過敏原血清學(xué)檢測培訓(xùn)課件

1、目錄一.過敏原概述二.過敏原常見方法學(xué)比較三.歐蒙過敏原產(chǎn)品特性及印跡法的特點四.過敏原體外檢測常見問題及解答目錄一.過敏原概述一、過敏原概述1906年von Piguet提出了allergy一詞。其概念為：機(jī)體對抗原刺激產(chǎn)生的一種“改變了反應(yīng)性”的狀態(tài)。這種狀態(tài)可能是保護(hù)性的，即產(chǎn)生了免疫力；也可能是破壞性的，即產(chǎn)生了超敏反應(yīng)。超敏反應(yīng)是機(jī)體對某抗原初次應(yīng)答后，再次接受相同抗原刺激時，發(fā)生的一種以機(jī)體生理功能紊亂或組織細(xì)胞損傷為主的特異性免疫應(yīng)答。一、過敏原概述1906年von Piguet提出了aller過敏原 吸入過敏原食物過敏原接觸過敏原輸注過敏原空氣中的吸入過敏原 (例如. 植物花粉

2、, 動物毛發(fā), 室內(nèi)灰塵或蟲螨等)過敏原 吸入過敏原空氣中的吸入過敏原 (例如. 植物花粉, 過敏原 通過胃腸道吸收 (例如. 魚、肉、蛋、 堅果和蔬菜等)吸入過敏原食物過敏原接觸過敏原輸注過敏原過敏原 通過胃腸道吸收 (例如. 魚、肉、蛋、 堅果和蔬菜等過敏原 皮膚接觸（例如：金屬飾品、化妝品和生活日用品等）吸入過敏原食物過敏原接觸過敏原輸注過敏原過敏原 皮膚接觸（例如：金屬飾品、化妝品和生活日用品等）吸入過敏原 直接輸入體內(nèi) (例如：昆蟲或動物的毒液, 注射類藥品等)吸入過敏原食物過敏原接觸過敏原輸注過敏原過敏原 直接輸入體內(nèi) (例如：昆蟲或動物的毒液, 注射類藥品過敏的損害過敏是以損害粘

3、膜為主要表現(xiàn)的過敏性結(jié)膜炎（眼粘膜） 過敏性鼻炎（鼻粘膜） 過敏性哮喘（氣管粘膜） 過敏性紫癜（皮膚粘膜） 過敏性腸絞痛（腸粘膜） 過敏性紫癜腎炎（腎內(nèi)粘膜） 心臟有粘膜組織，心臟是肯定會受到損 。心肌酶升高，特別是特異性的CK-MB（肌酸激酶同工酶 ）。 CK-MB分布在心肌和結(jié)締組織。心電圖表現(xiàn)主要是心肌膜的損害，表現(xiàn)為傳導(dǎo)阻滯。 過敏的損害過敏是以損害粘膜為主要表現(xiàn)的 1.皮膚科（30）：急慢性蕁麻疹、異位性皮炎等2.耳鼻咽喉科（30）：以過敏性鼻炎為主3.內(nèi)科（25）：以哮喘、過敏性肺泡炎為主4.小兒科（15）：兒童變態(tài)反應(yīng)病的診治5.變態(tài)反應(yīng)專科（參考范圍 可能存在過敏反應(yīng) 16歲

4、100 IU/ml 總IgE ELISA: 參考范圍參考范圍 可能存在總IgE ELISA: 結(jié)果解釋 總IgE 超出參考范圍大多數(shù)是由于過敏反應(yīng)導(dǎo)致例外: 寄生蟲病; 免疫抑制; HIV; 重度燒傷 臨床相關(guān)特異性IgE結(jié)果與總IgE相關(guān)的特異性IgE濃度越高，患者臨床過敏反應(yīng)的可能性就越大.總IgE ELISA: 結(jié)果解釋 總IgE 超出參考范圍大多總IgE ELISA: 結(jié)果解釋舉例特異性 IgE總IgE特異性 IgE5 IU/ml (kU/l)總IgE 200 IU/ml患者1特異性 IgE5 IU/ml (kU/l)總IgE 25 IU/ml患者2總IgE ELISA: 結(jié)果解釋舉例

