金絲桃素對ＨｅｐＧ２ 細胞的體外殺傷效應(yīng)的研究

1、金絲桃素對 細胞的體外殺傷效應(yīng)的研究王曉利張俊松劉金釧楊汝德【摘要】目的研究金絲桃素及貫葉金絲桃中金絲桃素提取物對人肝癌細胞株的體外殺傷效應(yīng)。要領(lǐng)通過測定胞內(nèi)熒光強度以確定細胞對金絲桃素的汲取，用顯微鏡不雅察和法研究金絲桃素及其提取物對細胞的生長按捺作用。結(jié)果光活化的金絲桃素對細胞有明顯的體外殺傷效應(yīng)，其按捺細胞生長的本領(lǐng)與金絲桃素的濃度、給藥與光照的時間隔斷以及光照能量嚴密相干。結(jié)論金絲桃素及其提取物能顯著按捺細胞的生長，預示金絲桃素及其提取物在癌癥治療中有精良的開拓研究遠景?！娟P(guān)鍵詞】金絲桃素光動力治療肝癌發(fā)光二極管Abstrat：bjetiveHyperiuperfratuethdsTa

2、sinvestigatedinHepG2ells，htheResultsthehadkilling，effetsereith，nlusinthe.要領(lǐng)細胞造就細胞造就于含小牛血清、青霉素和鏈霉素的造就液中，及飽和濕度孵箱內(nèi)單層貼壁生長。細胞對金絲桃素的汲取實行對數(shù)生恒久的細胞經(jīng)消化制成細胞懸液，接種于孔細胞造就板上。造就至對數(shù)生恒久后，吸去舊造就液，參加含的造就液，終濃度為，使各實行組細胞別離與共孵育，吸去造就液，漂洗次，用型檢測儀在，條件下測細胞內(nèi)熒光強度。步伐在生長狀態(tài)精良的細胞中，參加差異濃度濃度以計，預實行表白所用濃度在非光照環(huán)境下對細胞無毒性的提取物溶液或溶液，比擬組不加溶液，參加相

3、應(yīng)體積的，別的處置懲罰方法與實行組雷同。避光孵育一按時間后，將波長為的黃色光源置于造就板正上方，用型光纖功率計測得光源功率密度約，別離照耀，積聚能量為，。后避光造就后，舉行細胞形態(tài)不雅察，并用法測定細胞生長按捺環(huán)境。法測定體外細胞毒作用將待檢測的細胞棄去造就液，參加含的無血清造就液，繼承造就后，吸出各孔液體，參加含的異丙醇，振蕩溶解，測定波長下的各孔吸光值D，盤算細胞的生長按捺率：生長按捺率實行組均勻D值比擬組均勻D值繪制濃度生長按捺率曲線。統(tǒng)計學闡發(fā)用統(tǒng)計軟件舉行統(tǒng)計闡發(fā)。結(jié)果細胞對金絲桃素的汲取曲線圖為細胞對的汲取曲線。表現(xiàn)了給藥后差異時間細胞內(nèi)的熒光強度，測定了相對熒光值，其反響了細胞攝

4、入的量，可見胞內(nèi)的含量在給藥后趨于飽和。圖1HepG2細胞對HY的汲取曲線略細胞的形態(tài)學變革正常環(huán)境下的細胞呈梭形或多角形，外表清楚，生長茂盛，偶見漂泊細胞。當參加差異濃度的溶液并加以得當?shù)墓庹蘸?，細胞可產(chǎn)生差異的形態(tài)變革，其結(jié)果與的濃度及光照時間呈顯著的正相干性。以光照為例，當濃度，細胞的殞命情勢重要為凋亡，表示為細胞從瓶壁上脫落，漸漸變?yōu)閳A形，懸浮細胞增多，胞質(zhì)濃縮，細胞體變?。欢敐舛葹闀r，細胞的殞命情勢重要為直接壞死，表示為細胞膜通透性增高，細胞腫脹、細胞器變形或脹大，末了細胞溶解破碎。及提取物的細胞毒作用濃度差異的提取物和給藥后差異時間光照的細胞毒作用圖為別離為差異濃度的提取物在給藥

