藥物分析巴比妥類藥物的分析課件

第一節(jié)、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第二節(jié)、鑒別試驗第三節(jié)、特殊雜質(zhì)檢查第四節(jié)、含量測定內(nèi)容第一節(jié)、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第二節(jié)、鑒別試驗第三節(jié)、特殊雜質(zhì)檢查第1目的和要求掌握巴比妥類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與分析方法間的關(guān)系；掌握巴比妥、苯巴比妥、司可巴比妥及硫代巴比妥類藥物的鑒別;巴比妥類藥物的銀量法與溴量法測定的原理與方法;熟悉巴比妥類藥物的紫外分光光度法;了解苯巴比妥的特殊雜質(zhì)及其檢查。目的和要求2第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、基本結(jié)構(gòu)

巴比妥類藥物的基本結(jié)構(gòu)通式環(huán)狀母核部分:

環(huán)狀丙二酰脲、1,3-二酰亞胺基團決定巴比妥類藥物的特性。取代基部分:區(qū)別各種巴比妥類藥物。第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、基本結(jié)構(gòu)巴比妥類藥物的基本結(jié)構(gòu)通式35,5-取代的巴比妥類藥物

巴比妥（Barbital）5CCCONONCOH5C2H5C2HH5,5-取代的巴比妥類藥物巴比妥（Barbital）5CC4苯巴比妥（Phenobarbital）5苯巴比妥（Phenobarbital）55司可巴比妥鈉（SecobarbitalSodium）5司可巴比妥鈉（SecobarbitalSodium）56戊巴比妥（Pentobarbital）CCCONONCOH5C2CH3(CH2)2CHHCH35戊巴比妥（Pentobarbital）CCCONONCOH57異戊巴比妥（Amobarbital）CCCONONCOH5C2CHCH2CH2CH3CH3H5異戊巴比妥（Amobarbital）CCCONONCOH5C8環(huán)己烯巴比妥5環(huán)己烯巴比妥591,5,5-取代的巴比妥類藥物51己瑣巴比妥1,5,5-取代的巴比妥類藥物51己瑣巴比妥10甲苯巴比妥51CCNCNHOOOH5C2CH3甲苯巴比妥51CCNCNHOOOH5C2CH311硫代巴比妥類藥物

硫噴妥鈉HCCCONONCSNaH5C2CH3CH2CH2CHCH352硫代巴比妥類藥物硫噴妥鈉HCCCONONCSNaH5C2C12一、主要性質(zhì)

物理性質(zhì)

白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，具有固定的熔點；游離巴比妥類藥物微溶或極微溶于水，易溶于乙醇及有機溶劑；其鈉鹽則易溶于水，而不溶于有機溶劑。

一、主要性質(zhì)物理性質(zhì)白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，具有固定的熔點13化學(xué)性質(zhì)弱酸性

巴比妥類藥物分子結(jié)構(gòu)中都有1,3-二酰亞胺基團，能發(fā)生酮式和烯醇式的互變異構(gòu)，在水溶液中可以發(fā)生二級電離。 本類藥物的水溶液顯弱酸性（pKa為7.3～8.4），可與強堿形成水溶性的鹽類。

