沙苑子調(diào)節(jié)小鼠免疫功能作用的實(shí)驗(yàn)研究

1、沙苑子調(diào)節(jié)小鼠免疫功能作用的實(shí)驗(yàn)研究關(guān)鍵詞：沙沙苑 【摘摘要】 目的的 探討討沙苑子子及其復(fù)復(fù)方制劑劑對(duì)小鼠鼠免疫功功能的調(diào)調(diào)節(jié)作用用。方法法 二級(jí)級(jí)昆明小小鼠1774只，雌雌雄各半半，體重重1822gg，隨機(jī)機(jī)分3組。用用沙苑子子及其復(fù)復(fù)方制劑劑給小鼠鼠灌胃115d后后活殺，用用稱重法法測(cè)量臟臟器系數(shù)數(shù)；用足足跖厚度度增加法法評(píng)價(jià)細(xì)細(xì)胞免疫疫功能；用溶血血空斑法法評(píng)價(jià)體體液免疫疫功能；用腹腔腔巨噬細(xì)細(xì)胞吞噬噬雞紅細(xì)細(xì)胞的方方法評(píng)價(jià)價(jià)巨噬細(xì)細(xì)胞吞噬噬功能。結(jié)結(jié)果 沙苑子子能明顯顯提高小小鼠DTTH反應(yīng)應(yīng)程度；巨噬細(xì)細(xì)胞吞噬噬功能明明顯增強(qiáng)強(qiáng)；溶血血空斑數(shù)數(shù)明顯增增多；白白細(xì)胞介介素-11、6、

2、8(IIL-11、6、8)水平平增高，與與對(duì)照組組比較具具有顯著著的統(tǒng)計(jì)計(jì)學(xué)意義義(P0.005)。結(jié)結(jié)論 沙苑子子具有調(diào)調(diào)節(jié)小鼠鼠免疫功功能的作作用。 【關(guān)關(guān)鍵詞】 沙苑子；免疫功能；小鼠 TThe efffectt off fllatsstemm miilkvvetcch sseedd annd iits commpouund preeparratiion on rreguulattionn off immmunnoloogiccal funnctiion of micce 【AAbsttracct】 Obbjecctivve To invvesttigaate thee efffecct

3、 oof fflattsteem mmilkkvettch seeed aand itss coompooundd prrepaarattionn onn thhe rreguulattionn off immmunnoloogiccal funnctiion of micce.MMethhodss OOne hunndreed sseveentyy foour of seccondd orrderr Kuunmiing micce(wweigght 1822gg)，mmalee annd ffemaale eacch ooccuupyiing onee haalf，wweree raando

4、omlyy diividded intto tthreee ggrouups.Alll thhe mmicee weere saccrifficeed aafteer ttheyy haad bbeenn giivenn fllatsstemm miilkvvetcch sseedd annd iits commpouund preeparratiion in inttraggasttricc addminnisttrattionn foor ffiftteenn daays.Thee orrganns iindeex oof mmicee waas ccalcculaatedd byy de

5、eterrminningg thhe oorgaans wweigght andd thhe ccelll immmunnityy weere evaaluaatedd byy deeterrminningg thhe tthicckenningg off peediss.Heemollytiic pplaqque tesst wwas useed tto aapprraisse hhumoorall immmunnityy，annd pperiitonneall maacroophaage swaalloowinng cchicckenn reed bbloood ccelll teest

6、wass ussed to apppraiise thee phhagoocyttes funnctiion.Ressultts Commparred witth tthe conntrool ggrouup，tthe DTHH reeacttionn annd pphaggocyytess fuuncttionn weere impprovved obvviouuslyy(P0.005)，aand thee quuanttityy off heemollytiic pplaqque andd thhe cconccenttrattionn off ILL-1，IIL-66，ILL-8 wer

7、re iincrreassed siggnifficaantlly(PP0.05) inn fllatsstemm miilkvvetcch sseedd annd iits commpouund preeparratiion grooup.Thee sppleeen aand thyymuss inndexx haad nno sstattisttic diffferrencce aamonng aall thee grroupps.CConcclussionn FFlattsteem mmilkkvettch seeed ccan reggulaate thee immmunnoloogi

