福爾馬林固定石蠟包埋ffpe樣品制備及預(yù)處理用于rnascope2.5分析第一部分

研究用途在物中RNAscope?在公開物中描述使用本產(chǎn)品的實(shí)驗(yàn)流程時(shí)，請(qǐng)稱其為RNAscope?分析，并：WangF,FlanaganJ,SuN,WangL-C,BuiS,NielsonAWuXVoH-TMaX-JandLuoY.RNAscope?:ANovelInSituRNAysisPlatformforFormalinFixedParaffinEmbeddedTissues.J.Mol.Diagnostics,2012,14:22-29。盡管本手冊(cè)已盡最大可能確保準(zhǔn)確性，但對(duì)于因使用本信息導(dǎo)致的任何錯(cuò)誤、疏忽或損失，AdvancedCellDiagnosticsInc?2015.AdvancedCellDiagnostics,Inc.保留所利第1章產(chǎn)品信 RNAscope?2.5試劑 第2章開始之 第3章樣品及預(yù)處 FFPE切片 RNASCOPE?抗原修復(fù)試劑 RNASCOPE?雙氧水處 RNASCOPE?抗原修復(fù)試劑處 疑難解 附錄A組織預(yù)處理?xiàng)l 附錄B安全 獲取 獲得支 聯(lián)系信 1關(guān)于本指產(chǎn)品說(shuō)

本用戶手冊(cè)提供在載玻片上進(jìn)行福爾固定的、石蠟包埋(FFPE)組織樣品及預(yù)處理的適用指南及操作手冊(cè)。載玻片隨后可用RNAscope?2.5試劑盒進(jìn)行分析。RNAscope?2.5試劑盒附有單獨(dú)的e.分析用戶手冊(cè)。必須在正確用戶手冊(cè)的指導(dǎo)下進(jìn)行RNAscope?分析。請(qǐng)nical-support/user-manuals，RNAscope?2.5分析用RNAscope?2.5分析采用創(chuàng)新的專利原位雜交(ISH)方法，將固定于載玻片上的樣品中每個(gè)細(xì)胞中的單個(gè)交，然后與一系列信號(hào)放大分子結(jié)合，最后進(jìn)行信號(hào)檢測(cè)（圖1）?？蛇M(jìn)行單通道、雙通道、多通道和自動(dòng)化分析。e2分析流程如61示，根據(jù)分析類型，可6-10時(shí)內(nèi)完成，或方便地分兩e?.分析須使用經(jīng)適當(dāng)和預(yù)處理的樣品。pe.分析可兼容多種樣品類型，包括：福爾固定石蠟包埋(FFPE)組織、新鮮冷凍組織、固定冷凍組織、組織(TMA)和細(xì)胞樣品。信息請(qǐng)或聯(lián)系 2：與靶RNA雜 當(dāng)?shù)那衅园蠷NA。1流程概

與靶標(biāo)mRNA雜交。

使用兩個(gè)獨(dú)立的信號(hào)放大系統(tǒng)檢測(cè)兩個(gè)靶標(biāo)RNA。探針與一系列信HRP或AP標(biāo)記的探針檢測(cè)RNA。

RNA。試劑盒內(nèi)含物及條RNAscope?2.5RNAscope?分析需要使用RNAscope?探針和RNAscope?2.5試劑盒。如果您使用Ventana?DISCOVERYXT或ULTRA系統(tǒng)進(jìn)行自動(dòng)化分析，則必須使用RNAscope?VS探針和RNAscope?VS試劑盒。探針和試劑盒需分別。RNAscope?2.5

