血凝儀的工作原理課件

BE血凝儀的工作原理、使用和保養(yǎng)一、血凝儀的工作原理二、血凝儀的應(yīng)用三、BE血凝儀的使用和保養(yǎng)一、血凝儀的工作原理目前開(kāi)展的血栓/止血成份檢測(cè)的主要方法有凝固法、底物顯色法、免疫法、乳膠凝集法等。在血栓/止血檢驗(yàn)中最常用的凝血酶原時(shí)間（PT）、活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）、纖維蛋白原（FIB）、凝血酶時(shí)間（TT）、內(nèi)源凝血因子、外源凝血因子、高分子量肝素、低分子量肝素、蛋白C、蛋白S等均可用凝固法測(cè)量。所以目前半自動(dòng)血凝儀基本上都是以凝固法測(cè)量為主，而在全自動(dòng)血凝儀中也一定有凝固法測(cè)量。

凝固法中又可分為光學(xué)法和磁珠法兩類。由于光學(xué)法幾乎可涵蓋各種檢測(cè)方法，為了降低儀器制造成本，全自動(dòng)血凝儀以光學(xué)法居多。但也有少數(shù)高級(jí)全自動(dòng)血凝儀中凝固法測(cè)量采用無(wú)樣品干擾的雙磁路磁珠法，而其它測(cè)量采用光學(xué)法，并可同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。

1.血凝儀的檢測(cè)原理對(duì)第二代的傳統(tǒng)的光學(xué)原理血凝儀容易受到標(biāo)本的黃疸、脂血、乳糜血等的影響。對(duì)第三代的雙磁路磁珠法原理的血凝儀在現(xiàn)今社會(huì)血黏度增高的趨勢(shì)下也非常容易受到標(biāo)本黏度變化的影響。第四代光電磁原理由此出現(xiàn)。第一代，電流法：即是將待檢樣品作為電路的一部分，由于纖維蛋白具有導(dǎo)電性，可利用電流的斷與否來(lái)判斷纖維蛋白的形成與否，即判斷凝固終點(diǎn)。具體表現(xiàn)為：將兩電極插入待檢樣品，其中一個(gè)電極可以上下運(yùn)動(dòng)。當(dāng)兩個(gè)電極都在血漿中的時(shí)候，電路是連通的；當(dāng)其中一個(gè)電極向上運(yùn)動(dòng)離開(kāi)血漿時(shí)，電路時(shí)斷開(kāi)的。往血漿中加入激活劑，血漿中纖維蛋白形成，此時(shí)可運(yùn)動(dòng)電極向上運(yùn)動(dòng)時(shí)，可勾起纖維蛋白絲。由于纖維蛋白絲是導(dǎo)電的，故此電路仍可連通，此時(shí)儀器即可將其判為凝固終點(diǎn)。第三代，磁珠法：磁珠法是根據(jù)血漿凝固過(guò)程中粘度的變化來(lái)測(cè)量凝血功能的。根據(jù)儀器對(duì)磁珠運(yùn)動(dòng)測(cè)量原理的不同，又可分為光電探測(cè)法和電磁珠探測(cè)法。（1）光電探測(cè)法：在磁珠法中光電探測(cè)器的作用與光學(xué)中的不同，它只測(cè)量血漿凝固過(guò)程中磁珠的運(yùn)動(dòng)規(guī)律，與血漿的濁度無(wú)關(guān)。在磁珠法中的一對(duì)電磁鐵安放在測(cè)試杯的兩端，它們產(chǎn)生恒定的交替磁場(chǎng)使磁珠在測(cè)試杯中擺動(dòng)，在與磁珠擺動(dòng)的垂直方向安放一對(duì)光電接收裝置，在磁珠擺幅衰減到50%時(shí)確定凝固終點(diǎn)。（2）電磁探測(cè)法：電磁探測(cè)法又可稱為雙磁路磁珠法，其中一對(duì)磁路用于吸引磁珠擺動(dòng)，另一對(duì)磁路利用磁珠擺動(dòng)過(guò)程中對(duì)磁力線的切割所產(chǎn)生的電信號(hào)，對(duì)磁珠擺動(dòng)幅度進(jìn)行監(jiān)控，當(dāng)磁珠擺動(dòng)幅度衰減到50%確定凝固終點(diǎn)。第四代，光電磁法：綜上所述，前三代的檢測(cè)原理都是終點(diǎn)法，即在檢測(cè)前設(shè)置一個(gè)檢測(cè)的終點(diǎn)，一旦達(dá)到檢測(cè)停止的指標(biāo)即判斷凝血，這受到很多限制，無(wú)論是標(biāo)本還是實(shí)驗(yàn)環(huán)境的改變都會(huì)引起檢測(cè)的失準(zhǔn)。第四代的光電磁原理結(jié)合了光學(xué)法和磁珠法之優(yōu)點(diǎn)的第四代原理，測(cè)試杯中放有磁珠，測(cè)試時(shí)，測(cè)試杯下面的永久磁鐵旋轉(zhuǎn)，帶動(dòng)杯中磁珠沿杯壁旋轉(zhuǎn)。