醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)培訓(xùn)課件

1、醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)一、人員資質(zhì)及培訓(xùn)要求 從事醫(yī)療器械微生物檢驗(yàn)工作的人員應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專業(yè)知識的教育背景。檢驗(yàn)人員應(yīng)依據(jù)所在崗位和職責(zé)接受相應(yīng)的培訓(xùn)，在確認(rèn)它們可以承擔(dān)某一檢驗(yàn)前，他們不能獨(dú)立從事該項(xiàng)微生物檢驗(yàn)。應(yīng)保證所有人員在上崗前接受勝任工作所必須的設(shè)備操作、微生物檢驗(yàn)技術(shù)和實(shí)驗(yàn)室生物安全等方面的培訓(xùn)，經(jīng)考核合格后方可上崗，同時，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定所有級別試驗(yàn)人員的繼續(xù)教育計(jì)劃。 檢驗(yàn)人員必須熟悉相關(guān)監(jiān)測方法、程序、檢驗(yàn)?zāi)康暮徒Y(jié)果評價。微生物實(shí)驗(yàn)室的管理者其專業(yè)技能和經(jīng)驗(yàn)水平應(yīng)與他們的職責(zé)范圍相符，如：管理技能、實(shí)驗(yàn)室安全、檢驗(yàn)安排、預(yù)算、實(shí)驗(yàn)研究、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2、的評估和數(shù)據(jù)偏差的調(diào)查、技術(shù)報告書寫等。 2醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)一、人員資質(zhì)及培訓(xùn)要求 從事醫(yī)療器械微生物檢驗(yàn)工作的人員應(yīng)二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制 【原則】實(shí)驗(yàn)室布局設(shè)計(jì)的基本原則是既要最大可能防止微生物的污染，又要防止檢驗(yàn)過程對環(huán)境和人員造成危害。通常，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)劃分成潔凈或無菌區(qū)域和活菌操作區(qū)域，同時應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康?，在時間或空間上有效分隔不相容的試驗(yàn)活動，將交叉污染的風(fēng)險降低到最低。一般情況下，醫(yī)療器械微生物檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有開展無菌檢查、微生物限度檢查等檢測活動的、獨(dú)立設(shè)置的潔凈室（區(qū)）或隔離系統(tǒng)，并為上述檢驗(yàn)配備相應(yīng)的細(xì)菌（真菌）等實(shí)驗(yàn)室、培養(yǎng)室、文檔處理區(qū)等輔助區(qū)域，同時，應(yīng)對上述區(qū)域明

3、確標(biāo)識。 3醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制 【原則】實(shí)驗(yàn)室布局設(shè)計(jì)的基本原則是既要二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制 【要求】 1、無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。用于無菌檢查和微生物限度檢查的潔凈操作室應(yīng)配有屬于“人流凈化”的更衣室及屬于“物流凈化”的緩沖間或傳遞窗（柜），使進(jìn)入潔凈操作室的實(shí)驗(yàn)人員和實(shí)驗(yàn)物品分別經(jīng)適當(dāng)凈化后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)操作間。 無菌室分無菌操作室和緩沖間。無菌操作室應(yīng)具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置。操作室或工作臺應(yīng)保持正壓。應(yīng)在壓差十分重要的相鄰級別區(qū)之間安裝壓差表。 4醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制 4醫(yī)療

4、器械檢化員微生物培訓(xùn)二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制 【要求】 2、微生物限度檢查的全過程，均應(yīng)遵守?zé)o菌操作，嚴(yán)防再污染。因此，微生物限度檢查宜在環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行；限度檢查實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配有相應(yīng)的人流和物流緩沖間，并定期作環(huán)境監(jiān)測。 5醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制 【要求】 5醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制 【要求】 3、菌種處理、微生物鑒別和陽性對照室 菌種的處理包括的內(nèi)容比較多，如菌種的傳代、保藏、制備以及培養(yǎng)基促生長實(shí)驗(yàn)、陽性對照、微生物方法驗(yàn)證、消毒劑和防腐劑的效力測定和對環(huán)境中分離菌的鑒別等，這些實(shí)驗(yàn)過程中都在處理活的微生物，處

5、理不當(dāng)會造成實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染，影響其他實(shí)驗(yàn)結(jié)果，因此，該室必須與其他實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格分開；必要時，應(yīng)按實(shí)驗(yàn)室性質(zhì)的需要保持對相鄰實(shí)驗(yàn)室的相對壓差；需采取必要的消毒方式確保實(shí)驗(yàn)室潔凈條件合格（如臭氧，乳酸熏蒸等），以凈化層流臺作為局部100級的控制措施，最好是使用生物安全柜，所有的與活毒菌種相關(guān)的活動都應(yīng)在層流臺或生物安全柜中進(jìn)行。每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要對層流臺或生物安全柜及整個實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行消毒。所有與菌種相關(guān)的實(shí)驗(yàn)廢物均應(yīng)經(jīng)過滅菌處理后方可丟棄。6醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制 【要求】6醫(yī)療器械檢化員微生物培二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制 【要求】 4、培養(yǎng)室及其他功能間 培養(yǎng)室用于放置培養(yǎng)細(xì)菌和真菌的

