Skp2與P27kip1在鼻咽癌組織中的表達(dá)及意義

1、Skp2與P27kip1在鼻咽癌組織中的表達(dá)及意義【關(guān)鍵詞】鼻咽腫瘤Skp2蛋白P27kip1蛋白細(xì)胞周期KEYRDSNaspharyngealarina;Skp2，prtein;P27kip1，prtein;ellyle鼻咽癌（naspharyngealarina,NP）為我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。多見(jiàn)于我國(guó)廣東、廣西等省，其發(fā)病率據(jù)國(guó)內(nèi)觀察為耳鼻咽喉科惡性腫瘤之首1，但它的發(fā)病機(jī)制尚未明確。腫瘤發(fā)生的共同特征是細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制的紊亂，導(dǎo)致細(xì)胞的失控性生長(zhǎng)2。調(diào)控細(xì)胞周期的核心機(jī)制是由細(xì)胞周期蛋白（ylin），周期蛋白依賴(lài)性激酶（ylindependentkinase,DK）,周期蛋白依賴(lài)性

2、激酶抑制劑（ylindependentkinaseinhinitrs,KI）構(gòu)成的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。目前SKP2、P27kip1在各種腫瘤中的表達(dá)及其兩者的相關(guān)性已成為研究熱點(diǎn)，如淋巴瘤、消化系統(tǒng)腫瘤、肺癌、口腔鱗癌等方面，但其與鼻咽癌的關(guān)系國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)有關(guān)報(bào)道。本課題旨在探討SKP2和P27kip1在鼻咽癌組織中的表達(dá)和意義，進(jìn)一步研究鼻咽癌的生物學(xué)特性，了解其發(fā)病機(jī)制，或能有一定的理論價(jià)值和臨床意義。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)對(duì)象收集貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2003年9月至2005年9月門(mén)診耳鼻喉科纖維鏡檢查鼻咽部非角化性癌活檢組織及貴醫(yī)附院病理科部分存檔鼻咽部非角化性癌活檢組織蠟塊共39例，慢性鼻咽炎活檢

3、標(biāo)本24例。鼻咽癌組39例中，男25例，女14例；3272歲，按照鼻咽癌92TN分期標(biāo)準(zhǔn)（福州）分期：期6例，期8例，期10例，期15例。39例鼻咽癌患者均未行過(guò)放化療，其中28例伴有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，15例伴有顱神經(jīng)侵犯癥狀。慢性鼻咽炎組24例中，男10例，女14例，2568歲。所有標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，HE染色復(fù)檢確診。兩組患者的年齡、性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。實(shí)驗(yàn)步驟均按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件，每組實(shí)驗(yàn)均設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照，每組均作常規(guī)HE染色。1.3結(jié)果判定Skp2、P27kip1均以細(xì)胞核或細(xì)胞核伴胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性

4、細(xì)胞，而只有胞漿出現(xiàn)棕黃色為非特異性染色。鼻咽癌組織以癌細(xì)胞核著色為陽(yáng)性細(xì)胞；慢性鼻咽炎組織以黏膜上皮細(xì)胞核著色為陽(yáng)性細(xì)胞。取染色良好（陽(yáng)性細(xì)胞染色清晰，背景染色低）的組織切片，用半定量法4行結(jié)果判定。A按陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分：在高倍鏡下（400）隨機(jī)選取5個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多的視野計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞及總細(xì)胞數(shù)，求出陽(yáng)性細(xì)胞所占總細(xì)胞數(shù)的百分比，取其平均值，并計(jì)分：無(wú)細(xì)胞染色為0分,陽(yáng)性細(xì)胞25%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞占26%50%為2分，陽(yáng)性細(xì)胞占51%75%為3分，陽(yáng)性細(xì)胞75%為4分。B按染色強(qiáng)度計(jì)分：不染色為0分,呈淡黃色為1分,呈黃色為2分,呈棕黃色為3分。最后以AB的值劃定標(biāo)準(zhǔn)：3分可判為陽(yáng)性，3

5、5分為（），68分為（2結(jié)果2.1Skp2和P27kip1蛋白在鼻咽癌和慢性鼻咽炎組織中的表達(dá)情況Skp2蛋白在鼻咽癌癌細(xì)胞核部位染色陽(yáng)性，細(xì)胞漿中無(wú)表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞彌漫散布于鼻咽部黏膜上皮層及黏膜下，癌灶處癌細(xì)胞表現(xiàn)為Skp2蛋白染色強(qiáng)陽(yáng)性（圖1），而在慢性鼻咽炎組織中陽(yáng)性染色較鼻咽癌組明顯減少（圖2）。39例鼻咽癌組織中Skp2蛋白總陽(yáng)性表達(dá)率為71.79%，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率為56.41%；24例慢性鼻咽炎組織中Skp2蛋白總陽(yáng)性表達(dá)率為41.67%，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率為25%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2=5.63，P0.05)。鼻咽癌組織中P27kip1蛋白表達(dá)明顯減少（圖3），P27kip1蛋白在慢

