淋病奈瑟菌的免疫膠體金檢測及與傳統(tǒng)方法的靈敏度比較課件

1、姓 名導(dǎo) 師淋病奈瑟菌的免疫膠體金檢測及與傳統(tǒng)方法的靈敏度比較1姓 名導(dǎo) 師淋病奈瑟菌的免疫膠體金檢測1目錄123立題依據(jù)和國內(nèi)外研究背景主要研究內(nèi)容技術(shù)路線2目錄123立題依據(jù)和國內(nèi)外研究背景主要研究內(nèi)容技術(shù)路線2目錄4567可行性分析創(chuàng)新性與特色分析進度安排預(yù)期成果3目錄4567可行性分析創(chuàng)新性與特色分析進度安排預(yù)期成果31.1立題依據(jù)和國內(nèi)外研究背景淋病奈瑟菌為革蘭陰性球菌,是淋病的病原體。1879年，奈瑟從35例急性尿道炎、陰道炎及新生兒急性結(jié)膜炎病人的分泌物中，分離出淋病雙球菌。1885年，Bumm在人、?；蜓虻哪萄迮囵B(yǎng)基上培養(yǎng)淋球菌獲得成功，將菌種接種于健康人的尿道內(nèi)也可產(chǎn)生同

2、樣的癥狀。至此，淋球菌是淋病的病原體的結(jié)論始告成立。據(jù) WHO估計,全球每年淋病新發(fā)病例超過6000萬,發(fā)展中國家發(fā)病率更呈明顯上升的趨勢。在我國淋病的感染率居性傳播疾病之首。且隨著抗生素的廣泛使用，淋病奈瑟菌對抗生素的耐藥率越來越高，先是青霉素對它失效，再是四環(huán)素，環(huán)丙沙星，而現(xiàn)在到了頭孢克肟。因此，對淋病奈瑟菌進行更深入的研究顯得愈發(fā)急迫。淋病依其病期長短在臨床上分為急性和慢性。急性淋病臨床癥狀明顯，但慢性淋病多無明顯臨床癥狀，尤其是女性感染者。約80%感染者早期在臨床上不顯出任何癥狀、體征。本次研究的主要目的即為淋病奈瑟菌的檢測。41.1立題依據(jù)和國內(nèi)外研究背景淋病奈瑟菌為革蘭陰性球菌,

3、是淋1.2目前的淋病奈瑟菌檢測技術(shù)1233.1涂片檢查法培養(yǎng)檢查法免疫學(xué)檢測法酶聯(lián)免疫吸附試驗4567分子生物學(xué)檢測技術(shù)淋病奈瑟菌基因芯片檢測技術(shù)共凝試驗快速檢測淋病奈瑟菌泡沫快速試驗3.2免疫膠體金技術(shù)51.2目前的淋病奈瑟菌檢測技術(shù)1233.1涂片檢查法培養(yǎng)檢查1.3立題依據(jù)和國內(nèi)外研究背景當(dāng)前對于感染有淋病奈瑟菌的女性而言，早期絕大多數(shù)是無癥狀的狀態(tài)。因此，我們猜測可以研制一種家庭快速檢測淋病奈瑟菌的簡易裝置（類似于驗孕棒，驗孕棒的原理就是以懷孕女性尿液中升高的人絨毛膜促性腺激素hcg作為抗原，利用免疫膠體金技術(shù)來檢測是否懷孕，同理可用尿液中的淋病奈瑟菌的外膜蛋白作為抗原，利用免疫膠體金