6、培養(yǎng)箱。準(zhǔn)備區(qū)即試液及培養(yǎng)基配制/滅菌區(qū)域、實(shí)驗(yàn)器皿洗滌、烘干、滅菌、實(shí)驗(yàn)用品及易耗品儲藏等沒有特殊要求的功能間，可為一般清潔環(huán)境。 7醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制 【要求】 7醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)微生物環(huán)境控制相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16292:2010，醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子測試方法GB/T 16293:2010，醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))浮游菌測試方法GB/T 16294:2010，醫(yī)藥工業(yè)潔凈室(區(qū))沉降菌測試方法GB50073-2001潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范ISO 14644-1:1999 潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第1部分：空氣潔凈度等級劃分 ISO 14644-4:1999 潔

7、凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第4部分：設(shè)計(jì)、施工、運(yùn)行ISO 14644-7:1999 潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第7部分：分離的設(shè)備8醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)微生物環(huán)境控制相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16292:2010，醫(yī)藥工無菌室環(huán)境控制設(shè)備微粒計(jì)數(shù)儀9醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌室環(huán)境控制設(shè)備微粒計(jì)數(shù)儀9醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌室環(huán)境控制設(shè)備浮游菌采樣儀10醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌室環(huán)境控制設(shè)備浮游菌采樣儀10醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌室環(huán)境控制設(shè)備11醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌室環(huán)境控制設(shè)備11醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)潔凈室沉降菌測試方法1.測試時間1.1對單向流，如100級凈化房間及層流工作

8、臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10min后開始。1.2對非單向流，如10000級、100000級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30min后開始。2.采樣方法將已制備好的培養(yǎng)皿按要求放置，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5h，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。2.2.培養(yǎng)全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在3035培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染?？擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。12醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)潔凈室沉降菌測試方法1.測試時間12醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)潔凈室沉降菌測試方法 3.菌落計(jì)數(shù)用肉眼直接計(jì)數(shù)，標(biāo)

9、記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用510倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計(jì)數(shù)。4.注意事項(xiàng)4.1測試用具要作滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。4.2采取一切措施防止人為對樣本的污染。4.3對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。4.4由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。4.5采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。13醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)潔凈室沉降菌測試方法 3.菌落計(jì)數(shù)13醫(yī)療

10、器械檢化員微生物培潔凈室沉降菌測試方法5.測試規(guī)則5.1.測試狀態(tài)5.1.1沉降菌測試前，被測試潔凈室（區(qū)）的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。5.1.2沉降菌測試前，被測試潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過消毒。5.1.3測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。5.2.測試人員5.2.1測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。5.2.2靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于二人。14醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)潔凈室沉降菌測試方法5.測試規(guī)則14醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)最少采樣點(diǎn)數(shù)目面積潔凈度級別1001000010000010232

11、2102042220408224010016421002004010320040080206400100016040131000200040010032200080020063注：表中的面積，對于單向流潔凈室.指的是送風(fēng)面積；對非單向流潔凈室，指的是房間面積15醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)最少采樣點(diǎn)數(shù)目面積潔凈度級別100100001000001同時滿足最少平皿數(shù)潔凈度級別所需90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降0.5h計(jì)）100級1410000級2100OOO級216醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)同時滿足最少平皿數(shù)潔凈度級別所需90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降0采樣點(diǎn)的布置采樣點(diǎn)的位置可以同懸浮粒子測試點(diǎn)。a）工作區(qū)采樣

12、點(diǎn)的位置離地0.8m1.5m左右（略高于工作面）。b）可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加采樣點(diǎn)。采樣點(diǎn)位置的詳細(xì)規(guī)則見附錄B（標(biāo)準(zhǔn)的附錄）。 17醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)采樣點(diǎn)的布置17醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)采樣點(diǎn)布置 18醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)采樣點(diǎn)布置 18醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)潔凈度級別沉降菌浮游菌塵粒的最大允許數(shù)/m3個/（90mm）0.5h）活微生物數(shù)/m30.5m5m10015 3500100003100 350000 2000環(huán) 境 檢 測 參 照 標(biāo) 準(zhǔn)19醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)潔凈度沉降菌浮游菌塵粒的最大個/（90mm）0.5h）活微微生物實(shí)驗(yàn)室管理嚴(yán)格區(qū)分污染區(qū)及

13、清潔區(qū)20醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)微生物實(shí)驗(yàn)室管理嚴(yán)格區(qū)分污染區(qū)及清潔區(qū)20醫(yī)療器械檢化員微生相 關(guān) 標(biāo) 準(zhǔn)GB 15979-2002 一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB 15980-1995 一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB 15981-1995消毒與滅菌效果的評價方法和標(biāo)準(zhǔn)21醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)相 關(guān) 標(biāo) 準(zhǔn)GB 15979-2002 一次性使用衛(wèi)生用品三、滅菌控制 微生物實(shí)驗(yàn)使用的試劑、器材等常需用濕熱滅菌法。濕熱滅菌的溫度和時間需驗(yàn)證，必須保證物品滅菌后無菌保證值SAL10-6。滅菌程序經(jīng)驗(yàn)證合格后方可使用。定期進(jìn)行BD實(shí)驗(yàn)、 真空泄漏測試、溫度參數(shù)測試（空載熱分布、定載熱穿透、滿載熱