6、性鼻咽炎黏膜上皮中分布未見(jiàn)明顯特異性。39例鼻咽癌組織P27kip1蛋白總陽(yáng)性表達(dá)率為35.90%，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率為17.95%，顯著低于其在慢性鼻咽炎的總陽(yáng)性表達(dá)率79.17%，強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率58.33%（2=11.15,P0.01），見(jiàn)表。+P27kip1-+11691325743慢性鼻咽炎14445682.2Skp2和P27kip1蛋白表達(dá)與鼻咽癌多項(xiàng)臨床病理特征的關(guān)系Skp2和P27kip1的蛋白表達(dá)與鼻咽癌的臨床分期、顱神經(jīng)侵犯有相關(guān)性（P0.05），與年齡、性別、鼻咽癌的分化程度、頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)相關(guān)性（P0.05），見(jiàn)表2。2.3鼻咽癌中Skp2與P27kip1蛋白表達(dá)的關(guān)系經(jīng)Spea

7、ran等級(jí)相關(guān)分析，在鼻咽癌中Skp2與P27kip1蛋白表達(dá)呈明顯的負(fù)相關(guān)（rs=-0.373,P=0.019）。nSkp2+P值P27kip1+P值年齡60歲2315(65.22)0.1640.18660歲1613(81.25)性別男2517(68.00)0.2350.215女1411(78.57)組織學(xué)分類(lèi)低分化3627(75.00)0.16913(36.11)0.46中高分化臨床分期、期140.0260.035、期2521(84.00)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移L(+)2822(78.57)0.10410(45.45)0.287L(-)顱神經(jīng)侵犯N(+)14(93.33)0.0180.019N(-)

8、2414(58.33)12(50.00)3討論細(xì)胞周期的運(yùn)行受多種因素調(diào)控，有兩個(gè)主要的調(diào)控點(diǎn)：一個(gè)處于G1/S轉(zhuǎn)折點(diǎn)G1期檢測(cè)點(diǎn)，是控制細(xì)胞進(jìn)入S期的控制點(diǎn)；另一個(gè)處于G2/轉(zhuǎn)折點(diǎn)G2期檢測(cè)點(diǎn)。在G1期早期，ylinD和DK4,6復(fù)合物發(fā)揮正向調(diào)節(jié)作用，進(jìn)入G1期中后期ylinE和DK2復(fù)合物進(jìn)行正向調(diào)節(jié)5。本研究發(fā)現(xiàn)，P27kip1在慢性鼻咽炎組織中的陽(yáng)性率為79.17%，而在鼻咽癌組織中的陽(yáng)性率為35.90，明顯低于慢性鼻咽炎組，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。此結(jié)果支持體外細(xì)胞株檢查幾種即在靜止期細(xì)胞中，P27kip1呈高水平表達(dá)，隨著增生活性的增加，P27kip1蛋白水平下降。提

9、示在鼻咽癌的發(fā)生中P27kip1蛋白的減少起重要作用。對(duì)不同臨床特征的鼻咽癌患者比較P27kip1表達(dá)，在組織學(xué)分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移上未發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。但研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，P27kip1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率在臨床分期、期及有顱神經(jīng)侵犯組均明顯低于、期和無(wú)顱神經(jīng)侵犯組(P0.05)，提示P27kip1與腫瘤臨床分期、顱神經(jīng)侵犯有顯著相關(guān)性，可能在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。本研究中P27kip1蛋白表達(dá)與鼻咽癌組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而iaparrn等9分析P27kip1蛋白在一系列不同階段人類(lèi)結(jié)腸癌標(biāo)本中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)P27kip1的表達(dá)與腫瘤分級(jí)之間有顯著的關(guān)系，

10、高中分化的腫瘤有P27kip1的高表達(dá)，而低分化的腫瘤顯示低表達(dá)；Tan等10分析了202例T1a,T1b浸潤(rùn)性乳腺癌，發(fā)現(xiàn)P27kip1表達(dá)水平和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與乳腺癌生存率顯著相關(guān)。這可能是因?yàn)楸茄拾┍旧淼牟±硖攸c(diǎn)98%屬低分化鱗癌，本實(shí)驗(yàn)收集的標(biāo)本中絕大多數(shù)亦為低分化鱗癌，中高分化組樣本含量較小，來(lái)院就診的病例大多屬中晚期，已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例較多，本研究所收集的淋巴結(jié)陰性病例組樣本含量較校目前，P27kip1蛋白已被證明通過(guò)Skp2依賴(lài)性泛素-蛋白酶體途徑降解。本研究發(fā)現(xiàn)，Skp2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與鼻咽癌臨床分期、顱神經(jīng)侵犯呈明顯的相關(guān)性(P0.05)，提示Skp2可能在鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展中

11、起重要作用，檢測(cè)其蛋白表達(dá)對(duì)判斷鼻咽癌的臨床分期及惡性程度有一定意義。與P27kip1相同，Skp2蛋白表達(dá)與鼻咽癌的組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。本研究結(jié)果顯示，在鼻咽癌中Skp2蛋白和P27kip1蛋白表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(P0.05)，與眾多的文獻(xiàn)報(bào)道一致。提示，(1)鼻咽癌中P27kip1低表達(dá)可能產(chǎn)生于Skp2高表達(dá)介導(dǎo)的P27kip1降解升高。由此可以推測(cè)，在鼻咽癌患者的鼻咽黏膜被覆上皮細(xì)胞中，Skp2過(guò)表達(dá)通過(guò)加速對(duì)P27kip1的泛素化降解，使細(xì)胞異常增殖不能得到有效抑制，導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)度增殖，分化程度降低，最終發(fā)生癌變，此過(guò)程可能為鼻咽癌分子發(fā)病機(jī)制之一，可為鼻咽癌的診治提供一定的理論依據(jù)；(2)Skp2有可能成為鼻咽癌治療的新靶點(diǎn)。Skp2