5、特異性 IgE總IgE總IgE ELISA: 總結(jié)簡單和快捷的實驗操作低檢出限 (1IU/ml)高重復(fù)性 (批內(nèi)實驗: 5%) 通過4份標(biāo)準(zhǔn)品計算定量結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)品采用WHO標(biāo)準(zhǔn)通過ELISA工作站實現(xiàn)自動分析總IgE ELISA: 總結(jié)簡單和快捷的實驗操作特異性 IgE EUROLINEALLERCOATTM6DP 3713 E 吸入性及食物性過敏原DP 3713 E 吸入性及食物性過敏原特異性 IgEEUROLINE簡便和快捷的實驗操作僅需少量樣本 (過夜溫育)結(jié)果基于廣泛應(yīng)用的EAST分級系統(tǒng)與 Pharmacia CAP具有良好的相關(guān)性自動溫育 通過EUROLineScan程序?qū)崿F(xiàn)結(jié)果的自

6、動判讀簡便和快捷的實驗操作類別濃度kU/lsIgE水平臨床意義0100特高（+）特重特異性IgE分級標(biāo)準(zhǔn)及臨床意義類別濃度kU/lsIgE水平臨床意義00.35未檢出不特異性 IgEEUROLINE 血清溫育顏色反應(yīng)色原底物膜條抗原提取物溫育60 min 二抗反應(yīng)10 min 底物溫育AP標(biāo)記二抗AKP 清洗 3 x 5min 清洗 3 x 5min自動化判讀或肉眼觀察60 min未稀釋過夜1:11 稀釋顏色反應(yīng)色原底物膜條抗原提取物溫育60 min 二抗反應(yīng)10EUROLINE檢測系統(tǒng)過敏原血清學(xué)檢測培訓(xùn)課件結(jié)果判讀: EUROLineScan特異性 IgE歐蒙印跡法自動化結(jié)果判讀: EUR

7、OLineScan過敏原血清學(xué)檢測培訓(xùn)課件歐蒙印跡法過敏原譜中歐吸入兒童吸入食物特應(yīng)性交叉反應(yīng)兒童昆蟲毒液亞洲中國吸入中國食物中國特應(yīng)性韓國吸入1 + 2韓國食物1 + 2東南亞吸入東南亞食物地中海中東地中海吸入中東吸入中東食物Inhal. Screen AEFood Screen AE海灣吸入海灣食物歐蒙印跡法過敏原譜中歐亞洲地中海特異性 IgE 歐蒙印跡法各種組合 為不同過敏原組合提供可能: 在一條膜條上包被36種以上過敏原 大約170種以上過敏原 滿足新過敏原組合的需要: 市場信息反饋 目標(biāo)過敏原的定位和其它參數(shù)確認(rèn) 提供特殊過敏原的原材料 提供陽性血清 為不同過敏原組合提供可能:二、過

8、敏原常見方法學(xué)比較既往病史皮試: 刺試, 抓試, 皮外試, 皮內(nèi)試實驗室檢查: IgE檢測 CAST (細(xì)胞抗原刺激實驗)激發(fā)試驗: (金標(biāo)準(zhǔn)) - 鼻腔激發(fā)試驗 - 雙盲穩(wěn)定劑控制的食物刺激試驗 (DBPCFC)二、過敏原常見方法學(xué)比較既往病史二、過敏原常見方法學(xué)比較過敏原血清學(xué)檢測培訓(xùn)課件二、過敏原常見方法學(xué)比較類別方法特點體內(nèi)皮膚針刺試驗強(qiáng)烈反應(yīng)時容易互相混淆結(jié)果（皮內(nèi)試驗點、刺試驗或價格便宜、快速，但對過敏原的質(zhì)量控制有嚴(yán)格要求，患者痛苦，刺痕試驗） 無法避免對于高過敏體質(zhì)患者具有一定生命危險性的問題同時試驗多種抗原時，容易不同的抗原液交叉混合斑貼試驗斑貼試驗主要是檢測型變態(tài)反應(yīng)，敏感

9、程度不太高。鼻粘膜激發(fā)試驗（SNPT）患者試驗過程較痛苦無法避免對于高過敏體質(zhì)患者具有一定生命危險性的問題操作等較繁瑣食物激發(fā)試驗食物過敏檢測金標(biāo)準(zhǔn)（DBPCFC）對于食物過敏反應(yīng)嚴(yán)重的患者較危險操作麻煩，需要病床觀察患者試驗過程較痛苦體外血清學(xué)檢驗對患者來說使用安全，適合兒童，可避免強(qiáng)烈的皮膚反應(yīng)避免其它皮膚病造成的誤判使用方面，少量血清一次即可完成數(shù)十種種過敏原的檢測適用于對食物過敏的患者，效應(yīng)器官不在皮膚適用于用抗組胺類或激素類治療而不能停藥者生物共振無創(chuàng)、快速、檢測范圍廣、無創(chuàng)傷性、但該技術(shù)缺乏科學(xué)依據(jù)， 容易受到人為信號的干擾，難以建立嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)類別方法特點體內(nèi)皮膚針刺試驗強(qiáng)烈反應(yīng)時

