DB37-T 3738-2019 水質(zhì)　磺胺類、喹諾酮類和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的測定　固相萃取液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法-（高清版）

ICS13.060Z16

DB37山 東 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB37/T3738—2019Waterquality-DeterminationofantibioticsofSulfonamides,QuinolonesandMacrolidesbysolidphaseextraction-LiquidchromatographytriplequadrupolemassWaterquality-DeterminationofantibioticsofSulfonamides,QuinolonesandMacrolidesbysolidphaseextraction-Liquidchromatographytriplequadrupolemassspectrometry2019120520200105山東省市場監(jiān)督管理局發(fā)布目次前言 II112范引文件 13法理 14擾消除 15劑材料 16器設(shè)備 2738析驟 39果算表示 510密和確度 712物理 8附錄A（范12物理 8附錄A（范附）方法檢限測下限 9附錄B（料附）質(zhì)譜考件 10附錄C（料附）方法精度準(zhǔn)度 11前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省生態(tài)環(huán)境廳提出并組織實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省環(huán)境監(jiān)測中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：郭文建、張慧、朱晨、王桂勛、岳太星、李紅莉、丁波濤。水質(zhì)磺胺類、喹諾酮類和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的測定固相萃取/液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法1范圍/12當(dāng)取樣500ml，定容體積為1.0ml，進(jìn)樣體積為20μl時(shí)，方法檢出限為0.001μg/L～0.007μg/L，測定下限為0.004μg/L～0.028μg/L，詳見附錄A。2規(guī)范性引用文件2規(guī)范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ/T164地下水環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范3方法原理水樣中的抗生素類化合物經(jīng)固相萃取法富集、凈化后，用液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法分離檢測。根據(jù)化合物的保留時(shí)間和特征離子峰定性，內(nèi)標(biāo)法定量。4干擾與消除5試劑和材料除非另有說明，分析時(shí)均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純試劑，實(shí)驗(yàn)用水為不含目標(biāo)化合物的純水。5.1鹽酸：ρ（HCl）=1.19g/ml5.2硫酸：ρ（H2SO4）=1.84g/ml甲酸（HCOOH）（C10H14N2Na2O8?2H2O）（C6H8O6）。1+1c(H2SO4)=4.0mol/L22ml（5.2）100mlpH2.0（5.8）pH2.00.10.5ml（5.5）500ml甲醇：1+1。0.10.5ml/（5.12）/（5.12）500ml5.1475ml0.125ml0.1/（5.13）ρ=100mg/L10.0mg100ml101ρ=2.00mg/L純度≥95400μl100mg/L20ml19.6ml（5.4），然后加入約10μl硫酸溶液（5.9）調(diào)pH至3.0，室溫下震蕩4h，于-10℃以下避光可保存2個(gè)月。μg/ml12（5.4）3ρ=200μg/ml13C（5.4）-103μg/mlD699.010μg/ml-10℃1μg/ml1Nmg濾膜：0.7μm濾膜：0.22μm5.2599.99（ESI）K-D1.8μm504.6mmC181000ml：10μl、20μl、50μl、100μl250μl樣品按照HJ/T91和HJ/T164（6.5）150mg及0.25（5.8）pH至樣品采集后應(yīng)盡快進(jìn)行分析。如暫不能分析，需在0℃～4℃冷藏避光保存，3d內(nèi)分析完畢。樣品采用固相萃取法富集前，先用孔徑為0.7μm的玻璃纖維膜（5.23）過濾。