測(cè)試杯的側(cè)壁外安裝有紅外反射式光電器件監(jiān)視磁珠運(yùn)動(dòng)變化。根據(jù)運(yùn)動(dòng)力學(xué)原理當(dāng)血漿粘度增大后，旋轉(zhuǎn)的磁珠將向杯中心靠攏，光電器件檢測(cè)不到磁珠時(shí)檢測(cè)結(jié)束。2.BE血凝儀的整個(gè)反應(yīng)過(guò)程可以分為三個(gè)階段：一、不穩(wěn)定期：也就是標(biāo)本和實(shí)際進(jìn)行了混勻之后并未完全進(jìn)行反應(yīng)的過(guò)程，這個(gè)階段的變化比較大，兩條綠線相差比較大，并逐漸的靠攏。反應(yīng)曲線（紫線）在兩條綠線之間行走。二、穩(wěn)定期：標(biāo)本和試劑完全的混勻之后開(kāi)始進(jìn)行了化學(xué)反應(yīng)（整個(gè)反應(yīng)過(guò)程完全的處在模擬的人體生理環(huán)境下），兩條綠線動(dòng)態(tài)的開(kāi)閉，但是趨近于一個(gè)平臺(tái)，我們平時(shí)俗稱為平臺(tái)期，這期間未出現(xiàn)明顯的凝血，而紫線也相對(duì)穩(wěn)定的走形。三、凝血期：這時(shí)候紫線發(fā)生了迅速的變化，也就是出現(xiàn)了反應(yīng)的質(zhì)變，穿透平臺(tái)期，出現(xiàn)凝血。這時(shí)候引入微積分概念，在整個(gè)紫線上每一點(diǎn)做切線，而切線斜率變化最大的一點(diǎn)也就是ΔA最大的一點(diǎn)即為凝血點(diǎn)。二、血凝儀的應(yīng)用一、術(shù)前常規(guī)檢查（出血危險(xiǎn)過(guò)篩試驗(yàn)）：1.凝血酶原時(shí)間測(cè)定（PT）；2.活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定（APTT）；3.凝血酶時(shí)間測(cè)定（TT）；4.纖維蛋白原含量測(cè)定（FIB）；5.血小板計(jì)數(shù)（PLT）；三、抗凝治療的監(jiān)測(cè)；四、口服抗凝劑治療（OAT）的監(jiān)測(cè)：PT實(shí)驗(yàn)是最常用的檢測(cè)，用于監(jiān)測(cè)由口服抗凝藥物（香豆素/華法令之類）引起的維生素K依賴性因子II、VII和X功能性水平變化。血漿凝血酶原時(shí)間比率（PTR）1.5-2.0國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比率（INR）2.0-3.0五、肝素治療的監(jiān)測(cè)：1.APTT：適用于肝素監(jiān)測(cè)，但對(duì)不僅僅是肝素引起的凝血異常同樣敏感，如：肝素、OAT重疊治療或溶栓治療。2.肝素水平：特異的抗Xa因子試驗(yàn)，是具備國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化的特異性試驗(yàn)。3.血小板計(jì)數(shù)：用來(lái)判斷任何肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥（HIT）4.ATIII：為防止肝素抵抗，需要檢查有否抗凝血酶缺乏。六、溶栓治療的監(jiān)測(cè)：1.纖維蛋白原(FIB)；2.凝血酶時(shí)間（TT）；3.纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物（FDPs）。七、DIC的診斷：1.D-二聚體（D-Dimer）；2.纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物（FDPs）；3.抗凝血酶III（AT-III）；4.凝血酶原時(shí)間（PT）；5.活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）；6.纖維蛋白原含量（FIB）。二、BE血凝儀的保養(yǎng)：1.機(jī)械保養(yǎng)：定期的潤(rùn)滑加樣臂；2.液路保養(yǎng)：定期的完成特殊洗針的周保養(yǎng)程序（無(wú)須拆卸，儀器自帶有此程序）；3.光路保養(yǎng)：使用清潔棒擦拭測(cè)量頭的光學(xué)部分。三、BE血凝儀的常見(jiàn)故障分析及其解決方法：1.