分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件

分子診斷臨床應(yīng)用進展上海市臨床檢驗中心分子診斷臨床應(yīng)用進展主要內(nèi)容分子診斷概念的演變分子診斷技術(shù)的分類基于雜交基礎(chǔ)的分子診斷技術(shù)及其應(yīng)用基于擴增基礎(chǔ)的分子診斷技術(shù)及其應(yīng)用基于測序基礎(chǔ)的分子診斷技術(shù)及其應(yīng)用分子診斷應(yīng)用前景展望主要內(nèi)容多聚酶鏈式反應(yīng)(PCR:PolymeraseChainReaction)Polymerase:DNA聚合酶多聚酶鏈式反應(yīng)“鏈式反應(yīng)”改變世界核裂變鏈式反應(yīng)“鏈式反應(yīng)”改變世界分子診斷概念的變化分子診斷:應(yīng)用分子生物學(xué)方法檢測患者體內(nèi)遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)或表達水平的變化而做出診斷的技術(shù),稱為分子診斷。分子診斷是預(yù)測診斷的主要方法,既可以進個體遺傳病的診斷,也可以進行產(chǎn)分子診斷的材料包括DNA、RNA和基因診斷:又稱DNA診斷或分子診斷,通過分子生物學(xué)和遺傳學(xué)的技術(shù),直接檢測出分子結(jié)構(gòu)水平和表達水平是否異常,從而對疾病做出判斷分子生物學(xué):從分子水平上研究生命現(xiàn)象物質(zhì)基礎(chǔ)的學(xué)科。研究細胞成分的物理化學(xué)的性質(zhì)和變化以及這些性質(zhì)和變化與生命現(xiàn)象的關(guān)系,如遺傳信息的傳遞基因的結(jié)構(gòu)、復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯、表達調(diào)控和表達產(chǎn)物的生理功能,以及細胞信的分子診斷概念的變化分子診斷技術(shù)的分類根據(jù)目的基因是否被放大分類可分為雜交法和擴增法根據(jù)被測基因的核酸類型分類Southern印跡用于檢測DNA;Northern印跡用于檢測RNA;斑點印跡或稱斑點雜交,既可檢測DNA也可檢測RNA根據(jù)診斷目的或要求分為定性診斷、定量診斷和半定量診斷,以及序列分析等根據(jù)分子之間的作用形式雜交、擴增、測序分子診斷技術(shù)的分類基于分子雜交的分子診斷技術(shù)及其應(yīng)用兩條同源核酸分子(DNA或RNA)可以在堿基互補的原則下形成異質(zhì)雙鏈是遺傳物質(zhì)最重要的化學(xué)特征過程亦被稱為分子雜交(molecularhybridization)分子雜交是所有分子生物學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ),從最初的印跡雜交(southernblot和northernblot)到實時PCR(realtimePCr),從基因芯片再到高通量的DNA測序技術(shù),都離不開堿基互補的分子雜交反應(yīng)。而且在理論上可以特異性相互作用的兩個不同分子,例如核酸與核酸之間(AG、GC)、蛋白與蛋白之間(抗原和抗體)甚至核酸和蛋白之間(適體與多肽)的相互作用都可以視為分子雜交的不同表現(xiàn)模式因此,廣義的分子雜交技術(shù)是指以核酸、蛋白、糖基以及細胞、代謝物等分子的相互作用所建立的分析方法。目前臨床應(yīng)用的以分子雜交技術(shù)為基礎(chǔ)的診斷技術(shù)繁多,缺乏統(tǒng)的分類方法,但是可以根據(jù)實驗方法的差異分為主要的兩種類型,一類是通過特異性的標記探針檢測檢測細胞內(nèi)的核酸物質(zhì),而另一類是通過探針檢測從細胞內(nèi)提取的核酸、蛋白等物質(zhì),前者以原位雜交及其衍生的技術(shù)為主,后者以生物芯片及其衍生的技術(shù)為主基于分子雜交的分子診斷技術(shù)及其應(yīng)用熒光原位雜交(F|SH)位雜交應(yīng)用特異性的探針檢測細胞內(nèi)的核酸需要標記分子顯示雜交信號,19605年代的檢測技術(shù)是放射性核素標記,信號檢測程序復(fù)雜并且可能存在放射性物質(zhì)的污染,而熒光物質(zhì)標記可以通過顯微鏡直接觀察實驗結(jié)果,因此熒光標記的原位雜交技術(shù)(Fluorescentinsituhybridiztio,FSH)經(jīng)出現(xiàn)立刻取代了放射性標記的技術(shù),成為應(yīng)用最廣泛的分子雜交技術(shù)。FSH技術(shù)通過熒光標記探針,可以可視化的檢測人類細胞或組織中特定基因的數(shù)量及其定位,是分子雜交與細IFSH技術(shù)的分析過程分為四個步驟,核酸變性、探針變性、雜交及信號檢測。因此,針對探針標記、染料開發(fā)和圖像分析的技術(shù)的更新是FISH分析技術(shù)發(fā)展的主要路徑熒光原位雜交(F|SH)熒光原位雜交衍生技術(shù)首先是熒光染料的應(yīng)用,從最初的單色FTC應(yīng)用,發(fā)展到使用多種熒光染料的多色FSH技術(shù),既多元熒光原位雜交和光譜核型分析技術(shù),使用五種染料(Rhodamine,Texas-red,Cy5.FTC,andCy55)標記的探針可以在一次試驗中定位多種不同的基因以及使用不同的顏色標記顯示24條不同的染色體其次,在探針方面,染色體臂、著絲粒、端粒特異的探針被先后開發(fā)應(yīng)用,而且應(yīng)用微切割技術(shù)切割技術(shù)制備亞區(qū)域探針(microFISH),使FSH的基因定位和分辯率大大提高同時,探針標記對象和標記技術(shù)的發(fā)展不斷衍生出新的FSH技術(shù),例如比較基因組雜交、引物原位標記技術(shù)、肽核酸探針原位雜交、物種交叉熒光原位雜交、纖在圖像與信號分析方面,應(yīng)用高分辨率CCD攝像機和計算機自動圖像分析系統(tǒng)獲得廣泛應(yīng)用,而SKY結(jié)合傅立葉頻譜技術(shù),同時計量可見光和近紅外范圍內(nèi)的所有點的發(fā)射頻譜而一次成像熒光原位雜交衍生技術(shù)熒光原位雜交結(jié)果0Table1.Selectedmilestonesinthedevelopmentofmulti-targetFISHFirslinsiteSingeranlWarl、1%82dopmanetal.Nederlofetal1989colorcoding(M-FISH)enskyetal.2019ComhinationsandratiosIOOBRAITankeetal2019eJoumalofcellScence2019:116(14)熒光原位雜交結(jié)果分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的應(yīng)用進展48張課件分子診斷技術(shù)的