14、穿透）、壓力改變速率測試（GB8599-2008大型蒸汽滅菌器技術(shù)要求），同時以生物指示劑驗(yàn)證滅菌效果, 必須保證物品滅菌后無菌保證值SAL小于百萬分之一。 22醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)三、滅菌控制 微生物實(shí)驗(yàn)使用的試劑、器材等常需用濕熱滅菌法三、滅菌控制 所有器具應(yīng)采用可靠方法滅菌置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)12130 min 或置電熱干燥箱內(nèi)1802 h。 23醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)三、滅菌控制 所有器具應(yīng)采用可靠方法滅菌23醫(yī)療器械檢化員微濕熱滅菌控制相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)GB 18281.3-2000醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 生物指示物 第3部分:濕熱滅菌用生物指示物ISO 11138-3-2006醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌

15、.生物指示物.第3部分:濕熱滅菌用生物指示劑24醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)濕熱滅菌控制相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)GB 18281.3-2000醫(yī)療保健產(chǎn)四、培養(yǎng)基管理1、培養(yǎng)基的制備 2、培養(yǎng)基的貯藏 3、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn) 25醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)四、培養(yǎng)基管理1、培養(yǎng)基的制備 25醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)四、培養(yǎng)基管理 靈敏度檢查 （中國藥典2010）無菌檢查（ISO11737.2:2009或GBT19973.2-2005）26醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)四、培養(yǎng)基管理 靈敏度檢查 （中國藥典2010）26醫(yī)療器械五、 無菌操作定義：是指在執(zhí)行實(shí)驗(yàn)過程中，防止一切微生物侵入機(jī)體和保持無菌物品及無菌區(qū)域不被污

16、染的操作技術(shù)和管理方法。無菌操作技術(shù)是微生物實(shí)驗(yàn)的基本技術(shù)，是保證微生物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確和順利完成的重要環(huán)節(jié)。無菌操作技術(shù)主要包括兩方面：創(chuàng)造無菌的培養(yǎng)環(huán)境及在操作和培養(yǎng)過程中防止一切其它微生物的侵入。創(chuàng)造無菌的培養(yǎng)環(huán)境包括提供密閉的培養(yǎng)容器、培養(yǎng)容器的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌等；防止一切其它微生物的侵入的措施包括紫外線殺菌、甲醛熏蒸、超凈臺的消毒與檢測、操作工具、器皿滅菌、操作方法等。27醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)五、 無菌操作定義：是指在執(zhí)行實(shí)驗(yàn)過程中，防止一切微生物侵微生物實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備微生物實(shí)驗(yàn)控制1：人員管理微生物實(shí)驗(yàn)控制2：環(huán)境控制微生物實(shí)驗(yàn)控制3：滅菌控制微生物實(shí)驗(yàn)控制4：培養(yǎng)基管理微生物實(shí)驗(yàn)控制5

17、：無菌操作28醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)微生物實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備微生物實(shí)驗(yàn)控制1：人員管理28醫(yī)療器械檢化員微生物基本操作 瓊脂平板接種法 瓊脂斜面接種法半固體接種法 肉湯培養(yǎng)基接種法 29醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)微生物基本操作 瓊脂平板接種法細(xì)菌在自然界及人體中分布廣，種類多，為了了解菌譜，須先將各種細(xì)菌分離，獲得純菌培養(yǎng)物后才能進(jìn)一步作細(xì)菌的鑒定。瓊脂平板培養(yǎng)基因面積大，接種后可達(dá)到分離的目的，常稱分離培養(yǎng)法。平板接種方法有多種。以下介紹平行劃線法及分區(qū)劃線法。 30醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)瓊脂平板接種法細(xì)菌在自然界及人體中分布廣，種類多，為了了解菌瓊脂平板接種法（分離培養(yǎng)法）分區(qū)劃線法31醫(yī)療器械

18、檢化員微生物培訓(xùn)瓊脂平板接種法（分離培養(yǎng)法）分區(qū)劃線法31醫(yī)療器械檢化員微生瓊脂平板接種法（分離培養(yǎng)法）平行劃線法 32醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)瓊脂平板接種法（分離培養(yǎng)法）平行劃線法 32醫(yī)療器械檢化員微瓊脂平板接種法（分離培養(yǎng)法）33醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)瓊脂平板接種法（分離培養(yǎng)法）33醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)單個菌落34醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)單個菌落34醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)單個菌落35醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)單個菌落35醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)瓊脂斜面接種法目的：多用于純種細(xì)菌的增菌和保存菌種方法：用滅菌接種環(huán)取細(xì)菌培養(yǎng)物少許。拔去瓊脂斜面培養(yǎng)基塞，管口經(jīng)火焰上滅菌，將沾有細(xì)菌的接

19、種環(huán)伸入管內(nèi)，自下而上在瓊脂上蜿蜒劃線；接種后，管口在火焰上滅菌，塞回塞，接種環(huán)滅菌：在試管口處做好標(biāo)記，置37培養(yǎng)1824小時 36醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)瓊脂斜面接種法目的：多用于純種細(xì)菌的增菌和保存菌種36醫(yī)療器大腸桿菌斜面 金黃色葡萄球菌斜面37醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)大腸桿菌斜面 金黃色葡萄球菌斜面37肉湯接種法目的：用于增菌。方法：用滅菌接種環(huán)取細(xì)菌培養(yǎng)物少許；以無菌操作將沾有細(xì)菌的接種環(huán)伸入肉湯中，將環(huán)上細(xì)菌輕輕研磨于接近液面的管壁上，然后將試管稍傾斜，使肉湯碰及細(xì)菌即可；接種后管口滅菌，塞回塞，接種環(huán)滅菌，并做好標(biāo)記，置37培養(yǎng)18-24小時 38醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)肉湯接

