尼莫地平抗急性鉛染毒大鼠海馬神經(jīng)元損傷的形態(tài)學(xué)研究

1、尼莫地平抗急性鉛染毒大鼠海馬神經(jīng)元損傷的形態(tài)學(xué)研究黃陳平，林林，宋明芬，方周溪【摘要】目的:相識尼莫地平對急性鉛染毒大鼠海馬神經(jīng)元損傷的干預(yù)作用。要領(lǐng):48只2月齡SD大鼠隨機平分為4組，即染鉛組40g/kgPbA、尼莫地平組(1g/kgNi)、鉛-尼莫地平組(40g/kgPbA+1g/kgNi)和比較組等量生理鹽水，逐日腹注1次，一連3d。用TUNEL法原位檢測海馬神經(jīng)元凋亡環(huán)境，并用電鏡不雅察海馬神經(jīng)元超微布局變革。效果:各組海馬神經(jīng)元凋亡指數(shù)由高到低依次為染鉛組、鉛-尼莫地平組、比較組和尼莫地平組，染鉛能明顯增高海馬神經(jīng)元凋亡指數(shù)(P0.01)，尼莫地平與鉛存在交互作用(P0.01)，在

2、鉛染毒的條件下，尼莫地平能顯著低落神經(jīng)元凋亡指數(shù)。電鏡不雅察表現(xiàn)，染鉛組海馬神經(jīng)元有核固縮征象，而鉛-尼莫地平組神經(jīng)元未見顯著非常。結(jié)論:急性鉛染毒能引起海馬神經(jīng)元損傷，促進細胞凋亡；尼莫地平大概具有抗急性鉛染毒海馬神經(jīng)元損傷的作用。【關(guān)鍵詞】鉛；尼莫地平；海馬神經(jīng)元；急性中毒；大鼠Keyrds:lead；Nidipine；hippapalneurn；autepisning；rat鉛是常見的環(huán)境污染物，是公認的兒童認知成效發(fā)育停滯的重要傷害因素之一。小劑量鉛就能損害中樞神經(jīng)體系，尤其在腦海馬回，這種損害在神經(jīng)發(fā)育的初期最為敏感1。如今鉛對中樞神經(jīng)體系損害的機制尚不清楚，有研究表現(xiàn)，小劑量Pb2

3、+就可促使體外造就的小腦顆粒細胞產(chǎn)生凋亡，而鈣離子通道阻斷劑能按捺其作用2。我們通過動物實行，不雅察急性鉛染毒誘發(fā)神經(jīng)細胞凋亡的環(huán)境及鈣離子通道拮抗劑尼莫地平的干預(yù)作用，以探究鉛對神經(jīng)體系損害的機制及鉛中毒的防治要領(lǐng)。1質(zhì)料和要領(lǐng)1.1實行動物及分組康健2月齡SD大鼠48只上海斯萊克實行動物有限責(zé)任公司提供，干凈級，允許證號：SXK滬2022-0003，牝牡各半，始重為170.78.0g，按性別、體重配伍，隨機分為4組，每組12只，根據(jù)22析因方案擺設(shè)實行因素鉛和尼莫地平，即染鉛組、尼莫地平組、鉛-尼莫地平組和比較組。染鉛組大鼠按40g/kg腹腔注射醋酸鉛配成1%醋酸鉛溶液，尼莫地平組按1g/

4、kg腹腔注射尼莫地平0.02%尼莫地平注射液，德國拜耳公司，鉛-尼莫地平組按每公斤體重腹腔注射醋酸鉛40g和尼莫地平1g，比較組不予以醋酸鉛或尼莫地平，但按單元體重予以1%醋酸鉛等量的生理鹽水腹腔注射。各組大鼠逐日腹腔注射1次，一連3d。末次注射后24h，大鼠用戊巴比妥鈉50g/kg腹腔注射麻醉，行自動脈插管，開放右心耳，用含肝素的生理鹽水沖洗后，4的4%多聚甲醛PBS溶液灌注結(jié)實，開顱取腦，置4%多聚甲醛PBS溶液中繼承結(jié)實12h。1.2腦海馬神經(jīng)元凋亡原位檢測接納末了脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末了標識表記標幟(TUNEL)法，試劑盒購自北京中杉公司。經(jīng)腦漏斗部橫切獲得腦片，通例脫水