8、ccal funnctiion of micce. 【KKey worrds】 fllatsstemm miilkvvetcch sseedd；immmunnoloogiccal funnctiion；micce 沙沙苑子(Semmen asttraggalii coompllanaati)為豆科科植物扁扁莖黃芪芪(Asstraagullus commplaanattus R.BBr)的的干燥成成熟種子子?，F(xiàn)代代醫(yī)學(xué)研研究發(fā)現(xiàn)現(xiàn)，沙苑苑子含有有豐富的的硒、銅銅、鐵、鋅鋅、錳及及脂肪油油、鞣質(zhì)質(zhì)、維生生素A等成分分，具有有養(yǎng)肝明明目、強(qiáng)強(qiáng)腰健骨骨、滋潤(rùn)潤(rùn)肌膚等等功效1。筆筆者通過(guò)過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動(dòng)物I

9、IL-11、6、8，胸腺腺及脾臟臟重量指指數(shù)等免免疫指標(biāo)標(biāo)測(cè)定，探探討沙苑苑子對(duì)小小鼠調(diào)節(jié)節(jié)免疫功功能的生生物作用用。 11 材材料與方方法 11.1 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動(dòng)物 二級(jí)級(jí)昆明小小鼠1774只，雌雌雄各半半，體重重1822gg，購(gòu)自自軍事醫(yī)醫(yī)學(xué)科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)驗(yàn)動(dòng)物中中心(動(dòng)物合合格證號(hào)號(hào)：BDDW9550077)。 11.2 受試試藥物 沙苑苑子水煎煎劑，含含生藥量量2000mg/ml；復(fù)方沙沙苑子由由沙苑子子、玄駒駒、紅景景天、北北五味子子、枸杞杞子、麥麥冬、川川芎等水水煮提取取組成，含含生藥量量4000mg/ml。均均由本所所制劑室室配制。沙沙苑子產(chǎn)產(chǎn)于陜西西，螞蟻蟻為廣西西產(chǎn)雙齒齒多刺蟻蟻(

10、Poolyrrhacchiss diivess smmithh)，其其他中藥藥材均購(gòu)購(gòu)自北京京康玉藥藥店。 11.3 試劑劑 綿羊羊紅細(xì)胞胞由采自自健康成成年綿羊羊血制備備，豚鼠鼠血清由由衛(wèi)生部部環(huán)境衛(wèi)衛(wèi)生監(jiān)測(cè)測(cè)所毒理理室提供供，雞紅紅細(xì)胞采采自健康康成年來(lái)來(lái)杭雄雞雞血制備備，其余余為國(guó)產(chǎn)產(chǎn)分析或或優(yōu)級(jí)純純?cè)噭?11.4 儀器器 放免免計(jì)數(shù)儀儀為上海海產(chǎn)SNN-6882型。 11.5 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)方法 將1744只小鼠鼠按體重重編號(hào)后后，用隨隨機(jī)表分分成4大組，分分別進(jìn)行行巨噬細(xì)細(xì)胞吞噬噬功能實(shí)實(shí)驗(yàn)、溶溶血空斑斑實(shí)驗(yàn)、遲遲發(fā)型變變態(tài)反應(yīng)應(yīng)、測(cè)定定胸腺、脾脾臟指數(shù)數(shù)實(shí)驗(yàn)。每每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)的動(dòng)物物又分為為

11、沙苑子子組、復(fù)復(fù)方沙苑苑子組和和生理鹽鹽水對(duì)照照組，各各組均為為12只小小鼠。沙沙苑子組組、復(fù)方方沙苑子子組分別別用沙苑苑子、復(fù)復(fù)方沙苑苑子水煎煎劑0.5mll灌胃，每每日1次；生生理鹽水水對(duì)照組組同時(shí)用用等量的的生理鹽鹽水灌胃胃，連續(xù)續(xù)15天。 11.5.1 巨噬細(xì)細(xì)胞吞噬噬功能的的實(shí)驗(yàn) 按照照文獻(xiàn)2方法法，末次次給藥后后，給每每只小鼠鼠腹腔注注射2%雞紅細(xì)細(xì)胞懸液液1mll。間隔隔30mmin，頸頸椎脫臼臼處死，仰仰位固定定于鼠板板上。正正中剪開(kāi)開(kāi)腹壁皮皮膚，經(jīng)經(jīng)腹膜注注入生理理鹽水22ml，轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板板1miin。然然后吸出出腹腔洗洗液1mml，平平均分滴滴于兩片片載玻片片上，放放入墊有