訂購(gòu)每個(gè)RNAscope?2.5試劑盒的試劑足以用于染色約20個(gè)面積約為20mmx20mm的組織切片。使用較大的組織切片時(shí)，每個(gè)試劑盒包含3個(gè)子試劑盒，包括一個(gè)抗原修復(fù)液試劑盒（貨號(hào)322000）、RNAscope?雙氧水和蛋白酶（貨號(hào)RNAscope?雙氧3mLx22-8°RNAscope?抗原修復(fù)試70mLx415-30°RNAscope?蛋白酶4.5mLx12-8°所需材料與設(shè)RNAscope?2.5析需要使用以下材料和重點(diǎn)！該系統(tǒng)是唯一經(jīng)驗(yàn)證的RNAscope?2.5析系統(tǒng)HybEZ?雜交系統(tǒng)（110VAC，貨號(hào)310010；220VAC，貨號(hào)310013）專為RNAscope?2.5分析中的雜交和孵育步驟設(shè)計(jì)。RNAscope?分析的孵育步驟需要在濕潤(rùn)環(huán)境下進(jìn)行，以防止切片變干。關(guān)于HybEZ?雜交系統(tǒng)的使用方法，請(qǐng)參閱《HybEZ?雜交系統(tǒng)用戶手冊(cè)》 support/user-manuals或培訓(xùn)： HybEZ?雜交爐（1102201310010HybEZ?濕度控制盤（帶蓋1HybEZ?載玻片架（可容納20載玻片1HybEZ?2—HybEZ?加濕紙15ImmEdge?阻水筆（必需VectorH-SuperFrost?Plus（必需Fisher12-550-100AmericanMasterTechFisherX3P10%中爾————AmericanMasterAmericanMasterTechAmericanMaster—————玻璃燒杯（1L2—熱板（能維700ML體100+/-Fisher11300——— 的主要用品供應(yīng)商。其他地區(qū)的用戶可查閱當(dāng)?shù)赜闷饭?yīng)商的產(chǎn) 2在您在您第一次對(duì)樣品進(jìn)行RNAscope?分析之前 重要流程指

FFPERNAscope?對(duì)照玻片（人源性樣品對(duì)照玻片HeLa3100453T3，貨號(hào)310023）上使用陽(yáng)性和對(duì)照探針進(jìn)行分析請(qǐng)務(wù)必在您的樣品上測(cè)試陽(yáng)性和對(duì)照探針，以評(píng)價(jià)樣品RNA的質(zhì)量和最優(yōu)通透性3 第3章樣 及預(yù)處下面的實(shí)驗(yàn)方案說(shuō)明了福爾固定石蠟包埋(FFPE)樣品的和預(yù)處理方法。對(duì)于其他樣品類型和 獲取的實(shí)驗(yàn)方案和指南。 件或nical-support/solutionsFFPE切片10%中爾1X100SuperFrost?Plus玻

警告！請(qǐng)適當(dāng)處理生物樣本。重點(diǎn)！固定時(shí)間少于16時(shí)或長(zhǎng)于32小時(shí)將影RNAscope?分析的結(jié)果用1XPBS樣品將石蠟切片放入40-45°C的水浴，將切片貼附到SUPERFROST?PLUS載玻片上。 用于RNAscope?2.5析的FFPE

重點(diǎn)FFPE100%停止點(diǎn)可選?？酒瓿珊罅⒓词褂茫蛟谑覝叵率褂酶稍飫?，時(shí)間不超過1停止點(diǎn)可選?？酒瓿珊罅⒓词褂茫蛟谑覝叵率褂酶稍飫?，時(shí)間不超過1周 致樣RNA降解如果烤片完成后繼續(xù)分析，請(qǐng)?jiān)诳酒瑫r(shí)準(zhǔn)備用于以下實(shí)驗(yàn)方案的材料：下一節(jié)的FFPE切片脫石蠟頁(yè)的樣品預(yù)處理RNAscope?2.5析材頁(yè)的在兩Tissue-Tek?200mL在兩Tissue-Tek?200mL鮮100%EtOH將載玻片放入TissueTek?100%EtOH皿中使用新鮮100%EtOH復(fù)步67樣品預(yù)處

立即進(jìn)行RNASCOPE?2.5分析由RNAscope?試劑盒提供的材RNASCOPE?雙氧RNASCOPE?抗原修復(fù)RNASCOPE?蛋白酶玻璃燒杯（1L2HybEZ?雜交Tissue-Tek?載玻片Tissue-Tek?染色I(xiàn)mmEdge?

HybEZ雜交爐，將溫度40°CRNASCOPE?抗原修復(fù)試劑重點(diǎn)！使用前煮沸1XRNASCOPE?抗原修復(fù)試劑的時(shí)間不得超過30分鐘向燒杯中倒入1瓶(70mL)10XRNASCOPE?抗原修復(fù)試劑，然后加入630mL蒸餾水，得到700mL新鮮的1XRNASCOPE?抗原修復(fù)試劑。充分混合。1XRNASCOPE?抗原修復(fù)試劑的燒杯放在熱板上。用鋁箔覆蓋燒杯，將熱板調(diào)至高檔10-151XRNASCOPE?98-102°C)RNASCOPE?雙氧水處理將已脫石蠟的載玻片置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，添5-8滴RNASCOPE?RNASCOPE?雙氧水，每次處理一個(gè)載玻片。立即將載玻片浸沒在盛滿蒸餾水的Tissue-Tek?染色皿中的Tissue-Tek?載玻片架上。RNASCOPE?抗原修復(fù)試劑處理