出現(xiàn)“nocommunication”（無(wú)通訊）：a.檢查COM口；b.檢查電纜；c.檢查Thrombolyzer電源或沒(méi)有開(kāi)機(jī)；d.市電電壓突然過(guò)低，應(yīng)加裝寬幅穩(wěn)壓電源。2.Cuvette出現(xiàn)卡杯子的現(xiàn)象：a.通過(guò)adjust中的motoer，測(cè)試個(gè)馬達(dá)系統(tǒng)，以判斷是否為馬達(dá)問(wèn)題。b.檢查通道上是否有試劑或血漿所形成的薄膜，使杯子在傳輸過(guò)程中阻力太大，用潮濕的清潔棒來(lái)回清理通道（用Buffer）。c.是否為通道的出口處，杯子都疊起來(lái)很高，是杯子不能跌落而卡到折光板上的孔內(nèi)。d.是否為杯子出口處的止擋銷不能正常運(yùn)動(dòng)，可以查看Checkmagnet。e.是否在軌道上落下了鋼珠，吧鋼珠請(qǐng)走。3.鹵素?zé)籼粱蛱担–hrolamptoolight/toodark)或四個(gè)通道間的重復(fù)性不好：a.先用濕潤(rùn)的清潔棒（用Buffer沾濕）清潔檢測(cè)位，然后進(jìn)入adjust中選擇motor，分別選擇濾光片405/540nm，檢查A/D轉(zhuǎn)換值，并調(diào)節(jié)相應(yīng)的電位器，使四個(gè)通道的A/D值為3150左右；b.是否為鹵素?zé)舻膯?wèn)題或是燈電壓低；c.是否為光纜的問(wèn)題；d.測(cè)量頭扁平電纜老化，有虛接的地方，更換之。4.白色清洗槽出水不通暢，向上冒水：a.檢查出水口濾膜是否有問(wèn)題，更換或用10%的次氯酸鈉浸泡，沖洗；b.“三通閥”螺絲是否擰緊；c.進(jìn)水盒出水的泵是否漏氣或不正常；d.液路是否有老化漏氣或被壓到了；e.廢液桶是否太高或分頁(yè)同的口太緊使廢液管不能順暢流通；f.清洗槽內(nèi)是否有異物掉入。5.液面感應(yīng)不靈敏：a.是否為加樣針頭上的電纜的問(wèn)題；b.是否為Sensor的問(wèn)題，進(jìn)入adjust中選擇testsensitivityofliquidsensor，用日歷杯裝300μl導(dǎo)電液（生理鹽水或Buffer），機(jī)器可檢查到液體，如200μl導(dǎo)電液機(jī)器無(wú)法檢查到液體。如有不符，調(diào)節(jié)MBC板上電位器P5；c.檢查加樣針的牢固程度及傳感器導(dǎo)線是否有問(wèn)題。在主菜單下選擇Adjust進(jìn)入選sensors進(jìn)入選擇teststabilityofliquidsensors回車。顯示Needleisdry用清潔板敲打針及傳感器聯(lián)線，如果顯示Needleisdry有變化則敲打的部位有問(wèn)題。d.在母板上的LD1燈表示傳感器的工作狀態(tài)。若在不接傳感器的情況下燈亮，則表明電源沒(méi)有地線。e.是否為加樣針受損。6.注射器連接加樣針的端口流水或突然脫落：a.是否為連接管的連接處老化；b.是否為接口處的小型墊脫落、老化或是方向反了。7.開(kāi)機(jī)后顯示異常報(bào)警（出現(xiàn)紅屏、Lamp錯(cuò)誤等）：a.可能是由于非法關(guān)機(jī)造成的；b.電腦的CPU算熱有問(wèn)題；c.電腦有病毒，丟失文件；d.在一號(hào)馬達(dá)處杯子卡住，或者是在測(cè)量頭處杯子卡住沒(méi)有拍出來(lái)。8.加樣針在加樣時(shí)，上下不停的運(yùn)動(dòng)，而不進(jìn)行采樣，而且也不發(fā)出報(bào)警：a.試劑或是血漿的液面太高，倒出一點(diǎn)即可；b.調(diào)節(jié)加樣針的“Z”軸位置，使其調(diào)高一點(diǎn)；c.傳感器與針上的部分可能出現(xiàn)短路或針的套管破損漏液。9.結(jié)果報(bào)告中頻繁出現(xiàn)“EF65”或“EF66”：可以在“Install”菜單中的“ResultCheck”中調(diào)節(jié)參考范圍值。四、試驗(yàn)中可能會(huì)出現(xiàn)的問(wèn)題：1.實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性不好或不凝結(jié)：a.試劑的問(wèn)題；b.