5、、白臘包埋，制成5厚構(gòu)造切片，脫蠟至水，PBS沖洗，滴加TUNEL反響混淆溶液，在濕盒中37孵育60in，PBS沖洗后，加少許羊血清舉行關(guān)閉，瀝干后加轉(zhuǎn)化劑-辣根過氧化物酶PD，37孵育30in，PBS沖洗，滴加DAB底物溶液，室溫孵育10in，沖洗后用蘇木素復(fù)染，洗片后脫水封片。選擇細胞凋亡指數(shù)作為評價指標，即在1000倍顯微鏡NiknElipse50i下，每張玻片隨機拍攝腦海馬A區(qū)14和DG區(qū)5個不一連視野，盤算凋亡神經(jīng)元占總神經(jīng)元比例。1.3腦海馬神經(jīng)元電鏡不雅察各組隨機取2只動物，腦海馬構(gòu)造取材后，戊二醛-鋨酸雙重結(jié)實，環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片，用日立H-7500透射電子顯微鏡舉行不雅察

6、。1.4統(tǒng)計學(xué)處置懲罰要領(lǐng)計量資料以均數(shù)尺度差(s)表現(xiàn)，數(shù)據(jù)用SPSS14.0軟件舉行闡發(fā)，鉛及尼莫地平對凋亡指數(shù)的交互效應(yīng)選用22析因方案方差闡發(fā)，各組單獨作用比力接納完全隨機方案方差闡發(fā)。2效果2.1一樣平常環(huán)境實行初期，各組大鼠體重?zé)o明顯差異，均勻為(170.78.0)g。在實行后期，染鉛組和鉛-尼莫地平組大鼠體重別離為(152.37.6)g和(151.210.5)g較比較組和尼莫地平組別離為(185.512.9)g和(186.610.0)g有顯著落落P0.01。2.2海馬神經(jīng)元TUNEL染色不雅察光鏡下，海馬A區(qū)為錐體細胞層，DG區(qū)為顆粒細胞層，TUNEL陽性神經(jīng)元的胞核呈棕色，染色

7、質(zhì)多濃縮于核膜下呈指環(huán)狀，有核固縮和核碎裂征象，胞漿中因有核碎片亦可著色。各組海馬神經(jīng)元凋亡指數(shù)由高到低依次為染鉛組、鉛-尼莫地平組、比較組和尼莫地平組，鉛-尼莫地平組凋亡指數(shù)較單純?nèi)俱U組為低(P0.01)，但明顯高于比較組和尼莫地平組(P0.01)。析因闡發(fā)表現(xiàn)鉛與尼莫地平在神經(jīng)元凋亡指數(shù)上存在顯著的交互作用(P0.01)，即尼莫地平能明顯減輕鉛引起的神經(jīng)元凋亡作用。與比較組比力，單純尼莫地平組細胞凋亡指數(shù)有落落趨勢，但尚無統(tǒng)計學(xué)意義，表白在正常環(huán)境下尼莫地平尚不克不及明顯低落神經(jīng)元的凋亡率。見表1、圖1。2.3海馬神經(jīng)元超微布局不雅察比較組和尼莫地平組神經(jīng)元胞漿有多量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，核糖體漫衍

8、勻稱，核膜完備，神經(jīng)突起布局清楚。染鉛組神經(jīng)元細胞器布局根本正常，細胞器漫衍較希罕，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有脫顆粒征象，核中染色質(zhì)在核膜下聚攏，核有固縮征象。鉛-尼莫地平組神經(jīng)元細胞器布局根本正常，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增多，細胞核未見非常。見圖2。3討論鉛對神經(jīng)體系的毒作用大概是多方面的，包羅引起神經(jīng)細胞凋亡、快樂性神經(jīng)毒作用、脂質(zhì)過氧化損傷、影響神經(jīng)遞質(zhì)貯存和開釋、滋擾線粒體能量代謝等3，4。如今，尚不克不及用單一的毒理機制來同一說明種種鉛毒作用。鉛在體內(nèi)的代謝與鈣相似，鉛可以或許代替鈣，擾亂細胞內(nèi)正常的鈣穩(wěn)態(tài)和信使作用，終極導(dǎo)致細胞的損傷和成效的失調(diào)，這是多種鉛毒作用機制中較為普及和緊張的環(huán)節(jié)。Pb2+重要通過