（5.22）（6.3）5ml（5.4）、5mlmlpH2.0（5.10）pH2.0ml500ml25.0μlpH10～15ml/min5ml（5.25）20min10ml（5.4）以5ml/min1.00.22以實(shí)驗(yàn)用水代替樣品，按照與試樣的制備（7.2）相同步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室空白試樣的制備。流動(dòng)相：A相：0.1%甲酸甲醇/乙腈混合溶液（5.13）。B相：0.1%甲酸溶液（5.11）。流速：0.3ml/min。柱溫：40℃。進(jìn)樣體積：20μl。表1梯度洗脫程序時(shí)間（min）流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）0257522575186040206040212575252575離子源：電噴霧離子源（ESI），正離子模式。毛細(xì)管電壓：4000V，干燥氣體溫度：350℃，霧化器壓力：35psi。干燥氣體流速：10L/min。B按照儀器使用說明書的要求在規(guī)定時(shí)間和頻次內(nèi)對液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀進(jìn)行儀器質(zhì)量軸和分辨率調(diào)諧，使儀器處于最佳測試狀態(tài)。于2ml樣品瓶中，制備至少5個(gè)濃度點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)系列，抗生素類化合物和替代物在各點(diǎn)的質(zhì)量濃度分別為2.00g/L、5.00μg/L10.0μg/L20.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L和200μg/L（），內(nèi)50.0μg/L（按照與校準(zhǔn)曲線的建立（8.2）相同的條件進(jìn)行試樣（7.2）測定。按照與試樣測定相同的條件（8.3）進(jìn)行空白試樣（7.3）的測定。2.5（Ksam）與濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖中對應(yīng)的定性離子相對豐度（Kstd）偏差不超過表2的范圍，則可判定樣品中存在該待測物。12種抗生素類化合物、3種替代物及1種內(nèi)標(biāo)物的總離子流色譜圖見圖1，MRM譜圖見附錄C。式中：

KsamA2(1)Ksam——樣品中某組分定性離子的相對豐度，%；A2（）；A1（）KstdAstd2式中：Kstd——標(biāo)準(zhǔn)溶液中某組分定性離子的相對豐度，%；Astd2式中：Kstd——標(biāo)準(zhǔn)溶液中某組分定性離子的相對豐度，%；Astd2——標(biāo)準(zhǔn)溶液中某組分定性離子對的峰面積（或峰高）；Astd1——標(biāo)準(zhǔn)溶液中某組分定量離子對的峰面積（或峰高）。表2定性確認(rèn)時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差單位：%標(biāo)準(zhǔn)溶液中某組分的定性離子的相對離子豐度（Kstd）Kstd＞5020＜Kstd≤5010＜Kstd≤20Kstd≤10樣品中某組分的定性離子的相對離子豐度（Ksam）的最大允許偏差±20±25±30±50說明：1——磺胺嘧啶；2——氟羅沙星；3——氧氟沙星；4——諾氟沙星；5——環(huán)丙沙星-D8；6——環(huán)丙沙星；8——磺胺間甲氧嘧啶；9——磺胺甲惡唑；10——螺旋霉素；8——磺胺間甲氧嘧啶；9——磺胺甲惡唑；10——螺旋霉素；11——磺胺二甲氧嘧啶；12——磺胺二甲氧嘧啶-D6；1313——阿特拉津-C；314——脫水紅霉素；15——脫水紅霉素-D6；16——羅紅霉素。圖1目標(biāo)物、替代物及內(nèi)標(biāo)物的總離子流色譜圖（ρ=100μg/L，內(nèi)標(biāo)50μg/L）9.2定量分析樣品中各抗生素組分的質(zhì)量濃度ρi（μg/L）按照公式（3）進(jìn)行計(jì)算。...................................(3)式中：ρiiμg/L；Aii（）；Aisρisμg/L；abViml；Vml9.3結(jié)果表示測定結(jié)果的小數(shù)點(diǎn)位數(shù)與方法檢出限一致，最多保留三位有效數(shù)字。精密度6家實(shí)驗(yàn)室對抗生素濃度為0.040μg/L、0.200μg/L、0.400μg/L統(tǒng)一加標(biāo)樣進(jìn)行了6次重復(fù)測定：0.8%～17%、1.4%～17%、1.3%～179.7～1811～1711～160.009～0.012μg/L、0.032～0.052μg/L0.052～0.0920.013～0.021μg/L0.060～0.102μg/L0.096～0.160μg/L準(zhǔn)確度72.3%～97.8%，77.6%～90.3%；加標(biāo)回收率最終值為77.8%±30.8%～102%±31.2%、77.5%±30.6%～85.5%±31.6%、77.5%±25.8%～97.8%±32.0%、77.6%±27.2%～90.3%±29.4%。