對(duì)于FIB實(shí)驗(yàn)是否為Kaolin沒(méi)有充分混勻或是到出的量過(guò)多、使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致水分揮發(fā)、結(jié)晶析出；c.抗凝劑的問(wèn)題。2.某一項(xiàng)或幾項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)值總是偏高或是偏低：a.是否是對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)的試劑問(wèn)題；b.是否為實(shí)驗(yàn)對(duì)應(yīng)的試驗(yàn)參數(shù)有變化（若是建議重新安裝試驗(yàn)參數(shù)盤）。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定：a.檢查加樣系統(tǒng)，是否為移液量不準(zhǔn)確；b.加樣針尖上總有一滴液體存在，檢查泵、閥及管路是否存在問(wèn)題；c.全自動(dòng)機(jī)器，試劑盤上裝kaolin的杯子要用與磁攪拌子大小相吻合的，以防止沉淀，影響檢測(cè)結(jié)果；d.提示lampfail：燈路被堵住。二、D-Dimer的臨床意義：１、快速排除診斷：能在很短的時(shí)間內(nèi)準(zhǔn)確地作出深靜脈栓塞（DVT）、肺栓塞（PE）、彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）的排除診斷，減少病人身體和經(jīng)濟(jì)上的損失。２、DIC的監(jiān)控：DIC是一種嚴(yán)重的獲得性出血綜合征包含了復(fù)雜的病理生理過(guò)程，死亡率極高。配合實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行早期診斷，及時(shí)診斷是其治療成功的關(guān)鍵。D-dimer是反應(yīng)病態(tài)過(guò)程的核心指標(biāo)，直接影響治療方案。但手工或半自動(dòng)方法只能提供定性或半定量結(jié)果，根本無(wú)法判斷變化的程度和過(guò)程，常延誤病情，造成無(wú)法挽救的嚴(yán)重后果?？焖俚亩糠椒饶軠?zhǔn)確及時(shí)作出診斷又能監(jiān)測(cè)整個(gè)病態(tài)發(fā)展過(guò)程，及時(shí)給予治療。３、有效的溶栓治療監(jiān)測(cè)：D-dimer是交聯(lián)纖維蛋白的降解產(chǎn)物，它的升高是血栓溶解的直接證據(jù)，是反映溶栓治療是否有效的關(guān)鍵指標(biāo)。通過(guò)定量檢測(cè)可以反映D-dimer的變化，提示醫(yī)生用藥是否見(jiàn)效，當(dāng)D-dimer的量在治療過(guò)程中不斷上升然后出現(xiàn)下降則提示醫(yī)生可逐漸停藥，這樣既不會(huì)導(dǎo)致用藥不足血栓復(fù)發(fā)，也不會(huì)因用藥過(guò)量導(dǎo)致出血的危險(xiǎn)。４、區(qū)分生理性和病理性纖溶。根據(jù)D-dimer的量和連續(xù)監(jiān)測(cè)，可以準(zhǔn)確區(qū)分生理性偏高或病理性偏高，前者量不會(huì)很高而且不會(huì)持續(xù)性升高。但如用定性或半定量的方法就較難區(qū)分容易誤導(dǎo)臨床。

三、D-Dimer定標(biāo)方法：1.將試劑從冰箱中拿出后靜置于室溫待試劑穩(wěn)定；2.用試劑盒里面的Saline復(fù)溶試劑盒內(nèi)的定值血漿，在室溫靜置15min左右。3.在Set-up里將參數(shù)按照說(shuō)明書要求設(shè)定，在光標(biāo)停留在Calibration上的時(shí)候按回車鍵，在Test里以上下鍵選擇到需要定標(biāo)的D-Dimer項(xiàng)目，并按回車鍵確認(rèn)，其中，Automatic為半自動(dòng)定標(biāo)，即將定值血漿按比例稀釋放入指定位子；FullyAut為全自動(dòng)定標(biāo)，即將定值血漿和Buffer放入指定位子，讓儀器自動(dòng)稀釋并完成定標(biāo)；Manual為手動(dòng)定標(biāo)，即將稀釋各個(gè)點(diǎn)的血漿當(dāng)標(biāo)本放在樣品盤上測(cè)量，然后將測(cè)量的數(shù)值手動(dòng)輸入到電腦里即可。（注意：