9、鈣通道進著迷經(jīng)細胞內(nèi)，細胞內(nèi)Pb2+一連增長以及胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)失衡重要表現(xiàn)為鈣超載，觸發(fā)了線粒體膜轉(zhuǎn)運孔的開放，引起線粒體去極化，啟動細胞色素-aspases級聯(lián)反響而導(dǎo)致細胞凋亡的產(chǎn)生5。李丹等6報道大鼠海馬神經(jīng)元凋亡率與染鉛劑量間有精良的劑量-反響干系。本研究效果也表現(xiàn)，染鉛組海馬神經(jīng)元凋亡率較比較組明顯增高，電鏡下神經(jīng)細胞核染色質(zhì)聚攏，并有固縮征象。這證明了急性染鉛毒能引起海馬神經(jīng)元損傷，具有促進細胞凋亡的作用。鉛可作用于電壓門控性和受體依靠性a2+通道,鉛對電壓門控性a2+通道影響更顯著7。電壓門控性a2+通道分為L、N、T、P四種亞型，此中L型是重要的。在鈣通道中，Pb2+與a2+有一個

10、高度特異性的競爭位點，鉛可以通過與a2+競爭進入細胞內(nèi)，但胞內(nèi)a2+濃度并不必然低落。研究提示細胞內(nèi)微量Pb2+即可激活PK，后者可激活細胞膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體的鈣通道，使胞外a2+內(nèi)流，胞內(nèi)鈣庫開釋，導(dǎo)致胞內(nèi)a2+濃度增高8。a2+通道存在一個a2+依靠性失活機制，即通過細胞內(nèi)a2+水昭雪饋調(diào)治鈣通道活性，防范因過多a2+流入使細胞內(nèi)a2+超載，而鉛對這種反響機制的影響可導(dǎo)致胞內(nèi)a2+濃度一連增高，進一步引起神經(jīng)細胞損傷或凋亡9。L型鈣通道拮抗劑尼莫地平是新一代二氫吡啶類鈣通道拮抗劑，它極易通過血腦屏蔽，重要漫衍在皮層和海馬，作用于二氫吡啶受體，引起受體構(gòu)型產(chǎn)生改變，使a2+通道不變在不運動狀

11、態(tài)，從而阻斷鈣內(nèi)流，有用地調(diào)治細胞內(nèi)鈣的程度，使之保持正常的生理成效。它具有改進腦循環(huán)，并直接作用于神經(jīng)元，有易化學(xué)習(xí)、改進影象的作用，且副作用略微，臨床上常作為促智藥，如今重要用于癡呆癥治療，但尚無關(guān)于用尼莫地平治療鉛中毒智力損傷的報道。Tsig等10報道在體外試驗條件下，二氫吡啶類鈣通道拮抗劑能淘汰胞外Pb2+經(jīng)a2+通道進入胞內(nèi)。濮海同等11在新生鼠非鉛毒性腦損傷后細胞凋亡環(huán)境及尼莫地平干預(yù)作用的研究中，創(chuàng)造尼莫地平干預(yù)能明顯減輕腦細胞凋亡。在本研究中，單純用尼莫地平對神經(jīng)元凋亡的改進作用并不顯著，但在急性鉛染毒的底子上，尼莫地平具有明顯按捺鉛誘導(dǎo)的神經(jīng)細胞凋亡作用。綜上所述，急性染鉛毒

12、能引起海馬神經(jīng)元損傷，促進細胞凋亡；尼莫地平大概具有抗急性鉛染毒海馬神經(jīng)元損傷的作用。【參考文獻】1TngS,VnShirndingYE,PrapantlT.Envirnentalleadexpsure:apublihealthprblefglbaldiensinsJ.BullrldHealthrgan,2000,78(9):1068-1077.2bertA,arksN,EvansHL,etal.Lead(Pb2+)prtesapptsisinnebrnraterebellarneurns:pathlgialipliatinsJ.JPharalExpTher,1996,279(1):453-4

13、42.3LidskyTI,ShnEiderJS.Adverseeffetsfhildhdleadpisning:basiehanissandlinialrrelatesJ.Brain,2022,126(1):5-19.4黃陳平,林林,蘇依所,等.急性鉛染毒對發(fā)育期小鼠舉動影響及與脂質(zhì)過氧化程度的干系J.中國舉動醫(yī)學(xué)科學(xué),2022,16(3):199-201.5FxDA,apbellL,BlkerYS.Funtinalalteratinsandappttielldeathintheretinafllingdevelp-entalradultleadexpsureJ.Neurtxilgy,1997

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