巴比妥鈉鹽的水溶液呈堿性，加酸酸化后，析出結(jié)晶性的游離巴比妥類藥物，可用有機溶劑提取出來?；瘜W(xué)性質(zhì)14藥物分析巴比妥類藥物的分析課件15與強堿的成鹽反應(yīng)：CONHCNCOOHR1R2C+NaOHCONHCNCOONaR1R2C+H2O與強堿的成鹽反應(yīng)：CONHCNCOOHR1R2C+NaOH16水解反應(yīng)巴比妥類藥物的分子結(jié)構(gòu)中含有酰亞胺結(jié)構(gòu)，與堿液共沸即水解，釋放出氨氣，可使紅色石蕊試紙變藍。CONHCNCOOHR1R2C+5NaOHR1R2CHCOONa+2NH3+2Na2CO3水解反應(yīng)CONHCNCOOHR1R2C+5NaOHR117本類藥物鈉鹽在吸濕的情況下也能水解，在pH=10以下，水解較慢，pH=11以上，酸水解速度加快。H2OH2OCOONaR1R2CONHCONH2CR1R2CHCOONa+2NH3+2Na2CO3CONHCNCOONaR1R2C本類藥物鈉鹽在吸濕的情況下也能水解，在pH=10以下，水解較18與重金屬離子反應(yīng) 巴比妥類藥物的分子結(jié)構(gòu)中含有丙二酰脲（-CONHCONHCO-）或酰亞胺基團，在適當?shù)膒H條件下，可與某些重金屬離子反應(yīng)呈色或產(chǎn)生有色沉淀。與銀鹽的反應(yīng)5,5-取代的巴比妥類藥物+AgNO3+Na2CO3可溶性一銀鹽AgNO3白色二銀鹽沉淀可用于本類藥物的鑒別和含量測定與重金屬離子反應(yīng)5,5-取代的巴比妥類藥物+AgNO319CONHCNCOONaR1R2C+AgNO3+Na2CO3+NaNO3+NaHCO3CONCNCOONaR1R2CAgCONHCNCOONaR1R2C+AgNO3+Na2C20+AgNO3CONCNCOONaR1R2CAg+NaNO3CONCNCOOR1R2CAgAg+AgNO3CONCNCOONaR1R2CAg+NaNO21與銅鹽的反應(yīng)

巴比妥類藥物在吡啶溶液中生成的烯醇式異構(gòu)體與銅吡啶試液反應(yīng)，形成穩(wěn)定的配位化合物，產(chǎn)生類似雙縮脲的呈色反應(yīng)。銅吡啶試液的配制取CuSO44g，加水90ml使溶解后，加吡啶30ml，生成硫酸二吡啶銅，即為銅吡啶試液。巴比妥類藥物+銅吡啶試液紫堇色或紫色↓吡啶硫噴妥鈉+銅吡啶試液綠色吡啶與銅鹽的反應(yīng)銅吡啶試液的配制巴比妥類藥物+銅吡啶試液紫堇22水-吡啶CR1R2COCONHNHCOCR1R2COCONNHCOH部分離子化CR1R2COCONNHCO-+H+水-吡啶CR1R2COCONHNHCOCR1R2COCONN23有色配位化合物有色配位化合物24與鈷鹽的反應(yīng)

巴比妥類藥物在堿性溶液中可與鈷鹽生成紫堇色配合物?？捎糜诒绢愃幬锏蔫b別和含量測定。 本反應(yīng)在無水條件下比較靈敏，生成的有色產(chǎn)物較穩(wěn)定。因此，所用試劑應(yīng)不含水。 常用溶劑：無水甲醇或乙醇 鈷鹽：醋酸鈷、硝酸鈷或氧化鈷 堿：有機堿（如異丙胺）為佳與鈷鹽的反應(yīng)25CONHCONHCOR1R22+Co2++4(CH3)2CHNH2CoR2R1CONHCONCOR2R1NCONHCOCONHCH(CH3)2NHCH(CH3)2+(CH3)2CHN+H32CONHCONHCOR1R22+Co2++4(CH3)2CH26與汞鹽的反應(yīng)巴比妥類藥物+汞鹽（硝酸汞或氯化汞）白色↓（可溶于氨試液）與汞鹽的反應(yīng)巴比妥類藥物+汞鹽（硝酸汞或氯化汞）27+Hg(NO3)2CONCNCOOR1R2CHH-HNO3CONCNCOOR1R2CHgNO3HCONCNCOOHR1R2CHgNO3+CONCNCOOR1R2CHH-HNO3CONCNCO28CONCNCOOHR1R2CHgNO3+2NH3+H2O+NH4NO3CONCNCOONH4R1R2CHgNO3-+CONCNCOOHR1R2CHgNO3+2NH3+H229與香草醛反應(yīng)CONCNCOOR1R2CHCONCNCOOR1R2CHOHOCH3CHCONCNCOOR1R2CHHOHOCH3OHC+Δ與香草醛反應(yīng)CONCNCOOR1R2CHCONCNCOOR130紫外吸收光譜特征