10、容易互相混淆結(jié)果（皮體外診斷的優(yōu)勢 對患者來說不存在風(fēng)險 尤其適合5歲以下兒童，可避免強(qiáng)烈的皮膚反應(yīng) 與其它皮膚病區(qū)別 不需附加其它藥物 適合無法進(jìn)行皮試的食物過敏原的檢查 對患者來說不存在風(fēng)險二、歐蒙過敏原產(chǎn)品特性及印跡法特點同類產(chǎn)品中單一膜條內(nèi)過敏原數(shù)量最多不添加任何增效劑針對中國人設(shè)計的過敏原對患者來說不存在風(fēng)險不需停止服用抗組胺藥物獨家包被有CCD指示帶，解釋交叉反應(yīng)的假陽性結(jié)果所有廠家中樣本使用體積最?。?00ul）快速測試過敏原，整個實驗完成僅需要2.5-3小時歐蒙過敏原體外診斷的優(yōu)勢同類產(chǎn)品中單一膜條內(nèi)過敏原數(shù)量最多歐蒙過敏原體外診斷的優(yōu)勢同類產(chǎn)品中單一膜條內(nèi)過敏原數(shù)量最多可一次

11、檢測20大項，30小項過敏原同類產(chǎn)品中單一膜條內(nèi)過敏原數(shù)量最多可一次檢測20大項，30小不添加任何增效劑現(xiàn)在有些產(chǎn)品為了增大反應(yīng)強(qiáng)度，在產(chǎn)品中添加增效劑，加大了反應(yīng)強(qiáng)度。導(dǎo)致了判定結(jié)果與臨床有不符現(xiàn)象。歐蒙產(chǎn)品不添加任何增效劑，本著科學(xué)、實事求是的精神真實、準(zhǔn)確的判定實驗結(jié)果。不添加任何增效劑現(xiàn)在有些產(chǎn)品為了增大反應(yīng)強(qiáng)度，在產(chǎn)品中添加針對中國人設(shè)計的過敏原過敏原采集于中國，提高特異性檢出率DP3713-1601E（中國組合）針對中國人設(shè)計的組合針對中國人設(shè)計的過敏原過敏原采集于中國，提高特異性檢出率對患者來說不存在風(fēng)險無痛檢測：通過血清中IgE抗體與過敏原結(jié)合，測試過敏反應(yīng)避免了人體與過敏原直

12、接反應(yīng)導(dǎo)致的風(fēng)險用點刺針穿過液滴，輕輕刺入皮內(nèi) 將可疑致敏物質(zhì)敷貼于患者皮膚上斑貼試驗點刺試驗對患者來說不存在風(fēng)險無痛檢測：通過血清中IgE抗體與過敏原結(jié)不需停止服用抗組胺藥物以往過敏原檢測需要患者體檢停止服用抗組胺藥物。以便提高試驗的準(zhǔn)確性。 歐蒙過敏原檢測試劑無需患者停止服用抗組胺藥物。（常用的有苯海拉明、異丙臻、撲爾敏、賽庚啶、息斯敏、特非拉丁等 ）不需停止服用抗組胺藥物獨家包被有CCD指示帶獨家包被有CCD指示帶，解釋交叉反應(yīng)的假陽性結(jié)果CCD是“交叉反應(yīng)性碳水化合物決定因子”CCD存在于多種植物性或動物源性的過敏原中，由于結(jié)果相似性導(dǎo)致一些獨特的交叉反應(yīng)出現(xiàn)CCD的檢測對于患者提示：

13、雖然對于某些過敏原沒有臨床癥狀，但是在過敏進(jìn)程中對有些具有交叉反應(yīng)的過敏原可能會有改變，所以對于患者又針對性的預(yù)防交叉過敏反應(yīng)，有著重要的臨床指導(dǎo)意義。獨家包被有CCD指示帶獨家包被有CCD指示帶，解釋交叉反應(yīng)歐蒙印跡法的特點一次可以檢測多項過敏原8-20項，常見食物及吸入組合，如葎草，艾蒿，豚草，常見樹花粉，霉菌，塵螨， 貓毛，狗毛，蟑螂，雞蛋，牛奶，魚，蝦，蟹，花生，大豆等。適合體檢篩查。采血量少100-1000微升血清可以檢測多項，特別適合兒童患者。性價比高一次可得到多種過敏原信息譜。適合各類人群一定范圍內(nèi)脂血、溶血、黃疸血清或血漿樣本對檢測結(jié)果無影響。歐蒙印跡法的特點一次可以檢測多項過