20、種法38醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)半固體接種法（穿刺接種法）目的：增菌和保存菌種；觀察細(xì)菌有無動力。方法：用接種針，將取有細(xì)菌的接種針自培養(yǎng)基中央刺入（不要接觸管底），沿原穿刺線撥出，注意在刺入與拔出時不可晃動接種針；接種后做好標(biāo)記。置37培養(yǎng)18-24小時39醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)半固體接種法（穿刺接種法）目的：增菌和保存菌種；觀察細(xì)菌有無半固體瓊脂培養(yǎng)基（0.5%） 40醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)半固體瓊脂培養(yǎng)基（0.5%）40醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)菌懸液制備（使用麥?zhǔn)媳葷峁埽準(zhǔn)媳葷峁埽菏荕cFarland發(fā)明的一種用于微生物比濁的不同濁度的標(biāo)準(zhǔn)濁度管。具體的配制方法是根據(jù)硫酸和氯化鋇的

21、比例來定的，有表可查，這樣不同比例生成的硫酸鋇沉淀的濃度不同，且都有定值。41醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)菌懸液制備（使用麥?zhǔn)媳葷峁埽準(zhǔn)媳葷峁埽菏荕cFarland麥?zhǔn)媳葷峁艿呐浔裙?號(McFarland)0.5123450.25%BaCl2（ml）0.20.40.81.21.62.01%H2SO4(ml)9.89.69.28.88.48.0細(xì)菌的近似濃度(108/ml)1369121542醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)麥?zhǔn)媳葷峁艿呐浔裙?號(McFarland)0.51234菌懸液制備（使用麥?zhǔn)媳葷峁埽静牧稀?、實(shí)驗(yàn)所需的微生物新鮮培養(yǎng)物如：金黃色葡萄球菌新鮮培養(yǎng)物；2、無菌生理鹽水、麥?zhǔn)媳葷峁?/p>

22、；3、酒精燈、接種環(huán)、無菌吸管、平皿。43醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)菌懸液制備（使用麥?zhǔn)媳葷峁埽静牧稀?3醫(yī)療器械檢化員微生物菌懸液制備（使用麥?zhǔn)媳葷峁埽痉椒ā?、輕搖標(biāo)準(zhǔn)試管；2、無菌操作挑取金黃色葡萄球菌新鮮培養(yǎng)物至無菌生理鹽水試管（與標(biāo)準(zhǔn)管相同直徑）中混勻，直到濁度與所要求的標(biāo)準(zhǔn)管的濃度相同；3、序列稀釋已挑取菌落的生理鹽水試管至所需的菌液濃度如：100cfu/ml;4、用平皿計(jì)數(shù)法驗(yàn)證所配置菌液的實(shí)際濃度。44醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)菌懸液制備（使用麥?zhǔn)媳葷峁埽痉椒ā?4醫(yī)療器械檢化員微生物菌懸液制備（使用麥?zhǔn)媳葷峁埽臼褂眉记伞?、直接用眼睛看（需要經(jīng)驗(yàn)，誤差較大）。2、找張白紙

23、打上平行直線，利用光在不同濃度液體折射不同幫助觀察比較。45醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)菌懸液制備（使用麥?zhǔn)媳葷峁埽臼褂眉记伞?5醫(yī)療器械檢化員微1234567861086107610661056104610361026101麥 氏 1 號 管 稀 釋 梯 度 表（cfu/ml）46醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)1234567861086107610661056菌懸液制備（使用分光光度儀 ）分光光度儀 47醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)菌懸液制備（使用分光光度儀 ）分光光度儀 47醫(yī)療器菌懸液制備的保存菌懸液制備：菌懸液制備后應(yīng)在2小時內(nèi)使用，若保存在28的菌懸液可以在24小時內(nèi)使用。黑曲霉也可制成穩(wěn)定的孢

24、子懸液保存在28，在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)替代對應(yīng)量的新鮮孢子懸液使用。 48醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)菌懸液制備的保存菌懸液制備：菌懸液制備后應(yīng)在2小時內(nèi)使用，若培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏度檢查 靈敏度檢查所需的六種菌：金黃色葡萄球菌 CMCC (B)26003 ATCC 6538 銅綠假單胞菌 CMCC (B)10104 ATCC 9027 枯草芽孢桿菌CMCC (B)63501 ATCC 6633 生孢梭菌CMCC(B)64941 ATCC 11437 白色念珠菌CMCC(F)98001 ATCC 10231 黑曲霉CMCC(F)98003 ATCC 16404 根據(jù)培養(yǎng)基的功能選擇靈敏度實(shí)驗(yàn)所需菌種

25、49醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏度檢查 靈敏度檢查所需的六種菌：49醫(yī)療中國藥典2005年版 明確規(guī)定： 培養(yǎng)基靈敏度、微生物限度檢查法檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏度檢查50醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)中國藥典2005年版培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏度檢查50醫(yī)療器械檢中國藥典2010年版在新增的“藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則”中對菌種有了較為明確的規(guī)定：允許使用標(biāo)準(zhǔn)菌株和商業(yè)派生菌株標(biāo)準(zhǔn)菌株應(yīng)按保藏機(jī)構(gòu)提供的說明進(jìn)行復(fù)活標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株應(yīng)進(jìn)行純度和特性確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株