12、有濕紗布布的搪瓷瓷盒內(nèi)，移移置377孵箱溫溫育300minn。孵畢畢，于生生理鹽水水中漂洗洗，以除除去未貼貼片細(xì)胞胞。晾干干，以11：1丙酮-甲醇溶溶液固定定。4%(VV/V)Gieemsaa-磷酸酸緩沖液液染色33minn，用蒸蒸餾水漂漂潔，晾晾干，在在油鏡下下計(jì)數(shù)巨巨噬細(xì)胞胞，每片片2000個(gè)，按按下式計(jì)計(jì)算吞噬噬百分率率和吞噬噬指數(shù)： 吞吞噬百分分率=吞噬雞雞紅細(xì)胞胞的巨噬噬細(xì)胞數(shù)數(shù)2200個(gè)個(gè)巨噬細(xì)細(xì)胞1000% 11.5.2 溶血空空斑實(shí)驗(yàn)驗(yàn) 應(yīng)用用溶血空空斑實(shí)驗(yàn)驗(yàn)進(jìn)行抗抗體生成成細(xì)胞檢檢測(cè)22。取取羊血，用用生理鹽鹽水洗滌滌3次，每每只鼠經(jīng)經(jīng)腹腔注注射SRRBC 11108個(gè)個(gè)。將

13、用用SRBBC免疫疫5天后的的小鼠處處死，取取脾，制制成細(xì)胞胞懸液。將將表層培培養(yǎng)基加加熱溶解解后與等等量雙倍倍的Haankss液混合合，分裝裝小試管管，每管管0.5mml，再再向管內(nèi)內(nèi)加0.5ll體積分分?jǐn)?shù)為110%的的SRBBC(用用SA液配配制)、10l脾懸懸液，迅迅速混合合后傾倒倒于已刷刷瓊脂糖糖薄層的的玻片上上，待瓊瓊脂凝固固后，將將玻片水水平扣放放在片架架上，放放入二氧氧化碳培培養(yǎng)箱中中溫育11.5hh，然后后將用SSA緩沖沖液稀釋釋的補(bǔ)體體(1：5)加入入到玻片片架凹槽槽內(nèi)，繼繼續(xù)培養(yǎng)養(yǎng)1.55h后計(jì)計(jì)數(shù)溶血血空斑數(shù)數(shù)，以空空斑數(shù)代代表分泌泌抗體的的細(xì)胞數(shù)數(shù)。 11.5.3 遲發(fā)

14、型型變態(tài)反反應(yīng) 采用足足底增厚厚法進(jìn)行行DTHH檢測(cè)3。給給小鼠腹腹腔注射射1%SSRBCC 0.1mll/每鼠鼠，將其其致敏，4天后測(cè)量左后足跖部厚度，然后在測(cè)量部位皮下注射體積分?jǐn)?shù)為20%的SRBC(20l/每鼠)，注射后24h測(cè)量左后足跖部厚度，同一部位測(cè)量3次，取平均值。以注射前后足跖厚度的差值，表示DTH的程度。 11.5.4 對(duì)小鼠鼠胸腺、脾脾臟指數(shù)數(shù)的影響響 末次次前稱其其體重，給給藥300minn斷頭處處死，立立即取出出，稱量量脾臟、胸胸腺濕重重，計(jì)算算其指數(shù)數(shù)。計(jì)算算公式如如下： 脾(胸腺)指數(shù)=脾(胸胸腺)重重量(gg)體重重(g) 1.55.5 沙苑苑子對(duì)小小鼠血清清IL

15、-1、66、8水水平的 HYPERLINK 影影響 將上述述30只只小鼠按按上述方方法分組組給藥，按按 HYPERLINK 文獻(xiàn)44的方方法，末末次給藥藥后，330miin斷頭頭取血，330000r/mmin離離心100minn分離血血清，取取足量血血清待測(cè)測(cè)。 1.66 統(tǒng)統(tǒng)計(jì)學(xué) HYPERLINK .net/ 分分析 計(jì)量數(shù)數(shù)據(jù)均用用SASS軟件進(jìn)進(jìn)行方差差分析。 2 結(jié)果 2.1 沙苑子對(duì)小鼠3項(xiàng)免疫功能的影響 結(jié)果見(jiàn)表1。表1 沙沙苑子對(duì)對(duì)小鼠33項(xiàng)免疫疫功能的的影響 (xxs)注：與生理理鹽水對(duì)對(duì)照組比比較*PP0.05，*P0.01；用藥組組比較#P0.05 表表1數(shù)據(jù)據(jù)表明，小小