14、敏原有配套儀器軟件可以省時省力全自動操作，判讀軟件，2.5h出結(jié)果。無需暗室孵育。半定量可以直接獲得結(jié)果可以直接用肉眼判讀，也可以用歐蒙配套軟 件判讀。EAST 分級并有數(shù)字及單位結(jié)果。易于保存原始數(shù)據(jù)結(jié)果樣式可靈活設(shè)計。結(jié)果可轉(zhuǎn)為excel 表，方便科研。歐蒙印跡法的特點有配套儀器軟件可以省時省力歐蒙印跡法的特點四、過敏原體外檢測常見問題及解答四、過敏原體外檢測常見問題及解答Q1:為何患者sIgE結(jié)果陽性與臨床表現(xiàn)不符Q1:過敏原-特異性 IgEEUROLINE 產(chǎn)品調(diào)整提供CCD檢測指標(biāo)過敏原血清學(xué)檢測培訓(xùn)課件何謂 CCDs?CCD 是“Crossreactive Carbohydrate

15、 Determinants（交叉反應(yīng)性碳水化合物決定子）”的英文縮寫. 該結(jié)構(gòu)為結(jié)合于糖蛋白N末端的多聚糖。依據(jù)糖基化作用的不同而產(chǎn)生不同的結(jié)構(gòu)。舉例: MMXF (Man1-6(Man1-3) (Xyl1-2)Man1-4GlcNAc1-4 (Fuc1-3)GlcNAc)何謂 CCDs?CCD 是“Crossreactive CCCDs 在自然界中的存在?CCDs 存在于多種植物性或動物源性的過敏原中。由于結(jié)構(gòu)的相似性導(dǎo)致一些獨特的交叉反應(yīng)出現(xiàn)。典型含CCD結(jié)構(gòu)的過敏原: 植物花粉 植物性食物 植物乳膠 昆蟲毒液CCDs 在自然界中的存在?CCDs 存在于多種植物性或動抗CCD IgE 結(jié)果

16、的臨床價值? 大部分糖蛋白僅含有一個IgE結(jié)合的多聚糖，因此無法促進(jìn)結(jié)合有IgE抗體的肥大細(xì)胞表面受體形成二聚體化，進(jìn)而無法活化肥大細(xì)胞發(fā)生脫核及釋放組胺的作用，因此對于僅為抗CCD IgE抗體陽性的患者而言往往無臨床癥狀的表現(xiàn)。抗CCD IgE 結(jié)果的臨床價值? 大部分糖蛋在何種情況下應(yīng)排除抗CCD IgE 的干擾?當(dāng)體外實驗結(jié)果與臨床癥狀或皮試結(jié)果不符的情況下.當(dāng)某一患者出現(xiàn)多個特異性IgE結(jié)果陽性時舉例: 花生: 特異性 IgE 陽性但并不表現(xiàn)出臨床癥狀出現(xiàn)多個食物相關(guān)的陽性結(jié)果但缺乏臨床癥狀表現(xiàn).植物乳膠: 針對花粉敏感的患者抗植物乳膠陽性，但無相關(guān)接觸史。 昆蟲毒液: 針對蜜蜂和馬蜂

17、特異性IgE陽性的患者可能存在交叉反應(yīng)。在何種情況下應(yīng)排除抗CCD IgE 的干擾?當(dāng)體外實驗結(jié)果與Q2:如何解釋總IgE結(jié)果與sIgE結(jié)果不符Q2:解釋1:總IgE濃度與sIgE水平并不存在必然相關(guān)性約20-30%超敏疾病患者特異性IgE可能較高，但總IgE可維持正常，甚至低于幾何均值。 如患者僅對牛奶高度過敏，其特異性IgE為18kU/L。對于特異性IgE而言，該結(jié)果已屬于嚴(yán)重過敏（IV級）的范疇。從理論上講，該患者的總IgE也應(yīng)該為18kU/L。而對于總IgE來說，這個結(jié)果是很低的；總IgE升高并不一定是超敏反應(yīng)，而過敏患者總IgE也不總是一定升高。這一要點在評價總IgE檢測結(jié)果時非常重要。 解釋1:約20-30%超敏疾病患者特異性IgE可能較高，但總結(jié)果解釋1、不同批號產(chǎn)品所使用過敏原提取物的成分