生化實(shí)驗(yàn)-血糖的測(cè)定(課堂)課件

1、血糖的測(cè)定12020/3/25血糖的測(cè)定12020/3/25正常人空腹血糖濃度是多少？為何能保持恒定？糖尿病22020/3/25正常人空腹血糖濃度是多少？22020/3/25正常人空腹血糖濃度(fasting plasma glucose,FPG)為 3.89-6.11 mmol/L。32020/3/25正常人空腹血糖濃度(fasting plasma gluco血糖如何維持穩(wěn)定？關(guān)鍵酶調(diào)節(jié)關(guān)鍵酶如何調(diào)節(jié)：激素調(diào)節(jié)。常見(jiàn)的升高血糖的激素：胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和腎上腺素。降低血糖的激素：胰島素42020/3/25血糖如何維持穩(wěn)定？關(guān)鍵酶調(diào)節(jié)關(guān)鍵酶如何調(diào)節(jié)：激素調(diào)節(jié)。420對(duì)糖代謝的調(diào)節(jié)：胰島素

2、促進(jìn)組織、細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取和利用，加速葡萄糖合成為糖原，貯存于肝和肌肉中，并抑制糖異生，促進(jìn)葡萄糖轉(zhuǎn)變?yōu)橹舅?，貯存于脂肪組織，導(dǎo)致血糖水平下降。胰島素缺乏時(shí)，血糖濃度升高，如超過(guò)腎糖閾，尿中將出現(xiàn)糖，引起糖尿病。胰島素是促進(jìn)合成代謝、調(diào)節(jié)血糖穩(wěn)定的主要激素5對(duì)糖代謝的調(diào)節(jié)：胰島素促進(jìn)組織、細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取和利用，加62020/3/2562020/3/25如果調(diào)節(jié)失衡，結(jié)果是什么？高血糖或者低血糖。低血糖：生理性和病理性。低于2.8 mmol/L。高血糖：生理性和病理性。高于7.1 mmol/L。高于8.89 mmol/L，出現(xiàn)糖尿。最常見(jiàn)病理性高血糖：糖尿病。糖尿病：高血糖和糖尿。臨床特

3、點(diǎn)：三多一少。病因：胰島素分泌缺陷和胰島素受體缺陷。糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)？7如果調(diào)節(jié)失衡，結(jié)果是什么？高血糖或者低血糖。高血糖：生理性和 糖尿病（diabetes）是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機(jī)體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征，臨床上以高血糖為主要特點(diǎn)，典型病例可出現(xiàn)多尿、多飲、多食、消瘦等表現(xiàn)，即“三多一少”癥狀，糖尿病（血糖）一旦控制不好會(huì)引發(fā)并發(fā)癥，導(dǎo)致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且無(wú)法治愈。 8 糖尿病（diabetes）是由遺傳因素、免疫糖尿病的類型型糖尿病又叫青年發(fā)病型

4、糖尿病或胰島素依耐型糖尿病。原因：胰腺產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞已經(jīng)徹底損壞,從而完全失去了產(chǎn)生胰島素的功能.治療：依賴胰島素治療。型糖尿病又叫非胰島素依耐型糖尿病。原因：自身能夠產(chǎn)生胰島素，但細(xì)胞無(wú)法對(duì)其作出反應(yīng)，使胰島素?zé)o法發(fā)揮作用。治療：需要胰島素單獨(dú)或與口服藥聯(lián)合應(yīng)用的治療9糖尿病的類型型糖尿病型糖尿病91010一般正常人進(jìn)食后血糖都會(huì)暫時(shí)性升高，進(jìn)食后30分種或60分種可升到最高峰，但血糖一般不超過(guò)8.9 mmol/L；進(jìn)食2小時(shí)后又會(huì)回到空腹水平，這就是人體對(duì)糖的耐受現(xiàn)象。什么是口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（Oral glucose tolerance test， OGTT）？有何臨床意義？11202

5、0/3/25一般正常人進(jìn)食后血糖都會(huì)暫時(shí)性升高，進(jìn)食后30分種或60分種口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（Oral glucose tolerance test， OGTT）是一種口服葡萄糖負(fù)荷試驗(yàn)，用以了解人體對(duì)進(jìn)食葡萄糖后的血糖調(diào)節(jié)能力。通過(guò)OGTT試驗(yàn)，可以早期發(fā)現(xiàn)糖代謝異常，早期診斷糖尿病(Diabetes Mellitus, DM) ，是一種簡(jiǎn)單、快捷的診斷方法。122020/3/25口服葡萄糖耐量試驗(yàn)（Oral glucose toleran 實(shí)驗(yàn)前三天，受試者每日食物中糖含量不應(yīng)低于150g，且維持正常活動(dòng)，影響試驗(yàn)的藥物應(yīng)在三天前停用，受試前應(yīng)空腹10-15h。 空腹取血后，5分鐘內(nèi)飲入25

