革命性基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)MALDI-TOF MS蛋白質(zhì)指紋特征梅里埃VITEK MS的數(shù)據(jù)庫(kù)包含IVD1046種菌和RUO1500種菌的圖譜。挑取部分菌落點(diǎn)樣至靶板生成圖譜搜庫(kù)鑒定質(zhì)譜檢測(cè)流程MALDI TOF檢測(cè)加基質(zhì)液 質(zhì)譜作為一項(xiàng)細(xì)

3、菌鑒定領(lǐng)域的革新技術(shù)，與現(xiàn)有傳統(tǒng)的鑒定診斷技術(shù)相比，具有操作簡(jiǎn)單、快速、通量高、靈敏度高、準(zhǔn)確度好、試劑耗品非常經(jīng)濟(jì)等優(yōu)勢(shì)。準(zhǔn)確度時(shí)間（包括操作）成本MALDI-TOF技術(shù)90%20min20元常規(guī)方法80%2448 h50元 質(zhì)譜鑒定技術(shù)的臨床價(jià)值縮短了常規(guī)微生物培養(yǎng)鑒定時(shí)間。運(yùn)用質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)則可縮短至少1天的鑒定時(shí)間，為臨床救治危急重癥患者贏得更多時(shí)間。而有研究證實(shí)，在重癥監(jiān)護(hù)室（ICU）臨床治療中，抗生素如果晚一小時(shí)準(zhǔn)確治療，病人存活率下降8%。Impact of Rapid Organism Identification via Matrix-Assisted Laser Desorp

4、tion/IonizationTime-of-Flight Combined With Antimicrobial Stewardship Team Intervention in Adult Patients With Bacteremia and Candidemia屆由質(zhì)譜快速分析及快速藥敏介入臨床抗生素管理小組執(zhí)行成人病患菌血癥及霉菌血癥的影響Clinical Infectious Diseases 2013;57(9):123745快速鑒定質(zhì)譜結(jié)合藥敏報(bào)告減少鑒定時(shí)間并幫助臨床執(zhí)行最合適抗生素用藥30 天內(nèi)死亡率減少6.6%;ICU 住院天數(shù)減少6.6天;對(duì)癥用藥時(shí)間縮短10個(gè)小時(shí)

5、鑒定/藥敏最終報(bào)告時(shí)間提早 29小時(shí); 84hr vs 55.9hr有效用藥時(shí)間提早十個(gè)小時(shí): 30.1hr vs 20.4 hr正確使用廣效抗生素選擇提早43小時(shí) ; 90.3hr vs 47.3 hr501位臨床病患中, 快速報(bào)告族群30天內(nèi)死亡率減少6.6%膿毒癥復(fù)發(fā)率減少3.9% ; 5.9% vs 2.0%對(duì)少見(jiàn)菌、厭氧菌、部分真菌、奴卡菌等非常難鑒定菌的檢測(cè)準(zhǔn)確度和速度將大大提高。少見(jiàn)菌往往有其獨(dú)特的藥物選擇，比如布魯菌屬首選四環(huán)素類、奴卡菌首選復(fù)方新諾明等等。克柔假絲酵母菌對(duì)氟康唑天然耐藥，熱帶假絲酵母菌對(duì)唑類藥物的耐藥性也有上升。 質(zhì)譜鑒定技術(shù)的臨床價(jià)值產(chǎn)單核李斯特菌4度可生長(zhǎng)

6、，易污染食物和乳制品，對(duì)人類可引起原發(fā)性腦膜炎、腦炎、敗血癥。對(duì)兒科常用藥物頭孢菌素天然耐藥，對(duì)氨芐西林敏感。因此，實(shí)驗(yàn)室一旦發(fā)現(xiàn)疑似產(chǎn)單核李斯特菌可能，就要快速給予臨床相關(guān)信息。 梅里埃細(xì)菌鑒定藥敏分析儀 給出兩個(gè)鑒定選項(xiàng)（產(chǎn)單核、無(wú)害李斯特菌），VITEK 2 COMPACT 需要補(bǔ)充CAMP試驗(yàn)結(jié)果（24小時(shí)孵育）質(zhì)譜鑒定 直接給出99.9%的鑒定結(jié)果 產(chǎn)單核李斯特菌微小單胞菌對(duì)少見(jiàn)菌、厭氧菌、部分真菌、奴卡菌等非常難鑒定菌的檢測(cè)準(zhǔn)確度和速度將大大提高。少見(jiàn)菌往往有其獨(dú)特的藥物選擇，比如布魯菌屬首選四環(huán)素類、奴卡菌首選復(fù)方新諾明等等?？巳峒俳z酵母菌對(duì)氟康唑天然耐藥，熱帶假絲酵母菌對(duì)唑類藥物的耐藥性也有上升。 質(zhì)譜鑒定技術(shù)的臨床價(jià)值 質(zhì)譜鑒定技術(shù)的臨床價(jià)值 使血培養(yǎng)的分級(jí)報(bào)告更準(zhǔn)確 臨床醫(yī)師可根據(jù)以往的耐藥監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行用藥選擇MALDI-TOF MS對(duì)血培養(yǎng)陽(yáng)性樣本的直接檢測(cè)優(yōu)