精密度和準(zhǔn)確度結(jié)果統(tǒng)計(jì)見附錄C。11質(zhì)量保證和質(zhì)量控制每次分析至少做一個(gè)實(shí)驗(yàn)室空白，實(shí)驗(yàn)室空白中目標(biāo)化合物的濃度應(yīng)低于方法檢出限。校準(zhǔn)≥0.990；每20（20批172.3%～97.8%，77.6%～90.3%；加標(biāo)回收率最終值為77.8%±30.8%～102%±31.2%、77.5%±30.6%～85.5%±31.6%、77.5%±25.8%～97.8%±32.0%、77.6%±27.2%～90.3%±29.4%。精密度和準(zhǔn)確度結(jié)果統(tǒng)計(jì)見附錄C。11質(zhì)量保證和質(zhì)量控制每次分析至少做一個(gè)實(shí)驗(yàn)室空白，實(shí)驗(yàn)室空白中目標(biāo)化合物的濃度應(yīng)低于方法檢出限。校準(zhǔn)≥0.990；每20（20批120每20（20/批25每2020/60～130每個(gè)樣品均需要加入替代物，替代物回收率應(yīng)控制在60%～130%之間。12廢物處理實(shí)驗(yàn)操作過程產(chǎn)生的有機(jī)溶劑廢液應(yīng)集中保管，委托有資質(zhì)的單位進(jìn)行處理。附錄A（規(guī)范性附錄）方法的檢出限和測定下限表A.1給出了本方法中目標(biāo)化合物的檢出限和測定下限。表A.1方法的檢出限和測定下限序號化合物CAS所屬類別方法檢出限（μg/L）測定下限（μg/L）1磺胺嘧啶68-35-9磺胺類0.0010.0042磺胺二甲嘧啶57-68-1磺胺類0.0010.0043磺胺間甲氧嘧啶1220-83-3磺胺類0.0010.0044磺胺甲惡唑723-46-6磺胺類0.0010.0045磺胺二甲氧嘧啶122-11-2磺胺類0.0010.0046氟羅沙星79660-72-3喹諾酮類0.0020.0087氧氟沙星82419-36-1喹諾酮類0.0030.0128諾氟沙星70458-96-7喹諾酮類0.0030.0129環(huán)丙沙星85721-33-1喹諾酮類0.0030.01210螺旋霉素8025-81-8大環(huán)內(nèi)酯類0.0070.02811脫水紅霉素23893-13-2大環(huán)內(nèi)酯類0.0020.00812羅紅霉素80214-83-1大環(huán)內(nèi)酯類0.0020.008附錄B（資料性附錄）質(zhì)譜參考條件目標(biāo)化合物、替代物及內(nèi)標(biāo)物的多離子反應(yīng)監(jiān)測條件見表B.1。表B.1目標(biāo)化合物、替代物及內(nèi)標(biāo)物的多離子反應(yīng)監(jiān)測條件種類名稱母離子(m/z)定量、定性離子（m/z）（V毛細(xì)管出口電壓（V）內(nèi)標(biāo)阿特拉津-13C3218.6177.2*，106.215，20110磺胺類磺胺間甲氧嘧啶281.1156.1*，108.115，26100磺胺嘧啶251.1156.0*，108.010，22100磺胺二甲氧嘧311.0156.0*，108.020，26130磺胺二甲氧嘧啶-D6316.4162.0*，108.021，29110磺胺甲惡唑254.1156.0*，108.010，25100磺胺二甲嘧啶279.1186.1*，156.115，16120喹諾酮類諾氟沙星320.0302.1*，276.120，15130環(huán)丙沙星332.1314.1*，231.020，42135環(huán)丙沙星-D8340.1322.1*，296.020，9125氧氟沙星362.0318.1*，261.115，26130氟羅沙星370.1326.0*，269.015，25130大環(huán)內(nèi)酯類脫水紅霉素716.5158.1*，558.025，14170脫水紅霉素-D6722.0164.1*，564.029，14158螺旋霉素422.2174.0*，101.021，23100羅紅霉素837.5158.0*，679.438，18170注：帶*的為定量離子附錄C（）表C.1和C.2分別給出了方法的精密度和準(zhǔn)確度。