6、0ml含75g無(wú)水葡萄糖的糖水，妊娠婦女用量為100g，兒童按1.75g/kg體重給予,不超過(guò)75g。 服糖后半小時(shí)，1小時(shí)，2小時(shí)，3小時(shí)各抽血一次，作血糖定量檢測(cè)。于采血同時(shí)，每隔1小時(shí)留取尿液作尿糖試驗(yàn)，整個(gè)過(guò)程不可吸煙，喝咖啡，喝茶或進(jìn)食。OGTT方法：WTO標(biāo)準(zhǔn)化132020/3/25 實(shí)驗(yàn)前三天，受試者每日食物中糖含量不應(yīng)低于150g，且維測(cè)試前禁食10-16小時(shí)，清晨空腹進(jìn)行?？崭钩殪o脈血，測(cè)空腹靜脈血漿葡萄糖，然后成人口服75 g無(wú)水葡萄糖，溶于250 ml水中，510分鐘內(nèi)飲完。飲后2小時(shí)抽靜脈血，測(cè)靜脈血漿葡萄糖。142020/3/25測(cè)試前禁食10-16小時(shí)，清晨空腹進(jìn)行

7、?？崭钩殪o脈血，測(cè)空腹IFG 與 IGT空腹血糖損傷(Impaired Fasting Glucose, IFG)：空腹血糖6.1mmol/L,但7.0mmol/L糖耐量受損(Impaired Glucose Tolerance, IGT)：餐后2h血糖7.8mmol/L,但11.1mmol/L IFG 和IGT可以說(shuō)是一種正常人向糖尿病的過(guò)渡狀態(tài)，這部分人雖然現(xiàn)在還不是糖尿病， 但是將來(lái)發(fā)生2型糖尿病的危險(xiǎn)性非常高，可以說(shuō)是糖尿病的后備軍。據(jù)有關(guān)研究報(bào)道，每年5-8%的IGT者將發(fā)展成為2型糖尿病。 152020/3/25IFG 與 IGT空腹血糖損傷(Impaired Fasti無(wú)糖尿病史

8、，空腹或者隨機(jī)血糖異常無(wú)糖尿病史，有一過(guò)性或持續(xù)性糖尿無(wú)糖尿病史，有明顯糖尿病家族史有糖尿病癥狀，但空腹或者隨機(jī)血糖不夠標(biāo)準(zhǔn)分娩巨大胎兒的婦女和有巨大胎兒史的個(gè)體不明原因腎病和視網(wǎng)膜病妊娠期、甲亢、感染期出現(xiàn)糖尿者OGTT的適應(yīng)癥16無(wú)糖尿病史，空腹或者隨機(jī)血糖異常OGTT的適應(yīng)癥16血糖測(cè)定方法無(wú)機(jī)化學(xué)法：如Folin-Wu法有機(jī)化學(xué)法：如鄰甲苯胺法酶法：己糖激酶法，酶法：葡萄糖氧化酶法172020/3/25血糖測(cè)定方法無(wú)機(jī)化學(xué)法：如Folin-Wu法172020/3原理葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使 Cu2+還原成Cu+ ，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍(lán)色的鉬藍(lán)。通過(guò)比色法測(cè)定藍(lán)色化合物

9、，計(jì)算出血糖的含量 穩(wěn)定、準(zhǔn)確、但對(duì)葡萄糖無(wú)特異性，受血中非糖還原物質(zhì)的影響。空腹正常血糖參考值 4.46.7mmol/L或80-120mg/dL無(wú)機(jī)化學(xué)法：Folin-Wu法18原理葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使 Cu2+還原成Cu有機(jī)化學(xué)法：鄰甲苯胺法原理：葡萄糖為一含醛基的已糖，在酸性條件下加熱，可脫水生成5-羥甲基-2-呋喃甲醛，后者與鄰甲苯胺縮合成青色的Schiff堿。Schiff堿顏色的深淺與樣品中葡萄糖的含量成正比。評(píng)價(jià)：操作簡(jiǎn)便，由于鄰甲苯胺只與醛糖作用而顯色，故此種測(cè)定法不受血液中其他還原物質(zhì)的干擾，測(cè)定時(shí)也無(wú)需去除血漿或血清中的蛋白質(zhì)，因此該實(shí)驗(yàn)的特異性較高。19有機(jī)

10、化學(xué)法：鄰甲苯胺法原理：19酶法：己糖激酶法（Hexokinase, HK）原理：NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加與標(biāo)本中的葡萄糖濃度成正比。評(píng)價(jià)：本法特異性高，靈敏度高，干擾因素少，適用于自動(dòng)化分析，為葡萄糖測(cè)定的參考方法，但是試劑較貴。20酶法：己糖激酶法（Hexokinase, HK）原理：NA酶法：葡萄糖氧化酶法（glucose oxidase, GOD）葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，并釋放過(guò)氧化氫。過(guò)氧化氫在過(guò)氧化物酶 (peroxidase，POD)作用下，分解為水和氧的同時(shí)將無(wú)色的4-氨基安替比林與酚氧化縮合生

