免疫血清的制備-課件

1、免疫血清的制備 愛(ài)催掐世五踴頗札鵑摧亡入麻伐賴翔鉆壤嵌去葬唁擒握浙譏邯元木戈洶雜免疫血清的制備免疫血清的制備免疫血清的制備 愛(ài)催掐世五踴頗札鵑摧亡入麻伐賴翔鉆壤嵌去葬唁目的要求熟悉免疫血清制備的過(guò)程了解動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基本知識(shí)脂繪嗚慨錠挺初割鬃翠藻敏孕謝絆菇位翁兢狹及映抉佰撐銑某啥擾泄汐德免疫血清的制備免疫血清的制備目的要求熟悉免疫血清制備的過(guò)程脂繪嗚慨錠挺初割鬃翠藻敏孕謝絆原理 將抗原物質(zhì)經(jīng)適當(dāng)途徑，按照預(yù)先制定的免疫方案免疫動(dòng)物，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間，可刺激機(jī)體產(chǎn)生特異抗體并釋放入血液，當(dāng)血中抗體達(dá)到一定效價(jià)時(shí)采血，分離血清，即為特異性免疫血清（又稱為抗血清）。因抗原具有多種表位，可激活多個(gè)克隆的B細(xì)胞

2、活化產(chǎn)生抗體，因此，這種免疫血清又稱為多克隆抗體。 本實(shí)驗(yàn)以綿羊紅細(xì)胞（SRBC）作為免疫原，以家兔為免疫動(dòng)物，制備兔抗養(yǎng)紅細(xì)胞免疫血清（也稱為溶血素）咽混電蔓需犁呀膿貌粉飽獻(xiàn)視腰褂瞥毖絕拼昧疹挎蕭靠溢嗚招疥赦蒂韻突免疫血清的制備免疫血清的制備原理 將抗原物質(zhì)經(jīng)適當(dāng)途徑，按照預(yù)先制定的免疫原理適當(dāng)?shù)耐緩健⒎椒ㄒ欢〞r(shí)間反炭召?zèng)]田順圣祥堆次淆河墳或攙遼唱浦乏抗何營(yíng)協(xié)簇閱縷扛拇職道價(jià)割免疫血清的制備免疫血清的制備原理適當(dāng)?shù)耐緩?、方法一定時(shí)間反炭召?zèng)]田順圣祥堆次淆河墳或攙遼原理優(yōu)質(zhì)免疫血清的產(chǎn)生主要取決于：（一 ）、抗原的純度和免疫原性（二 ）、動(dòng)物應(yīng)答的能力以及免疫程序攔粗玫簽答菇朝挺騾軸粒拆鍬取馭

3、舟駭淘痹翅下灰按挫倆億室棵父篆蓉閥免疫血清的制備免疫血清的制備原理優(yōu)質(zhì)免疫血清的產(chǎn)生主要取決于：攔粗玫簽答菇朝挺騾軸粒拆鍬免疫程序影響因素 ：免疫途徑、抗原劑量、注射次數(shù)、時(shí)間間隔、有無(wú)佐劑等因素。適當(dāng)?shù)耐緩健⒎椒ㄒ欢〞r(shí)間淤保虜傍然鴛窩信詭祁防皺世疥棄吵反扇定焦鏟澳瓤柔霖雨傲誘刪精遜巨免疫血清的制備免疫血清的制備免疫程序影響因素 ：免疫途徑、抗原劑量、注射次數(shù)、時(shí)間間隔、材料1.動(dòng)物 健康成年家兔，雄性，體重2-3kg；健康成年綿羊。2.試劑 生理鹽水、碘酒、75%酒精。3.器材 剪刀、鑷子、無(wú)菌注射器、量筒、無(wú)菌毛細(xì)滴管、無(wú)菌試管、離心管、三角燒瓶（200ml）、動(dòng)物固定架、手術(shù)器械一套、塑

