DB37-T 4204-2020 水貂阿留申病診斷與凈化技術(shù)

ICS65.020.30B41

DB37山 東 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB37/T4204—2020水貂阿留申病診斷與凈化技術(shù)Aleutiandiseasediagnoseandcleaning-uptechnologyforminkfarm20202020111020201210山東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧獸醫(yī)局提出并組織實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王貴升、張鶴曉、馬澤芳、史秋梅、張洪學(xué)、趙國(guó)清、黃兵、徐啟杰、王蕾、李玉杰、劉長(zhǎng)浩、徐鴻、李金波、馬慧玲、藺曉月、崔凱、陳靜、李富金、王士榮。水貂阿留申病診斷與凈化技術(shù)范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水貂阿留申病臨床診斷技術(shù)、病毒抗體檢測(cè)技術(shù)、熒光PCR檢測(cè)、病獸淘汰技術(shù)、獸群飼養(yǎng)環(huán)境控制技術(shù)和無害化處理的技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水貂阿留申病感染動(dòng)物的篩選、感染控制與凈化。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)驗(yàn)方法GB7959糞便無害化衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB8978污水綜合排放標(biāo)準(zhǔn)SN/T2847水貂阿留申病檢疫技術(shù)規(guī)范DB37/T2381DB37/T266060～907～9112～3802～32～31.5mL1mL～2mL0.3mL～0.5mL：2～824。將裝有血液的離心管靜置，待血清析出，經(jīng)4將裝有血液的離心管靜置，待血清析出，經(jīng)4000r/min離心3min～5min，取血清置于1.5mL離心管中。4.3對(duì)流免疫檢測(cè)按照SN/T2847的要求進(jìn)行檢測(cè)。5熒光PCR檢測(cè)5.1儀器設(shè)備5.1.15.1.25.1.35.1.45.1.5吸頭。5.1.65.1.7熒光PCR檢測(cè)儀及配套反應(yīng)管（板）。（13000r/min。冰箱（2℃～8℃和-20℃兩種）。（0.5μL～10μμL～20μμL～200μμL～1000μ1.5mL）。DNA核酸提取試劑K。SDS。PCR有咽喉拭子樣品和肛拭子樣品：3～51.0mLPBS3～51.0mLPBS1.05.0mLPBS用無菌注射器直接吸取至無菌管中，編號(hào)備用。存放2～824。DNA普通提取方法，或者采用經(jīng)驗(yàn)證的病毒DNA提取試劑盒，按照試劑盒使用說明書提取。VP2168bp。根據(jù)需要配制熒光PCRPCR2000r/min5sec。nPCRPCR1照+1。15μLPCR0.5μLTaqPCR15μL加樣在樣品處理區(qū)進(jìn)行。分別向上述PCR管中加入樣本核酸提取步驟5.4.1中制備的DNA溶液10μL，500r/min離心30sec。PCRPCRPCRPCR℃/3℃/15℃/60sec共4040℃/2min60ABIFAMCt/CpCt/Cp28陰性：無Ct/Cp值，且無特征性擴(kuò)增曲線，表明樣品為陰性。陽性：Ct/Cp值≤30.0，且出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，表示樣品為陽性。復(fù)驗(yàn)：Ct/Cp值大于30.0，且出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線的樣品建議復(fù)驗(yàn)。復(fù)驗(yàn)仍出現(xiàn)上述結(jié)果的，判為陽性，否則判為陰性。熒光PCR檢測(cè)方法的實(shí)驗(yàn)室規(guī)范詳見附錄B。PCR（）（場(chǎng)DB37/T2381DB37/T2660對(duì)污染的飼料、墊料等廢棄物以及糞便、污水應(yīng)按照GB7959和GB8978進(jìn)行無害化處理。病死水貂按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《病死及病害動(dòng)物無害化處理技術(shù)規(guī)范》的規(guī)定進(jìn)行無害化處理。附錄A（資料性附錄）引物和探針F CAACCCTCCAGGTCAACTCTR CTCTTAACAGGATTCCAGCATGTP FAM-AAGCTTGCCTCTCCAAGTAAAGTAACCA-BHQ1附錄B（資料性附錄）水貂阿留申病毒熒光PCR檢測(cè)方法的實(shí)驗(yàn)室規(guī)范B.1實(shí)驗(yàn)室設(shè)置要求實(shí)驗(yàn)室設(shè)置要求如下：——實(shí)驗(yàn)室分為三個(gè)相對(duì)獨(dú)立的區(qū)域：樣本制備區(qū)、反應(yīng)混合物配置區(qū)和檢測(cè)區(qū)；——工作區(qū)域須有明確標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用；——每一區(qū)域須有專用的儀器設(shè)備RNA2504hRNA——實(shí)驗(yàn)室清潔時(shí)應(yīng)該樣本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配置區(qū)至檢測(cè)區(qū)的順序進(jìn)行；——不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。B.2工作區(qū)域儀器設(shè)備配置——實(shí)驗(yàn)室清潔時(shí)應(yīng)該樣本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配置區(qū)至檢測(cè)區(qū)的順序進(jìn)行；——不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。B.2工作區(qū)域儀器設(shè)備配置樣本制備區(qū)需配置如下儀器設(shè)備：——2℃～8℃冰箱；——-20℃冰箱；（4℃，12000r/min）；——混勻器；（0.1μL～10μL，5μL～20μL，20μL～200μL，200μL～1000μL）；——可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）。檢測(cè)區(qū)檢測(cè)區(qū)需配置如下儀器設(shè)備：——熒光PCR儀（配計(jì)算機(jī)）；——移動(dòng)紫外燈；——打印機(jī)。B.3各工作區(qū)域功能及注意事項(xiàng)樣本制備區(qū)的功能及注意事項(xiàng)如下：——樣本的保存，核酸提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管在樣本制備區(qū)進(jìn)行；——對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)適當(dāng)?shù)淖贤庹丈洌?/p>