5、后和光照的細胞生長按捺曲線。的濃度別離為，。結(jié)果表白，提取物的濃度與細胞生長按捺率根本呈正相干，且給藥后光照比給藥后光照的生長按捺結(jié)果好，P，具有明顯差異。圖2給藥后孵育差異時間后光照60in的按捺曲線略濃度差異的提取物在差異光照時間下的細胞毒作用圖為給藥后別離光照，的細胞生長按捺曲線。的濃度別離為，。結(jié)果表白，的光動活性與的濃度及光照的時間根本呈正相干性。與比擬組比力，P值均，具有明顯差異。圖3給藥后6h光照差異時間的按捺曲線略與提取物的細胞毒作用比力圖比力了與提取物對細胞的按捺作用。的濃度別離為，。結(jié)果表白，提取物具有更大的細胞生長按捺活性，P，具有明顯差異。圖4HY和HY提取物按捺Hep

6、G2細胞生長的活性比力略討論腫瘤的療法重要是基于光敏劑對腫瘤細胞與正常細胞有差異的親和性，使光敏劑的光生化反響選擇性地在腫瘤構(gòu)造內(nèi)舉行，從而起到殺死腫瘤細胞的作用。是一種研究中的新型光敏劑，在種種腫瘤治療的研究中均表示出了精良的光動活性，是一種很有潛力的新型抗癌藥物。本實行以金絲桃素和貫葉金絲桃中提取的提取物為光敏劑，研究了其對肝癌細胞的體外殺傷效應(yīng)。實行證實，極易在細胞內(nèi)積聚，在熒光顯微鏡下可見猛烈的橘赤色熒光，其熒光強度隨細胞內(nèi)量的增長而增長，給藥后即可到達飽和。給藥后比給藥后舉行的結(jié)果顯著要好，說明的抗腫瘤結(jié)果顯然與細胞內(nèi)的積聚量有關(guān)，也預示著歷程產(chǎn)生的活性物質(zhì)，如活性氧系的壽命非常短暫

7、，光照時只有已進入細胞內(nèi)的才氣對腫瘤細胞產(chǎn)生細胞毒作用。對腫瘤細胞的細胞毒作用有誘導凋亡與壞死兩種形式，這兩種形式的轉(zhuǎn)化是必然濃度的和光照能量等多種因素彼此作用的結(jié)果，一樣平常在較低的濃度和光照能量作用下以誘導凋亡為主。本實行還將提取物與舉行了藥效比力，結(jié)果表現(xiàn)提取物具有更好的抗腫瘤作用，預示著提取物中大概另有別的身分與一起協(xié)同發(fā)揮了抗腫瘤的成果，這與浩繁文獻報道同等。由于金絲桃素的提取純化工藝龐大，高純度金絲桃素成品非常昂貴，大大限定了其在臨床上的應(yīng)用。從現(xiàn)有的實行結(jié)果看，在舉行腫瘤的光動力治療時，大概并不必要高純度的金絲桃素作光敏劑，僅用提取物就能到達療效，這將大大低落治療本錢，產(chǎn)生宏大的

8、社會效應(yīng)。光源也是制約療法普及應(yīng)用的另一大因素。如今治療中一樣平常都接納激光器作為光源，但激光器如今可供選擇的波長有限，不易與所用光敏劑的最大汲取波長相共同，并且激光光束微小，不適互助大面積的照耀，且治療本錢較高，限定了療法的應(yīng)用。光源是一種具有遼闊生長遠景的新型光源，其光譜峰的半寬最窄已可到達十幾納米以下，可選擇的波長范疇已覆蓋了整個可見光區(qū)，其在發(fā)光強度、波長與代價方面與激光器比擬表示出更多上風?，F(xiàn)有的可以滿意一樣平常的臨床低強度治療的必要。美國研究職員用光源舉行腦腫瘤光動力治療的臨床試驗也獲得了精良結(jié)果，所用光源的機器性能比激光和其他光源更為可靠。本實行所接納的黃色光源，主波長為，與金絲桃素的最大汲取波長恰好符合，用該光源舉行金絲桃素的體外抗腫瘤實行獲得了精良的結(jié)果?？梢?，是一種很有潛力交換激光器舉行腫瘤光動力治療的光源。肝癌是發(fā)病率和殞命率都極高的癌癥，傳統(tǒng)治療要領(lǐng)如手術(shù)切除、放療及化療等不但使病人遭受宏大的身心創(chuàng)傷，且預后較