小鼠骨髓細胞微核試驗課件

小鼠骨髓細胞微核試驗小鼠骨髓細胞微核試驗11目的通過本次實驗，學(xué)習(xí)和掌握小鼠骨髓多染紅細胞（PCE）微核測定方法。2原理微核是在細胞的有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進入子細胞形成細胞核時，仍然留在細胞質(zhì)中的染色單體或染色體的無著絲粒斷片或環(huán)。它在末期以后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核，被包含在細胞的胞質(zhì)內(nèi)而形成，由于比核小得多故稱微核。1目的通過本次實驗，學(xué)習(xí)和掌握小鼠骨髓多染紅細胞（PCE2微核成因化學(xué)致突變物染色體作用于紡錘絲無著絲點,片或環(huán)整條染色體帶著絲粒的環(huán)和斷片于細胞分裂末期細胞質(zhì)中形成微核微核成因化學(xué)致突變物染色體作用于紡錘絲無著絲點,片或環(huán)整條染3小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核的形成小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核的形成4因此，微核試驗用于檢測斷裂劑和部分非整倍體致突變劑。

微核可出現(xiàn)在多種細胞中，但在有核細胞中較難與正常核的分支相區(qū)別，由于紅細胞在成熟前最后一次分離后數(shù)小時可將主核排出，而仍保留微核于PCE細胞中，因此，通常計數(shù)PCE細胞中的微核數(shù)。因此，微核試驗用于檢測斷裂劑和部分非整倍體致突變劑。53器材與試劑3.1器材解剖器械，生物顯微鏡，載玻片等。3.2試劑甲醇（分析純）、甘油（分析純）、小牛血清、生理鹽水、Giemsa儲備液、pH6.8磷酸鹽緩沖液3.3陽性對照物環(huán)磷酰胺3器材與試劑3.1器材解剖器械，生物顯微鏡，載玻64操作步驟4.1試驗動物及處理動物選擇小鼠是微核試驗的常規(guī)動物，通常用7～12周齡，體重18～20g的小鼠。每組10只，雌雄各半。4操作步驟4.1試驗動物及處理7劑量及分組受試物應(yīng)至少設(shè)三個劑量組，最高劑量組原則上為不產(chǎn)生動物死亡的最大毒作用劑量。一般取受試樣品1/5、1/10、1/20LD50劑量。另設(shè)溶劑對照組和陽性對照組。陽性對照組可用環(huán)磷酰胺腹腔注射1次。陰性對照組使用等體積的溶劑。劑量及分組8染毒途徑腹腔注射染毒次數(shù)及取樣時間一般采用兩次或多次染毒。兩次染毒：第一次染毒后24小時進行第二次染毒，6小時后取樣；多次染毒：每天染毒1次，連續(xù)5天，末次染毒后24小時取樣。染毒途徑腹腔注射94.2骨髓液的制備和涂片試驗動物一次染毒后，按確定的時間用頸椎脫臼或麻醉法將其處死，取胸骨，擦凈血污，剔去肌肉，剪去骨骺，用小型止血鉗將骨髓擠于有一小滴小牛血清的清潔載玻片上，混合均勻后推片。也可在股骨取骨髓。陽性及陰性對照組處理方法同上。4.2骨髓液的制備和涂片104.3固定將推好晾干的骨髓片放入染色缸中，甲醇溶液固定15分鐘，取出，晾干。不能及時染色的涂片也應(yīng)固定好保存。4.4染色將固定晾干后的涂片，用新鮮配制的Giemsa(Giemsa儲備液1份+pH6.8的磷酸鹽緩沖液9份)染色10~15分鐘，沖洗，晾干。4.3固定114.5觀察計數(shù)低倍鏡下觀察，選擇細胞完整、分散均勻，著色適當(dāng)?shù)膮^(qū)域，再在油鏡下觀察計數(shù)。多染紅細胞（PCE）呈灰藍色，正染紅細胞（NCE）呈橘黃色。典型的微核多為單個、圓形、邊緣光滑整齊，嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍紫色。計數(shù)1000個PCE中含微核的PCE數(shù)，并且計數(shù)200個細胞中PCE與NCE的比值。4.5觀察計數(shù)低倍鏡下觀察，選擇細胞完整、分散均勻，著色適125結(jié)果分析與評價本試驗中只計數(shù)PCE中微核，微核率以千分率表示。PCE/NCE為評價細胞毒性的指標，受試組PCE/NCE值與陰性對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義表示受試化學(xué)毒物的劑量過大，試驗結(jié)果不可靠。陰性對照和陽性對照組的微核發(fā)生率，應(yīng)與相關(guān)文獻報道或研究歷史數(shù)據(jù)相一致。5結(jié)果分析與評價本試驗中只計數(shù)PCE中微核，微核率以千分率13MNNCEMNNCE14