26、建議采用低溫冷凍干燥、液氮貯存或超低溫冷凍保藏的方法標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株可用于制備每月或每周一次轉(zhuǎn)種的工作菌株冷凍菌株解凍后不得重新冷凍和再次使用工作菌株不可替代標(biāo)準(zhǔn)菌株，商業(yè)派生菌株僅可用作工作菌株培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏度檢查51醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)中國藥典2010年版在新增的“藥品微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范指導(dǎo)原則”菌株傳代基本概念標(biāo)準(zhǔn)菌株：由國內(nèi)或國際菌種保藏機(jī)構(gòu)保藏的，遺傳學(xué)特性得到確認(rèn)和保證并可追溯的菌株。（0代）標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株：由標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)一次傳代得到的培養(yǎng)物。（1代）商業(yè)派生菌株：由供應(yīng)商提供的所有特性與標(biāo)準(zhǔn)菌株等效的菌株。（2代）工作菌株：由標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株經(jīng)傳代得到的培養(yǎng)物。（2代）代：將活的微生

27、物接種到新鮮培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，并希望獲取新的微生物培養(yǎng)物。這種操作方式，新培養(yǎng)物對接種培養(yǎng)物而言就稱為一代。52醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)菌株傳代基本概念標(biāo)準(zhǔn)菌株：由國內(nèi)或國際菌種保藏機(jī)構(gòu)保藏的，遺采購的第2代超低溫冷凍標(biāo)準(zhǔn)儲備菌種工作菌種第3代工作菌種第3代工作菌種第4代工作菌種第4代工作菌液第5代工作菌液第5代工作菌液第5代工作菌液第5代制備工作菌種進(jìn)行菌種保藏的模式圖53醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)采購的第2代超低溫冷凍標(biāo)準(zhǔn)儲備菌種工作菌種工作菌種工作菌種工各類菌種保藏條件及時間菌 種培 養(yǎng) 基保存溫度傳 種 時 間細(xì) 菌一般多用于營養(yǎng)瓊脂或根據(jù)菌種規(guī)定選用培養(yǎng)基46芽孢桿菌36個月，其它細(xì)菌

28、每個月酵母菌一般用麥芽汁瓊脂或麥芽汁酵母膏瓊脂46一般46個月絲狀真菌一般用PDA瓊脂、蔡氏瓊脂或麥芽汁瓊脂等46每4個月移植一次（每2個月移植一次）54醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)各類菌種保藏條件及時間菌 種培 養(yǎng) 基保存溫度傳 種菌 種 保 管 菌種保管應(yīng)有專人負(fù)責(zé)，保存與加鎖的冰箱中或特制的白鐵箱中加鎖置陰暗處，確保菌種安全。因工作變動時，必須做好交接工作。 菌種應(yīng)有詳細(xì)登記本，包括名稱、分離日期、鑒定日期、鑒定者、主要鑒定性能，并注意記錄使用、轉(zhuǎn)移及銷毀情況和原因。 各種菌種應(yīng)按規(guī)定時間定期移種。一般每移種3次后作一次全面鑒定。注意菌種有無污染和變異，如發(fā)現(xiàn)污染和變異時，應(yīng)及時更換。 購置

29、菌種，應(yīng)有介紹信。全部保存菌種應(yīng)具備清單，并定期向部門負(fù)責(zé)人報告。 55醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)菌 種 保 管 菌種保管應(yīng)有專人FTM 的 靈 敏 度 檢 查培養(yǎng)基 標(biāo)準(zhǔn)菌種(10-100cfu/ml) 3035培養(yǎng) 培養(yǎng)天數(shù) 1 2 3 4 5 FTM(12ml) 金黃色葡萄球菌 管1 管2 緑膿桿菌 管3 管4 枯草芽孢桿菌 管5 管6 生胞梭菌 管7 管8 空白對照 管9 56醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)FTM 的 靈 敏 度 檢 查培養(yǎng)基 標(biāo)準(zhǔn)菌種(10-100培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏度檢查接種金黃色葡萄球菌、緑膿桿菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)1824

30、h；用0.9%無菌氯化鈉溶液制成10-100cfu/ml菌液備用。接種生胞梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)1824h；用0.9%無菌氯化鈉溶液制成10-100cfu/ml菌液備用。接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，2328培養(yǎng)2448h；用0.9%無菌氯化鈉溶液制成10-100cfu/ml菌液備用。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中，2328培養(yǎng)57d,加35ml0.9%無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫。然后，吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成10-100cfu/ml孢子懸液備用。 57醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏

31、度檢查接種金黃色葡萄球菌、緑膿桿菌、枯草菌種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉；制備成活菌數(shù)100cfu的菌懸液備用菌株傳代次數(shù)不得超過5代培養(yǎng)基接種每種菌接種至2管相應(yīng)的培養(yǎng)基，另取一支不接種作空白對照，按規(guī)定溫度時間培養(yǎng)。結(jié)果判斷空白對照管應(yīng)無菌生長，每種菌接種后的2管培養(yǎng)基管均生長良好，該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。培養(yǎng)條件金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌接種至營養(yǎng)肉湯（或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基）3035培養(yǎng)1824小時；生孢梭菌接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中3035培養(yǎng)3天；白色念珠菌、黑曲霉接種至改良馬丁培養(yǎng)基中2328培養(yǎng)5天培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈

32、敏度檢查58醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)菌種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白培養(yǎng)基質(zhì)量控制：無菌檢查 每批滅菌的培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于5支(瓶)，培養(yǎng)14天，應(yīng)無菌生長。 59醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)培養(yǎng)基質(zhì)量控制：無菌檢查 每批滅菌的培養(yǎng)基隨機(jī)取無菌實(shí)驗(yàn)60醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌實(shí)驗(yàn)60醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌實(shí)驗(yàn)預(yù)防假陽性措施1在一個專門準(zhǔn)備、環(huán)境控制的房間內(nèi)的層流罩的環(huán)境中進(jìn)行測試2在整個測試過程中使用無菌技術(shù)3用避免污染的方法把測試器皿、培養(yǎng)基和測試物品引入測試區(qū)4測試產(chǎn)品表面的細(xì)菌污染，在引導(dǎo)測試物品進(jìn)入測試區(qū)之前，先對產(chǎn)品的外包裝進(jìn)行消毒。5對測試中使用的

33、設(shè)備、材料和產(chǎn)品進(jìn)行滅菌6簡化進(jìn)行測試必須的操作7盡量避免懸浮微粒的產(chǎn)生8環(huán)境時時監(jiān)測（沉降菌檢測）61醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌實(shí)驗(yàn)預(yù)防假陽性措施61醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌實(shí)驗(yàn)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)GBT19973.2-2005-醫(yī)用器材的滅菌 微生物學(xué)方法 第二部分：確認(rèn)滅菌過程的無菌試驗(yàn)ISO 11737-2 2009-醫(yī)用器材的滅菌 微生物學(xué)方法 第二部分：確認(rèn)滅菌過程的無菌試驗(yàn)62醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌實(shí)驗(yàn)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)GBT19973.2-2005-醫(yī)用器材的滅無菌實(shí)驗(yàn)：培養(yǎng)條件不論哪種無菌試驗(yàn)方法：FTM32.52.5，不少于14天；SCDB22.52.5，不少于14天；改良馬丁23-

34、28，不少于14天。如果14以內(nèi)觀察到陽性結(jié)果，不必繼續(xù)培養(yǎng)。63醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌實(shí)驗(yàn)：培養(yǎng)條件不論哪種無菌試驗(yàn)方法：FTM32.52.無菌實(shí)驗(yàn)陽性對照應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽性對照菌：無抑菌作用及抗革蘭陽性菌為主的供試品以金黃色葡萄球菌為對照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品以大腸埃希菌為對照菌；抗厭氧菌的供試品，以生孢梭菌為對照菌；抗霉菌的供試品，以白色念珠菌為對照菌。加菌量小于l00cfu，供試品用量同供試品無菌實(shí)驗(yàn)時每份培養(yǎng)基接種的樣品量。陽性對照管培養(yǎng)4872小時應(yīng)生長良好 64醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌實(shí)驗(yàn)陽性對照應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽性對照菌：無抑菌作用及陰性對照陰性對照：

35、陰性對照供試品無菌實(shí)驗(yàn)時，應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋同法操作作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。65醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)陰性對照陰性對照：陰性對照供試品無菌實(shí)驗(yàn)時，應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀無菌實(shí)驗(yàn)：結(jié)果判斷肉湯培養(yǎng)基有菌生長的常見三種形式：混濁生長：液體變混濁。菌膜：液體澄清，表面有一薄層菌膜。沉淀生長：液體澄清，管底有沉淀物 66醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌實(shí)驗(yàn)：結(jié)果判斷肉湯培養(yǎng)基有菌生長的常見三種形式：66醫(yī)療混濁生長：液體變混濁67醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)混濁生長：液體變混濁67醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)肉湯培養(yǎng)基有菌生長的常見形式68醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)肉湯培養(yǎng)基有菌生長的常見形式68醫(yī)療器械檢

36、化員微生物培訓(xùn)無菌實(shí)驗(yàn)：結(jié)果判斷 1.陽性對照管應(yīng)生長良好，陰性對照管應(yīng)無菌生長 2.培養(yǎng)期間逐日觀察并記錄是否有菌生長，如培養(yǎng)14天后，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，但不能確定是否有微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基或劃線接種于斜面培養(yǎng)基上，細(xì)菌培養(yǎng)兩天，霉菌培養(yǎng)三天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁或斜面是否有菌生長；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。69醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌實(shí)驗(yàn)：結(jié)果判斷 1.陽性對照管應(yīng)生長良好，陰性對照管 釋出物檢查70醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn) 釋出物檢查70醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：釋出物檢查目的：對未知或可疑的供試品，在進(jìn)行無菌試

