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文檔簡介

第二章

基因工程制藥

DNA分子中含有特定遺傳信息的一段核苷酸序列,是遺傳物質(zhì)的最小功能單位?；仡櫍夯蚬こ痰幕A(chǔ)知識一、基因的概念:二、基因工程技術(shù)是將目的基因插入載體，拼接、轉(zhuǎn)入新的宿主細胞，構(gòu)建成工程菌(或細胞），實現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合，并使目的基因在工程菌內(nèi)進行復(fù)制和表達的技術(shù)。第二節(jié)基因工程藥物生產(chǎn)的基本過程

（掌握）⒈目的基因的克?、矘?gòu)建DNA重組體⒊DNA重組體轉(zhuǎn)入宿主菌⒋構(gòu)建工程菌⒌工程菌發(fā)酵⒍表達產(chǎn)物的分離純化⒎產(chǎn)品的檢驗等基因工程藥物制藥的主要程序上游階段：

下游階段：一目的基因的獲得

一、反轉(zhuǎn)錄法反轉(zhuǎn)錄法就是分離純化目的基因的RNA，再反轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后進行cDNA克隆表達。二、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）

RT-PCR是將以RNA為模板的cDNA合成同PCR結(jié)合在一起，該法是mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，在以隨機引物、oligo(dT)或基因特異性的引物（GSP）起始協(xié)助下，PCR擴增，特異性的合成目的cDNA鏈（目的基因）。三、化學(xué)合成法

合成目的基因DNA不同部位的兩條鏈的寡核苷酸短片段，再退火成為兩端形成粘性末端的DNA雙鏈片段，然后將這些雙鏈片段按正確的次序進行退火連接成較長的DNA片段，再用連接酶連接成完整的基因。

基因表達是指結(jié)構(gòu)基因在生物體中的轉(zhuǎn)錄、翻譯以及所有加工過程。

二基因的表達克隆載體表達載體受體細胞（菌）表達系統(tǒng)：基因工程中用來獲得有功能的異源蛋白質(zhì)的體系常用表達載體--質(zhì)粒pBV220的結(jié)構(gòu)融合表達質(zhì)粒pBG-2的結(jié)構(gòu)1.分批培養(yǎng)2.補料分批培養(yǎng)3.連續(xù)培養(yǎng)4.透析培養(yǎng)5.固定化培養(yǎng)三工程菌的培養(yǎng)

發(fā)酵液細胞分離胞內(nèi)產(chǎn)物胞外產(chǎn)物細胞破碎固液分離濃縮初步分離高度純化制劑產(chǎn)品包含體細胞碎片分離變性復(fù)性四基因工程藥物的分離純化五基因工程藥物的質(zhì)量控制一、生物

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