Skp2與P27kip1在鼻咽癌組織中的表達及意義

1、Skp2與P27kip1在鼻咽癌組織中的表達及意義【關(guān)鍵詞】鼻咽腫瘤Skp2蛋白P27kip1蛋白細胞周期KEYRDSNaspharyngealarina;Skp2，prtein;P27kip1，prtein;ellyle鼻咽癌（naspharyngealarina,NP）為我國最常見的惡性腫瘤之一。多見于我國廣東、廣西等省，其發(fā)病率據(jù)國內(nèi)觀察為耳鼻咽喉科惡性腫瘤之首1，但它的發(fā)病機制尚未明確。腫瘤發(fā)生的共同特征是細胞周期調(diào)控機制的紊亂，導(dǎo)致細胞的失控性生長2。調(diào)控細胞周期的核心機制是由細胞周期蛋白（ylin），周期蛋白依賴性激酶（ylindependentkinase,DK）,周期蛋白依賴性

2、激酶抑制劑（ylindependentkinaseinhinitrs,KI）構(gòu)成的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。目前SKP2、P27kip1在各種腫瘤中的表達及其兩者的相關(guān)性已成為研究熱點，如淋巴瘤、消化系統(tǒng)腫瘤、肺癌、口腔鱗癌等方面，但其與鼻咽癌的關(guān)系國內(nèi)外均未見有關(guān)報道。本課題旨在探討SKP2和P27kip1在鼻咽癌組織中的表達和意義，進一步研究鼻咽癌的生物學(xué)特性，了解其發(fā)病機制，或能有一定的理論價值和臨床意義。1材料與方法1.1實驗對象收集貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2003年9月至2005年9月門診耳鼻喉科纖維鏡檢查鼻咽部非角化性癌活檢組織及貴醫(yī)附院病理科部分存檔鼻咽部非角化性癌活檢組織蠟塊共39例，慢性鼻咽炎活檢

3、標本24例。鼻咽癌組39例中，男25例，女14例；3272歲，按照鼻咽癌92TN分期標準（福州）分期：期6例，期8例，期10例，期15例。39例鼻咽癌患者均未行過放化療，其中28例伴有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，15例伴有顱神經(jīng)侵犯癥狀。慢性鼻咽炎組24例中，男10例，女14例，2568歲。所有標本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，HE染色復(fù)檢確診。兩組患者的年齡、性別差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。實驗步驟均按試劑盒說明書進行，嚴格控制實驗條件，每組實驗均設(shè)陽性對照和用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照，每組均作常規(guī)HE染色。1.3結(jié)果判定Skp2、P27kip1均以細胞核或細胞核伴胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性

4、細胞，而只有胞漿出現(xiàn)棕黃色為非特異性染色。鼻咽癌組織以癌細胞核著色為陽性細胞；慢性鼻咽炎組織以黏膜上皮細胞核著色為陽性細胞。取染色良好（陽性細胞染色清晰，背景染色低）的組織切片，用半定量法4行結(jié)果判定。A按陽性細胞比例評分：在高倍鏡下（400）隨機選取5個陽性細胞數(shù)多的視野計數(shù)，計數(shù)陽性細胞及總細胞數(shù)，求出陽性細胞所占總細胞數(shù)的百分比，取其平均值，并計分：無細胞染色為0分,陽性細胞25%為1分，陽性細胞占26%50%為2分，陽性細胞占51%75%為3分，陽性細胞75%為4分。B按染色強度計分：不染色為0分,呈淡黃色為1分,呈黃色為2分,呈棕黃色為3分。最后以AB的值劃定標準：3分可判為陽性，3

5、5分為（），68分為（2結(jié)果2.1Skp2和P27kip1蛋白在鼻咽癌和慢性鼻咽炎組織中的表達情況Skp2蛋白在鼻咽癌癌細胞核部位染色陽性，細胞漿中無表達，陽性細胞彌漫散布于鼻咽部黏膜上皮層及黏膜下，癌灶處癌細胞表現(xiàn)為Skp2蛋白染色強陽性（圖1），而在慢性鼻咽炎組織中陽性染色較鼻咽癌組明顯減少（圖2）。39例鼻咽癌組織中Skp2蛋白總陽性表達率為71.79%，強陽性表達率為56.41%；24例慢性鼻咽炎組織中Skp2蛋白總陽性表達率為41.67%，強陽性表達率為25%，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(2=5.63，P0.05)。鼻咽癌組織中P27kip1蛋白表達明顯減少（圖3），P27kip1蛋白在慢