表C.1方法的精密度化合物名稱加標(biāo)濃度（μg/L）平均值（μg/L）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（%r（μg/L）R（μg/L）磺胺嘧啶0.0400.0302.2-14.812.00.0090.0130.2000.1601.4-10.413.30.0330.0600.4000.3332.0-9.615.60.0520.130磺胺二甲嘧啶0.0400.0312.9-13.317.50.0100.0170.2000.1662.0-14.511.80.0400.0700.4000.3372.3-10.615.20.0660.150磺胺間甲氧嘧啶0.0400.0313.2-12.917.10.0090.0200.2000.1563.1-13.212.70.0420.0710.4000.3211.4-9.819.50.0580.150磺胺甲惡唑0.0400.0333.8-13.017.30.0110.0110.2000.1642.8-14.615.50.0460.0830.4000.3112.2-15.312.80.0680.140磺胺二甲氧嘧啶0.0400.0354.9-14.89.70.0110.0160.2000.1742.5-16.912.80.0430.0690.4000.3382.5-14.011.60.0670.096氟羅沙星0.0400.0383.6-14.57.00.0100.0130.2000.1761.4-14.916.40.0520.1000.4000.3301.7-16.615.50.0810.140氧氟沙星0.0400.0383.8-14.210.20.0110.0150.2000.1892.5-13.715.60.0400.0850.4000.3341.9-13.314.00.0810.160諾氟沙星0.0400.0393.0-13.213.40.0100.0180.2000.1743.4-12.413.30.0460.0830.4000.3171.5-14.913.60.0860.150環(huán)丙沙星0.0400.0391.9-13.516.90.0110.0210.2000.1714.4-12.411.00.0460.0830.4000.3221.7-16.414.60.0920.160表C.1方法的精密度（續(xù)）化合物名稱加標(biāo)濃度（μg/L）平均值（μg/L）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差實(shí)驗(yàn)室間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（%r（μg/L）R（μg/L）螺旋霉素0.0400.03231.5-15.312.00.0100.0160.2000.1652.7-14.716.70.0320.0830.4000.3430.9-12.313.50.0920.140脫水紅霉素0.0400.0411.0-12.115.20.0110.0200.2000.1712.0-13.714.50.0420.0930.4000.3522.0-15.012.70.0820.110羅紅霉素0.0400.0390.8-16.515.40.0120.0200.2000.1641.6-11.216.90.0350.0870.4000.3481.3-13.811.40.0770.126表C.2方法的準(zhǔn)確度化合物名稱樣品類型實(shí)際樣品濃度（μg/L）加標(biāo)濃度（μg/L）回收率范圍（%）P2S（%）磺胺嘧啶地下水0.0000.04066.4～91.175.5±17.2地表水0.0000.20062.8～85.778.5±16.4生活污水0.0000.20060.6～97.077.2±22.4工業(yè)廢水0.0000.40063.3～10288.0±29.2磺胺二甲嘧啶地下水0.0000.04064.5～10176.4±27.4地表水0.0000.20064.1～86.976.3±19.4生活污水0.0000.20070.5～99.882.4±19.4工業(yè)廢水0.0000.40077.6～93.487.0±13.2磺胺間甲氧嘧啶地下水0.0000.04066.8～10277.8±30.8地表水0.0000.20063.0～96.480.0±30.2生活污水0.0000.20063.2～92.376.3±19.2工業(yè)廢水0.0000.40070.4～11385.5±34.6磺胺甲惡唑地下水0.0000.04066.3～97.281.5±29.8地表水0.0000.20063.2～10381.8±29.6生活污水0.0190.20066.6～10083.1±27.0工業(yè)廢水0.0000.40071.1～92.177.9±16.0磺胺二甲氧嘧啶地下水0.0000.04078.3～98.788.0±18.6地表水0.0000.20067.1～89.880.2±18.4生活污水0.0000.20082.2～11793.8±25.0工業(yè)廢水0.0000.40080.2～10690.2±18.6表C.2方法的準(zhǔn)確度（續(xù)）化合物名稱樣品類型實(shí)際樣品濃度（μg/L）加標(biāo)濃度（μg/L）回收率范圍（%）P2S（%）氟羅沙星地下水0.0000.04083.0～10392.6±13.0地表水0.0000.20065.8～10385.5±31.6生活污水0.1480.20066.6～97.681.9±21.6工業(yè)廢水0