37、驗(yàn)實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行方法驗(yàn)證試驗(yàn)，以確認(rèn)供試品在該試驗(yàn)條件下無抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不計(jì)。71醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：釋出物檢查目的：對未知或可疑的供試品，在進(jìn)行無無菌實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：釋出物檢查取滅菌產(chǎn)品以無菌操作轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中,30-35培養(yǎng)24hrs ； 注意：使用與實(shí)際無菌實(shí)驗(yàn)同種等量的培養(yǎng)基接種每毫升濃度小于100cfu的菌種稀釋液在無菌培養(yǎng)基內(nèi)，一式兩份，其中一份加入無菌試樣，另一份作為陽性對照，并在合適的溫度培養(yǎng)不超過5天。按表1所列菌種重復(fù)以上步驟。72醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：釋出物檢查取滅菌產(chǎn)品以無菌操作轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中,無菌樣品100cfu菌種無菌樣品實(shí)驗(yàn)組

38、對照組釋 出 物 檢 查在合適的溫度培養(yǎng)不超過5天。選擇合適的微生物，重復(fù)以上步驟。73醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌樣品100cfu實(shí)驗(yàn)組對照組釋 出 物 檢 查在合適的溫釋出物檢查解釋：通過與陽性對照對比，如果在培養(yǎng)容器內(nèi)看不到微生物生長，則說明使用的樣品能抑止細(xì)菌或霉菌的生長?？梢钥紤]使用無菌中和劑，如吐溫80、卵磷脂、偶氮植物凝血素、-內(nèi)酰胺酶。如果中和劑無效，增加培養(yǎng)基的量。盡量使用能使試驗(yàn)微生物生長的最小的培養(yǎng)基的量。74醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)釋出物檢查解釋：通過與陽性對照對比，如果在培養(yǎng)容器內(nèi)看不到微大豆酪蛋白消化物培養(yǎng)基(SCDM)菌種培養(yǎng)溫度培養(yǎng)條件培養(yǎng)時間枯草芽孢桿菌ATC

39、C 663322.5 2.5 需氧3天白色念珠菌ATCC 1023122.5 2.5 需氧3-5天釋出物檢查常用菌種75醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)大豆酪蛋白消菌種培養(yǎng)培養(yǎng)培養(yǎng)枯草芽孢桿菌ATCC 66332初始污染菌76醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)初始污染菌76醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)定 義 生物負(fù)載 ：一件產(chǎn)品和/ 或包裝上存活的微生物總數(shù)。 生物負(fù)載估計(jì)值 ：通過對活菌計(jì)數(shù)或滅菌前活菌計(jì)數(shù)加上一個回收效率補(bǔ)償系數(shù)， 得出的組成生物負(fù)載的微生物數(shù)值 。77醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)定 義 生物負(fù)載 ：一件產(chǎn)品和/ 或包裝上存活的微生物總數(shù)初始污染菌相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)GBT19973.1-2005-醫(yī)用器材的滅

40、菌 微生物學(xué)方法 第一部分產(chǎn)品上微生物總數(shù)的估計(jì)ISO-11737-1:2006 GBT19973.1-2005-醫(yī)用器材的滅菌 微生物學(xué)方法 第一部分產(chǎn)品上微生物總數(shù)的估計(jì)78醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)初始污染菌相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)GBT19973.1-2005-醫(yī)用器材的樣品份額取樣原則1 定義：樣品份額 (SIP) sample item portion，即從某一保健產(chǎn)品單元上取出的用于試驗(yàn)的部分。2取樣注意事項(xiàng)2.1若可操作，試驗(yàn)應(yīng)使用整個產(chǎn)品單元。但這往往被認(rèn)為是不可行的，產(chǎn)品單元上的樣品份額宜在實(shí)驗(yàn)室易于操作的前提下盡可能大。2.2如果所用的樣品份額( (SIP) 小于一個完整的產(chǎn)品單元，則應(yīng)選

41、擇代表產(chǎn)品單元的具有微生物的部分。如果已驗(yàn)證微生物在產(chǎn)品單元上是均勻分布的，應(yīng)從產(chǎn)品單元上任一部位選擇樣品份額。在缺少這些驗(yàn)證的情況下，應(yīng)從產(chǎn)品單元上隨機(jī)選擇幾個部分作為樣品份額。2.3樣品份額本身應(yīng)對產(chǎn)品單元內(nèi)的產(chǎn)品有代表性。當(dāng)產(chǎn)品分成不同的部分，可以分裝于兩個或多個容器內(nèi)。樣品份額可以根據(jù)供試產(chǎn)品單元的長度、質(zhì)量、體積或表面積。如果產(chǎn)品單元有標(biāo)簽說明只是液路無菌，宜把液路視為整個試驗(yàn)單位。(即SIP=1 )2.4 SIP選擇舉例，見表179醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)樣品份額取樣原則1 定義：樣品份額 (SIP) sampl表1 SIP 選擇舉例選擇SIP的依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品表面積放植物(非吸收)質(zhì)

42、量粉狀、手術(shù)衣/單、植入物(可吸收)長度管路(直徑不變)管路(直徑不變)體積水、液體液路靜脈輸注器，液袋80醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)表1 SIP 選擇舉例標(biāo)準(zhǔn)樣品表面積放植物(非吸收)質(zhì)量粉狀表1 SIP 選擇舉例選擇SIP的依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品表面積放植物(非吸收)質(zhì)量粉狀、手術(shù)衣/單、植入物(可吸收)長度管路(直徑不變)管路(直徑不變)體積水、液體液路靜脈輸注器，液袋81醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)表1 SIP 選擇舉例標(biāo)準(zhǔn)樣品表面積放植物(非吸收)質(zhì)量粉狀 校正因子82醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn) 校正因子82醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)培訓(xùn)課件校正因子反復(fù)洗脫方法實(shí)驗(yàn)步驟1取樣品1