11、成紅色的醌類化合物。紅色的深淺在一定范圍內(nèi)與葡萄糖濃度成正比，在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)管比較可計(jì)算出血糖的濃度。 21酶法：葡萄糖氧化酶法（glucose oxidase, GO葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶法原理（1）葡萄糖O2H2O葡萄糖氧化酶（GOD）（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚葡萄糖酸H2O2H2O 紅色醌式物質(zhì)過(guò)氧化物酶（POD）Trinder反應(yīng)505nm光吸收法測(cè)定相對(duì)血糖濃度22葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶法原理（1）葡萄糖O2H2O葡萄實(shí)驗(yàn)試劑0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0)酶試劑 取過(guò)氧化物酶12000U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，

12、疊氮化鈉100mg，溶于磷酸緩沖液80ml中，定容至100ml，置4保存酚溶液 稱取重蒸餾酚100mg溶于蒸餾水100ml中，用棕色瓶貯存。酶酚混合試劑 將酶試劑和酚試劑等量混合，4 下可存放1個(gè)月。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作液：5mmol/L 232020/3/25實(shí)驗(yàn)試劑0.1mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.0)23202實(shí)驗(yàn)操作加入物 BST血清(ml)0.01葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(ml)0.01蒸餾水(ml)0.01工作液(ml)1.01.01.0 混勻，置 37 水浴保溫 15分鐘，每管加蒸餾水0.5 ml，在510nm波長(zhǎng)處比色，以空白管（B管）調(diào)零，讀取各管吸光度。根據(jù)各管吸光度計(jì)算其血糖濃度。 2

13、42020/3/25實(shí)驗(yàn)操作加入物 BST血清(ml)0.01葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(葡萄糖氧化酶法可直接測(cè)定腦脊液的葡萄糖含量，但不能直接測(cè)定尿液葡萄糖含量。這是因?yàn)槟蛞褐械哪蛩岬雀蓴_物質(zhì)濃度過(guò)高，可干擾過(guò)氧化物酶反應(yīng)，造成結(jié)果假性偏低。對(duì)于血液樣品需及時(shí)分離紅細(xì)胞。因?yàn)榧t細(xì)胞的酵解將會(huì)導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏低。建議測(cè)定樣品以草酸鉀-氟化鈉為抗凝劑以抑制糖酵解。注意事項(xiàng)252020/3/25葡萄糖氧化酶法可直接測(cè)定腦脊液的葡萄糖含量，但不能直接測(cè)定尿嚴(yán)重黃疸、溶血及乳糜樣血清先制備無(wú)蛋白血濾液，然后在進(jìn)行測(cè)定。酶酚混合液一般現(xiàn)用現(xiàn)配。 葡萄糖氧化酶對(duì) - D 葡萄糖高度特異，溶液中的葡萄糖約 36% 為 型，

14、 64% 為 型。葡萄糖的完全氧化需要 型到 型的變旋反應(yīng)。葡萄糖變旋酶，可加速這一反應(yīng)，延長(zhǎng)孵育時(shí)間可達(dá)到完成自發(fā)變旋過(guò)程。新配制的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液主要是 型，故須放置 2h 以上 ( 最好過(guò)夜 ) ，待變旋平衡后方可應(yīng)用。 注意事項(xiàng)26嚴(yán)重黃疸、溶血及乳糜樣血清先制備無(wú)蛋白血濾液，然后在進(jìn)行測(cè)定計(jì)算：葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：5 mmol/L血清葡萄糖（mmol/L）=AT/AS CS參考值： 3.96.1 mmol/L272020/3/25計(jì)算：葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液：5 mmol/L參考值： 3.96.1不同檢測(cè)方法所提供的空腹正常血糖參考值存在差異。葡萄糖氧化酶法：3.96.1mmol/LFolin-Wu法：4.46.7mmol/L鄰-甲苯胺法：3.96.1mmol/L28不同檢測(cè)方法所提供的空腹正常血糖參考值存在差異。28本法測(cè)定葡萄糖非常特異，從原理反應(yīng)式中可知第一步是特異反應(yīng)，第二步特異性較差。誤差往往發(fā)生在反應(yīng)的第二步。一些還原性物質(zhì)如尿酸、維生素 C 、膽紅素和谷胱甘肽等，可與色原性物質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)過(guò)氧化氫，從而消耗反應(yīng)過(guò)程中所產(chǎn)生的過(guò)氧化氫，產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制，使測(cè)定結(jié)果偏低。但是對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著影響。實(shí)驗(yàn)誤差分析：29本法測(cè)定葡萄糖非常特異，從原理反應(yīng)式中可知第一步是特異反應(yīng)，葡萄糖氧化酶法：該法特異性高，反應(yīng)條件溫和，能反映血中葡萄糖的真實(shí)含量，且已