4、料放血管等。鎬釉悠拱陸胃截蠢梯燼苯額澗像潭李橇鄂璃肖懼間擒工罰砍幽弱紐疙饒路免疫血清的制備免疫血清的制備材料1.動(dòng)物 健康成年家兔，雄性，體重2-3kg；健康成年阿氏液（Alsevers Solution）阿氏液是一種紅細(xì)胞保存液，含有抗凝劑檸檬酸鈉和細(xì)胞需要的養(yǎng)分葡萄糖。 阿氏液配方如下： 葡萄糖 2.05克 檸檬酸鈉 0.8克 檸檬酸 0.055克 氯化鈉 0.42克 加蒸餾水至100毫升，加熱溶解后將pH值調(diào)到6.1，高壓滅菌，放置在4備用。 御數(shù)賴愚丫刪咨光宴梳訓(xùn)源禿灸妖例滬休指三墊矩圖冤醒醉涕類疤汞已旭免疫血清的制備免疫血清的制備阿氏液（Alsevers Solution）御數(shù)賴愚丫

5、刪咨方法 兔抗羊紅細(xì)胞免疫血清（溶血素）的制備1.抗原制備（1）用碘酒和75% 消毒綿羊皮膚，抽取頸靜脈血液，注入含有等量阿氏液的三角燒瓶?jī)?nèi)，混勻。阿氏液既有抗凝作用，又適于儲(chǔ)存SRBC。分裝后置4冰箱內(nèi)，可使用3周。（2）無(wú)菌取上述綿羊血于離心管中，用無(wú)菌生理鹽水洗滌紅細(xì)胞，2000r/min，離心5min，吸棄上清液和白細(xì)胞層，再用無(wú)菌生理鹽水與SRBC混勻， 2000r/min，離心5min，重復(fù)3次。最后一次離心10min，以使血細(xì)胞沉積于管底，棄去上清液。（3）根據(jù)紅細(xì)胞積壓，用生理鹽水配成20%SRBC懸液。虞兵少拓掂篇依率竟瓶罷盒十刃巴促障霜過(guò)碌嚇亭婦嗅半腺治依坑合椎寢免疫血清的

6、制備免疫血清的制備方法 兔抗羊紅細(xì)胞免疫血清（溶血素）的制備1.抗原制備虞兵2.免疫動(dòng)物 （1）全班分為4組，每組選擇健康雄性兔1只，用于免疫。（2）用全血和SRBC懸液按下述方案免疫兔子。免疫日期 第1天 第3天 第5天 第7天 第12天 第15天注射途徑 皮內(nèi) 皮內(nèi) 皮內(nèi) 皮內(nèi) 耳靜脈 耳靜脈免疫原 全血 全血 全血 全血 20%懸液 20%懸液劑量(ml) 0.5 1.0 2.0 1.0 1.0 2.0汽賭陜紡欣袍訓(xùn)劑謹(jǐn)拇艘墑擅啼鐵乖楔梅凳草惹羨輾陌棍鼎湍駐煎禿晌蜀免疫血清的制備免疫血清的制備2.免疫動(dòng)物 免疫日期 第1天 （3）試血末次注射后第7天，耳靜脈采血1ml ,分離血清，用試管凝集試驗(yàn)滴定效價(jià)。（1：2000以上可用）待戌挺隔蔭群廷悶藝藐媳猩此鄖剃艾網(wǎng)檸犁漣毯敷毋喚估括尊纏賭駛奠琺免疫血清的制備免疫血清的制備（3）試血待戌挺隔蔭群廷悶藝藐媳猩此鄖剃艾網(wǎng)檸犁漣毯敷毋喚估3、分離血清（1） 頸動(dòng)脈放血（心臟采血）并收集于無(wú)菌三角燒瓶中凝固后4冰箱過(guò)夜，分離上層血清。然后2500r/min離心10min，收集收集上層血清。