4、技術(shù)來檢測是否感染）。為了確保該簡易裝置的可行性和提高檢出率，本次實驗將分離提純淋病奈瑟菌的主要的外膜蛋白進行免疫膠體金試驗，并對處于輕度癥狀的女性進行淋病奈瑟菌檢測以估計免疫膠體金法的檢出率。61.3立題依據(jù)和國內(nèi)外研究背景當(dāng)前對于感染有淋病奈瑟菌的女性2主要研究內(nèi)容123通過檢測外膜蛋白P來檢測淋病奈瑟菌的存在。分離提取淋病奈瑟菌的主要外膜蛋白，用免疫膠體金技術(shù)檢出淋病奈瑟菌上。與傳統(tǒng)的培養(yǎng)法進行靈敏度、檢出率和陽性率的比較。72主要研究內(nèi)容123通過檢測外膜蛋白P來檢測淋病奈瑟菌的存3.1技術(shù)路線（前期）83.1技術(shù)路線（前期）83.1技術(shù)路線（前期）93.1技術(shù)路線（前期）93.2技術(shù)

5、路線（體外指標(biāo)檢測）線性關(guān)系靈敏度重復(fù)性、假陰性率123改變待測淋病奈瑟菌液的濃度，多次實驗，計算不同濃度下檢出率的變化，觀察兩種方法線性關(guān)系。 尿液環(huán)境處理后，分別用免疫膠體金技術(shù)（采用多種標(biāo)記單抗的混合物以提高靈敏度）和傳統(tǒng)的培養(yǎng)法檢測淋病奈瑟菌。假陽性率3設(shè)計一個濃度梯度檢測兩種方法檢出的最低所需菌群濃度，最低濃度越低，靈敏度越高。確定一個濃度，在該濃度下進行多次重復(fù)檢測實驗，比較兩種方法重復(fù)性的好壞和假陰性率。使用不含菌的培養(yǎng)液對兩種方法進行多次檢測，比較假陽性率高低。103.2技術(shù)路線（體外指標(biāo)檢測）線性關(guān)系靈敏度重復(fù)性、假陰性率3.3技術(shù)路線（臨床指標(biāo)檢測）123采集淋病奈瑟菌女性

6、攜帶者的尿液和非攜帶者的尿液制作簡易的層析法免疫膠體金檢測試劑，試劑中包含全部實驗所得單抗種類。將測試劑浸入尿液，檢測、統(tǒng)計、計算假陽性率、假陰性率。113.3技術(shù)路線（臨床指標(biāo)檢測）123采集淋病奈瑟菌女性攜帶者4可行性分析123淋球菌培養(yǎng)技術(shù)成熟膠體金特異性、敏感性高外膜蛋白P表達于所有淋病奈瑟菌菌株，高度保守，免疫原性強，易于培養(yǎng)和檢測。124可行性分析123淋球菌培養(yǎng)技術(shù)成熟膠體金特異性、敏感性高外5創(chuàng)新性與特色分析當(dāng)前對于感染有淋病奈瑟菌的女性而言，早期約80%感染者早期在臨床上不顯出任何癥狀、體征。涂片檢查法對慢性淋病患者敏感性較低，女性患者易出現(xiàn)假陽性。而培養(yǎng)法費時、操作繁瑣。因

7、此，我們提出一個新的猜想，研制一種家庭快速檢測淋病奈瑟菌的裝置，用分離提純的淋病奈瑟菌的主要外膜蛋白進行膠體金試驗，并用此方法對處于輕度癥狀的女性進行淋病奈瑟菌檢測以估計該方法的檢出率，這樣就使得淋病奈瑟菌的檢測變得安全而簡易。135創(chuàng)新性與特色分析當(dāng)前對于感染有淋病奈瑟菌的女性而言，早期約6進度安排1-8周8-10周11-24周25-32周33-40周請輸入您要的內(nèi)容請輸入您要的內(nèi)容請輸入您要的內(nèi)容請輸入您要的內(nèi)容請輸入您要的內(nèi)容請輸入您要的內(nèi)容用TM培養(yǎng)基大量培養(yǎng)淋球菌標(biāo)準菌株，同時進行實驗動物培養(yǎng)。P蛋白的分離提取抗淋球菌單克隆抗體的制備；P蛋白與IgA1蛋白酶單克隆抗體的分離提純免疫膠體金法檢測P蛋白體外實驗和臨床實驗指標(biāo)測定，實用性分析146進度安排1-8周8-10周11-24周25-32周33-47預(yù)期成果分離提取淋病奈