6、性鼻咽炎黏膜上皮中分布未見明顯特異性。39例鼻咽癌組織P27kip1蛋白總陽性表達率為35.90%，強陽性表達率為17.95%，顯著低于其在慢性鼻咽炎的總陽性表達率79.17%，強陽性表達率58.33%（2=11.15,P0.01），見表。+P27kip1-+11691325743慢性鼻咽炎14445682.2Skp2和P27kip1蛋白表達與鼻咽癌多項臨床病理特征的關(guān)系Skp2和P27kip1的蛋白表達與鼻咽癌的臨床分期、顱神經(jīng)侵犯有相關(guān)性（P0.05），與年齡、性別、鼻咽癌的分化程度、頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性（P0.05），見表2。2.3鼻咽癌中Skp2與P27kip1蛋白表達的關(guān)系經(jīng)Spea

7、ran等級相關(guān)分析，在鼻咽癌中Skp2與P27kip1蛋白表達呈明顯的負相關(guān)（rs=-0.373,P=0.019）。nSkp2+P值P27kip1+P值年齡60歲2315(65.22)0.1640.18660歲1613(81.25)性別男2517(68.00)0.2350.215女1411(78.57)組織學(xué)分類低分化3627(75.00)0.16913(36.11)0.46中高分化臨床分期、期140.0260.035、期2521(84.00)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移L(+)2822(78.57)0.10410(45.45)0.287L(-)顱神經(jīng)侵犯N(+)14(93.33)0.0180.019N(-)

8、2414(58.33)12(50.00)3討論細胞周期的運行受多種因素調(diào)控，有兩個主要的調(diào)控點：一個處于G1/S轉(zhuǎn)折點G1期檢測點，是控制細胞進入S期的控制點；另一個處于G2/轉(zhuǎn)折點G2期檢測點。在G1期早期，ylinD和DK4,6復(fù)合物發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用，進入G1期中后期ylinE和DK2復(fù)合物進行正向調(diào)節(jié)5。本研究發(fā)現(xiàn)，P27kip1在慢性鼻咽炎組織中的陽性率為79.17%，而在鼻咽癌組織中的陽性率為35.90，明顯低于慢性鼻咽炎組，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。此結(jié)果支持體外細胞株檢查幾種即在靜止期細胞中，P27kip1呈高水平表達，隨著增生活性的增加，P27kip1蛋白水平下降。提

9、示在鼻咽癌的發(fā)生中P27kip1蛋白的減少起重要作用。對不同臨床特征的鼻咽癌患者比較P27kip1表達，在組織學(xué)分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移上未發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。但研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，P27kip1蛋白陽性表達率在臨床分期、期及有顱神經(jīng)侵犯組均明顯低于、期和無顱神經(jīng)侵犯組(P0.05)，提示P27kip1與腫瘤臨床分期、顱神經(jīng)侵犯有顯著相關(guān)性，可能在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。本研究中P27kip1蛋白表達與鼻咽癌組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。而iaparrn等9分析P27kip1蛋白在一系列不同階段人類結(jié)腸癌標本中的表達，發(fā)現(xiàn)P27kip1的表達與腫瘤分級之間有顯著的關(guān)系，

10、高中分化的腫瘤有P27kip1的高表達，而低分化的腫瘤顯示低表達；Tan等10分析了202例T1a,T1b浸潤性乳腺癌，發(fā)現(xiàn)P27kip1表達水平和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與乳腺癌生存率顯著相關(guān)。這可能是因為鼻咽癌本身的病理特點98%屬低分化鱗癌，本實驗收集的標本中絕大多數(shù)亦為低分化鱗癌，中高分化組樣本含量較小，來院就診的病例大多屬中晚期，已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例較多，本研究所收集的淋巴結(jié)陰性病例組樣本含量較校目前，P27kip1蛋白已被證明通過Skp2依賴性泛素-蛋白酶體途徑降解。本研究發(fā)現(xiàn)，Skp2蛋白陽性表達率與鼻咽癌臨床分期、顱神經(jīng)侵犯呈明顯的相關(guān)性(P0.05)，提示Skp2可能在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中

11、起重要作用，檢測其蛋白表達對判斷鼻咽癌的臨床分期及惡性程度有一定意義。與P27kip1相同，Skp2蛋白表達與鼻咽癌的組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。本研究結(jié)果顯示，在鼻咽癌中Skp2蛋白和P27kip1蛋白表達呈顯著負相關(guān)(P0.05)，與眾多的文獻報道一致。提示，(1)鼻咽癌中P27kip1低表達可能產(chǎn)生于Skp2高表達介導(dǎo)的P27kip1降解升高。由此可以推測，在鼻咽癌患者的鼻咽黏膜被覆上皮細胞中，Skp2過表達通過加速對P27kip1的泛素化降解，使細胞異常增殖不能得到有效抑制，導(dǎo)致細胞過度增殖，分化程度降低，最終發(fā)生癌變，此過程可能為鼻咽癌分子發(fā)病機制之一，可為鼻咽癌的診治提供一定的理論依據(jù)；(2)Skp2有可能成為鼻咽癌治療的新靶點。Skp2