用鑷子將載玻片架非常緩慢地1XRNASCOPE?抗原修復(fù)試劑中。用鋁箔覆蓋燒杯，按照第17頁(yè)的附錄A組織預(yù)處理?xiàng)l件中的表格給出的時(shí)間對(duì)載玻片進(jìn)行沸水浴處理。用鑷子立即將熱載玻片架從1XRNASCOPE?抗原修復(fù)試劑中轉(zhuǎn)移到盛有蒸餾水的染色皿中。RNASCOPE?抗原修復(fù)試劑中冷卻載玻片阻水組分鐘將載玻片置于HybEZ?載玻片架中，加入約5滴RNASCOPE?蛋白酶plus，使其完切片的每個(gè)區(qū)域。注意：如果您要執(zhí)行第17頁(yè)的附錄A組織預(yù)處理?xiàng)l件，請(qǐng)?jiān)谠摬襟E使用3個(gè)梯度稀釋的RNASCOPE?蛋白酶Plus，每個(gè)濃度均有陽(yáng)性和對(duì)照玻片。如果您之前對(duì)預(yù)處理步驟進(jìn)行了優(yōu)化，請(qǐng)3。HybEZ?雜交爐中取HybEZ?HybEZ?載玻片架放入盤中。蓋上蓋，密封，將盤放17注意：必要，可在此步驟期間準(zhǔn)備RNAscope?2.5分析所需材料從雜交爐取HybEZ?濕度控制盤。從盤中取出HybEZ?滿蒸餾水的Tissue-Tek?染色皿中的Tissue-Tek?載玻片架上。進(jìn)行RNAscope?2.5分疑難解

附錄A組織預(yù)處理?xiàng)l采用不同于第1部分《FFPE組織樣品和預(yù)處理指南》（文件322452）中的樣品實(shí)驗(yàn)方案組織預(yù)處理?xiàng)l注意：請(qǐng)采用的組織固定時(shí)間。如果固定過度或固定不足，RNAscope?分析會(huì)出現(xiàn)明顯的信號(hào)損失根據(jù)您的組織類型（見下節(jié)），RNAscope?抗原修復(fù)試劑和RNAscope?蛋白PlusRNAscope?抗原修復(fù)試151530RNAscope?蛋白酶153030RNASCOPE?抗原修復(fù)試劑的處理時(shí)間改為8分鐘，將RNASCOPE?蛋白酶Plus的處理時(shí)間改為15分鐘。 如果您的樣品在新鮮10%NBF中成功固定（上述步驟2），請(qǐng)參照下表的組織特異性預(yù)處理?xiàng)l件。關(guān)于此 小鼠大腸腸腦脾肝腎人肺肺淋淋頸頸腦腦頭頸肝腎痣細(xì)胞沉淀物，用10%NBF—HeLa細(xì)胞，用10%福 PBS/ACD對(duì)—*化學(xué)品化學(xué)品全(MSDS)。如需獲取MSDS， 請(qǐng)確保廢棄物的、轉(zhuǎn)移、、棄置符合所有地方、州/省和/或生物危害安全

警告！生物危害。生物樣品（例如組織、體液、病原物以及人和其他動(dòng)物的血液）具有傳配備的設(shè)施在有適當(dāng)（例如物理設(shè)備）防護(hù)的條件下完成。在操作有潛在傳染性危害的物質(zhì)之前，操作應(yīng)根據(jù)適用的規(guī)定和公司/機(jī)構(gòu)要求接受培訓(xùn)。清閱讀并遵循以下適用的指南和/或規(guī)定要求：衛(wèi)生及公共服務(wù)部的微生物和生物醫(yī)學(xué)生物安全性指南，參見 職業(yè)安全性和健康標(biāo)準(zhǔn)，血液病原體(29CFR§1910.1030)，參見： 您的公司/機(jī)構(gòu)關(guān)于潛在傳染性物質(zhì)的操作/關(guān)于生物危害性指南的其他外信息，請(qǐng) 查詢關(guān)于生物危害和生物安全性預(yù)防措施的地方性指南和法律，參照世界衛(wèi)生組織（WHO）《生 獲得支聯(lián)系信

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