紅細胞電鏡

15單個微核多個微核單個微核多個微核16小鼠骨髓細胞微核試驗課件17小鼠骨髓細胞微核試驗小鼠骨髓細胞微核試驗181目的通過本次實驗，學(xué)習(xí)和掌握小鼠骨髓多染紅細胞（PCE）微核測定方法。2原理微核是在細胞的有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進入子細胞形成細胞核時，仍然留在細胞質(zhì)中的染色單體或染色體的無著絲粒斷片或環(huán)。它在末期以后，單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核，被包含在細胞的胞質(zhì)內(nèi)而形成，由于比核小得多故稱微核。1目的通過本次實驗，學(xué)習(xí)和掌握小鼠骨髓多染紅細胞（PCE19微核成因化學(xué)致突變物染色體作用于紡錘絲無著絲點,片或環(huán)整條染色體帶著絲粒的環(huán)和斷片于細胞分裂末期細胞質(zhì)中形成微核微核成因化學(xué)致突變物染色體作用于紡錘絲無著絲點,片或環(huán)整條染20小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核的形成小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核的形成21因此，微核試驗用于檢測斷裂劑和部分非整倍體致突變劑。

微核可出現(xiàn)在多種細胞中，但在有核細胞中較難與正常核的分支相區(qū)別，由于紅細胞在成熟前最后一次分離后數(shù)小時可將主核排出，而仍保留微核于PCE細胞中，因此，通常計數(shù)PCE細胞中的微核數(shù)。因此，微核試驗用于檢測斷裂劑和部分非整倍體致突變劑。223器材與試劑3.1器材解剖器械，生物顯微鏡，載玻片等。3.2試劑甲醇（分析純）、甘油（分析純）、小牛血清、生理鹽水、Giemsa儲備液、pH6.8磷酸鹽緩沖液3.3陽性對照物環(huán)磷酰胺3器材與試劑3.1器材解剖器械，生物顯微鏡，載玻234操作步驟4.1試驗動物及處理動物選擇小鼠是微核試驗的常規(guī)動物，通常用7～12周齡，體重18～20g的小鼠。每組10只，雌雄各半。4操作步驟4.1試驗動物及處理24劑量及分組受試物應(yīng)至少設(shè)三個劑量組，最高劑量組原則上為不產(chǎn)生動物死亡的最大毒作用劑量。一般取受試樣品1/5、1/10、1/20LD50劑量。另設(shè)溶劑對照組和陽性對照組。陽性對照組可用環(huán)磷酰胺腹腔注射1次。陰性對照組使用等體積的溶劑。劑量及分組25染毒途徑腹腔注射染毒次數(shù)及取樣時間一般采用兩次或多次染毒。兩次染毒：第一次染毒后24小時進行第二次染毒，6小時后取樣；多次染毒：每天染毒1次，連續(xù)5天，末次染毒后24小時取樣。染毒途徑腹腔注射264.2骨髓液的制備和涂片試驗動物一次染毒后，按確定的時間用頸椎脫臼或麻醉法將其處死，取胸骨，擦凈血污，剔去肌肉，剪去骨骺，用小型止血鉗將骨髓擠于有一小滴小牛血清的清潔載玻片上，混合均勻后推片。也可在股骨取骨髓。陽性及陰性對照組處理方法同上。4.2骨髓液的制備和涂片274.3固定將推好晾干的骨髓片放入染色缸中，甲醇溶液固定15分鐘，取出，晾干。不能及時染色的涂片也應(yīng)固定好保存。4.4染色將固定晾干后的涂片，用新鮮配制的Giemsa(Giemsa儲備液1份+pH6.8的磷酸鹽緩沖液9份)染色10~15分鐘，沖洗，晾干。4.3固定284.5觀察計數(shù)低倍鏡下觀察，選擇細胞完整、分散均勻，著色適當(dāng)?shù)膮^(qū)域，再在油鏡下觀察計數(shù)。多染紅細胞（PCE）呈灰藍色，正染紅細胞（NCE）呈橘黃色。典型的微核多為單個、圓形、邊緣光滑整齊，嗜色性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍紫色。計數(shù)1000個PCE中含微核的PCE數(shù)，并且計數(shù)200個細胞中PCE與NCE的比值。4.5觀察計數(shù)低倍鏡下觀察，選擇細胞完整、分散均勻，著色適295結(jié)果分析與評價本試驗中只計數(shù)PCE中微核，微核率以千分率表示。PCE/NCE為評價細胞毒性的指標，受試組PCE/NCE值與陰性對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義表示受試化學(xué)毒物的劑量過大，試驗結(jié)果不可靠。陰性對照和陽性對照組的微核發(fā)生率，應(yīng)與相關(guān)文獻報道或研究歷史數(shù)據(jù)相一致。5結(jié)果分析與評價本試驗中只計數(shù)PCE中微核，微核率以千分率30MNNCEM