16、鼠服用用沙苑子子及其復(fù)復(fù)方制劑劑，能明明顯增強(qiáng)強(qiáng)小鼠吞吞噬雞紅紅細(xì)胞的的能力；增加小小鼠抗體體生成細(xì)細(xì)胞數(shù)。尤尤其是復(fù)復(fù)方沙苑苑子組與與對(duì)照組組比較，具具有顯著著的統(tǒng)計(jì)計(jì)學(xué)意義義。同時(shí)時(shí)沙苑子子與復(fù)方方沙苑子子比較，前前者更能能增加抗抗體生成成細(xì)胞數(shù)數(shù)。用藥藥組與對(duì)對(duì)照組比比較DTTH明顯顯增強(qiáng)，具具有明顯顯提高小小鼠細(xì)胞胞免疫功功能的作作用，具具有顯著著的統(tǒng)計(jì)計(jì)學(xué)意義義(P0.01)。 2.22 對(duì)對(duì)小鼠胸胸腺、脾脾臟指數(shù)數(shù)的變化化 結(jié)結(jié)果見(jiàn)表表2。 2.3 沙苑子子對(duì)小鼠鼠血清IIL-11、6、88水平的的影響 結(jié)果果見(jiàn)表33。表2 沙沙苑子對(duì)對(duì)小鼠胸胸腺、脾脾臟重量量與指數(shù)數(shù)的影響響 (

17、xss)注：結(jié)果顯顯示各用用藥組小小鼠與對(duì)對(duì)照組小小鼠比較較胸腺與與脾臟以以及其指指數(shù)差異異無(wú)顯著著性(PP0.05)。表3 沙沙苑子對(duì)對(duì)免疫實(shí)實(shí)驗(yàn)小鼠鼠血清IIL-11、6、88的影響響 (xss)注：與對(duì)照照組比較較*P0.05，*P0.01 從從表3可可以看出出，用藥藥組血清清IL-1、66、8水水平明顯顯高于對(duì)對(duì)照組(P0.05)，特別別是沙苑苑子對(duì)IIL-11、復(fù)方方制劑對(duì)對(duì)IL-1、88水平的的影響較較對(duì)照組組尤為顯顯著(PP0.01)，差異異具有顯顯著性。 3 討論 從20世紀(jì)80年代起，不少學(xué)者對(duì)沙苑子進(jìn)行了較為集中的 HYPERLINK 研究， HYPERLINK 現(xiàn)代藥理研

18、究證實(shí)，沙苑子可以調(diào)節(jié)血液流變學(xué)、血壓和腦血流量，具有明顯的保肝、降脂、抗疲勞等作用，并能提高免疫功能4。機(jī)體對(duì)抗原物質(zhì)的免疫應(yīng)答，是由免疫系統(tǒng)中各免疫細(xì)胞(包括巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞等)相互協(xié)調(diào)、共同完成的5。PFC是反映抗體生成細(xì)胞水平的指標(biāo)之一，它的完成需上述各項(xiàng)免疫細(xì)胞的協(xié)調(diào)作用，本文中經(jīng)沙苑子作用后，小鼠對(duì)SRBC的免疫應(yīng)答能力明顯提高，從表1結(jié)果可以看出，用藥組小鼠形成的溶血空斑數(shù)明顯高于對(duì)照組，即產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞數(shù)明顯增多。DTH是反應(yīng)T細(xì)胞功能的指標(biāo)之一，實(shí)驗(yàn)中用藥組小鼠的足跖腫脹度明顯高于對(duì)照組，說(shuō)明沙苑子具有增強(qiáng)機(jī)體的特異性細(xì)胞免疫功能的作用。巨噬細(xì)胞是一具有多種功能的免疫細(xì)胞，在機(jī)體非特異性免疫、體液免疫以及腫瘤免疫方面起著重要的作用6，7。沙苑子及其復(fù)方制劑，能使小鼠的巨噬細(xì)胞吞噬功能明顯增強(qiáng)，與對(duì)