43、件或sip，投入一定量的無菌洗脫液中(A)。2樣品的處理采用旋渦混臺器(2800次min)，振蕩2min。3注皿：取處理洗脫液A2ml，分別注入兩個無菌平皿中，每平皿1ml。4再洗脫:將樣品從洗脫液A中取出瀝干，移入另一定量的無菌洗脫液中(B)。5再處理:將B洗脫液置旋渦混臺器(2800次min)振蕩2min。6再注皿:取B洗脫液2ml，分別注入兩個無菌平皿內(nèi)，每平皿lml。 注：當(dāng)微生物數(shù)少時,從B洗脫液開始，即可用無菌濾膜過濾后直接放培養(yǎng)基中培養(yǎng)。7如此反復(fù)洗脫4次即A、B、C和D，直至洗脫累積量(初始污染菌)不再增加，最后瀝干樣品，將其平鋪于無菌平皿中(E)。然后將熔化并冷至4548的N

44、A培養(yǎng)基，分別注入AE各平皿每皿15ml。8待凝固后，放置在規(guī)定的培養(yǎng)條件下(3035，48h82h)培養(yǎng)，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。 84醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)校正因子反復(fù)洗脫方法實(shí)驗(yàn)步驟1取樣品1件或sip，投入一定量校正因子=1/0.3825=2.61 編號平皿均數(shù)稀釋倍數(shù)瓊脂覆蓋總數(shù)回收率洗脫1洗脫2洗脫3洗脫4平皿1平皿2平均平皿1平皿2平均平皿1平皿2平均平皿1平皿2平均180010003001008220836.23260080020005160537.3837006002002002170241.13平均38.25校 正 因 子 計(jì) 算85醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)校正因子=1/0.382

45、5=2.61 編平皿均數(shù)稀釋倍數(shù)瓊校 正 因 子 計(jì) 算同批產(chǎn)品，需抽取3-5件，進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，確定最小、最大及平均回收率和初始污染菌數(shù)。根據(jù)校正因子，滅菌前初始污染計(jì)數(shù)乘以校正因子即為產(chǎn)品帶菌總數(shù)。86醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)校 正 因 子 計(jì) 算同批產(chǎn)品，需抽取3-5件，進(jìn)行重復(fù)性試初始污染菌方法驗(yàn)證檢驗(yàn)洗脫液有無抑菌作用檢驗(yàn)樣品有無抑菌作用87醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)初始污染菌方法驗(yàn)證檢驗(yàn)洗脫液有無抑菌作用87醫(yī)療器械檢化員微無菌洗脫液初始污染菌樣品100cfu菌種1.試驗(yàn)組3.樣品對照組初始污染菌方法驗(yàn)證（藥典）在3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中: 洗脫液對照組(4)的菌回收率應(yīng)均不低于70%。

46、（4/2）100 試驗(yàn)組(1)的菌回收率應(yīng)均不低于70% （1-3）/2100 2.菌液組4.洗脫液對照組100cfu/ml菌種無菌洗脫液初始污染菌樣品無菌洗脫液100cfu菌種88醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)無菌洗脫液1.試驗(yàn)組3.樣品對照組初始污染菌方法驗(yàn)證（藥典）初始污染菌方法驗(yàn)證（ISO11737）選用滅菌產(chǎn)品，如果洗脫技術(shù)中用到洗脫液，每一產(chǎn)品都應(yīng)經(jīng)受常規(guī)微生物洗脫技術(shù)，則將一定數(shù)量的易受破壞的微生物放人洗脫液中，回收微生物。選用滅菌產(chǎn)品，如果產(chǎn)品直接放人培養(yǎng)基中，可以參照無菌實(shí)驗(yàn)的抑菌實(shí)驗(yàn)進(jìn)行。 89醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)初始污染菌方法驗(yàn)證（ISO11737）選用滅菌產(chǎn)品，如果洗脫滅

47、菌產(chǎn)品100cfu菌種常規(guī)洗脫回收細(xì)菌數(shù)100cfu/ml菌種1 實(shí)驗(yàn)組2 對照組實(shí)驗(yàn)組回收細(xì)菌數(shù)/對照組菌數(shù)10070初始污染菌方法驗(yàn)證（ISO11737）90醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)滅菌產(chǎn)品常規(guī)洗脫回收細(xì)菌數(shù)100cfu/ml1 實(shí)驗(yàn)組2 對微生物實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)后環(huán)境控制培養(yǎng)基質(zhì)量滅菌控制人員控制無菌操作方法驗(yàn)證靈敏度實(shí)驗(yàn)無菌檢查無菌實(shí)驗(yàn)初始污染菌B/F驗(yàn)證洗脫液驗(yàn)證樣品無抑菌作用儀器校正沉降菌檢測簡化操作91醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)微生物實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)后環(huán)境控制培養(yǎng)基質(zhì)量滅菌控制人員控 物體表面細(xì)菌總數(shù)92醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn) 物體表面細(xì)菌總數(shù)92醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)物體表面細(xì)菌總數(shù)方法：將內(nèi)徑為5cm5c