巴比妥類藥物的紫外吸收光譜特征和其電離程度有關(guān)，在不同pH溶液中其紫外吸收光譜發(fā)生特征性變化，可用于本類藥物的鑒別、檢查和含量測定。5,5-取代的巴比妥類藥物pH=2酸性溶液中，不電離，無明顯的紫外吸收。pH=10堿性溶液中，發(fā)生一級電離，于240nm處有最大吸收。pH=13強堿性溶液中，發(fā)生二級電離，最大吸收紅移至255nm處。紫外吸收光譜特征31巴比妥類藥物的紫外吸收光譜H2SO4溶液

(0.05mol/L)緩沖溶液

(pH=9.9)NaOH溶液

(0.1mol/L)(pH=13)Anm未電離一級電離二級電離巴比妥類藥物的紫外吸收光譜H2SO4溶液Anm未電離一級電離32硫噴妥的紫外吸收光譜HCl溶液(0.1mol/L):NaOH溶液(0.1mol/L):

硫代巴比妥 硫代巴比妥類藥物在酸性或堿性溶液中，均有較明顯的紫外吸收。硫噴妥的紫外吸收光譜硫代巴比妥33

特殊元素及取代基的反應(yīng)不飽和烴取代基的反應(yīng)與溴試液或碘試液的反應(yīng)

司可巴比妥可使溴試液或碘試液褪色。與KMnO4的反應(yīng) 可還原紫色的KMnO4為棕色的MnO2。芳環(huán)取代基的反應(yīng)硝化反應(yīng)特殊元素及取代基的反應(yīng)34與NaNO2-H2SO4反應(yīng)與甲醛-H2SO4反應(yīng)

與硫元素的反應(yīng)與NaNO2-H2SO4反應(yīng)與硫元素的反應(yīng)35第二節(jié)鑒別試驗一、丙二酰脲類反應(yīng)苯巴比妥ChP（2005）【鑒別】本品顯丙二酰脲類的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）與銀鹽的反應(yīng)

取供試品約0.1g，加碳酸鈉試液1ml與水10m1，振搖2min，濾過，濾液中逐滴加入硝酸銀試液，即白色沉淀，振搖，沉淀即溶解；繼續(xù)滴加過量的硝酸銀試液，沉淀不再溶解。第二節(jié)鑒別試驗一、丙二酰脲類反應(yīng)36與銅鹽的反應(yīng) 取供試品約50mg，加吡啶溶液（1→10）5m1，溶解后，加銅吡啶試液（硫酸銅4g，水90ml溶解后，加吡啶30m1，即得）1m1，即顯紫色或生成紫色沉淀。二、熔點測定及衍生物熔點測定熔點測定巴比妥類的鈉鹽＋酸→游離巴比妥類藥物↓→過濾→洗滌→干燥→測熔點與銅鹽的反應(yīng)二、熔點測定及衍生物熔點測定巴比妥類的鈉鹽＋酸37

苯巴比妥鈉的鑒別Ch.P（2005）取本品約0.5g，加水5ml溶解后，加稍過量稀鹽酸，即析出白色結(jié)晶性沉淀，濾過；沉淀用水洗凈，在105℃干燥后，依法測定，熔點為174-178℃。苯巴比妥鈉的鑒別Ch.P（2005）38衍生物熔點測定鑒別丁巴比妥取丁巴比妥0.5g，加1mol/L碳酸鈉溶液5ml使溶解，加4.5％（W/V）對硝基氯芐的乙醇溶液10m1，在水浴上加熱回流30min，放置1h后，濾過，所得沉淀用96％的乙醇進行重結(jié)晶后，在100～105℃干燥，測定衍生物的熔點，應(yīng)為150℃左右。衍生物熔點測定鑒別丁巴比妥39三、特殊取代基或元素的反應(yīng)不飽和烴取代基的反應(yīng)

含不飽和取代基的巴比妥類藥物（如司可巴比妥），分子中的不飽和鍵可與碘、溴或高錳酸鉀作用，使碘、溴或高錳酸鉀褪色。與碘液的反應(yīng)+I2CONCNCOONaH2CCHCHCHH2CCH3H7C3CONCNCOONaH2CCHCHCHH2CCH3H7C3II三、特殊取代基或元素的反應(yīng)+I2CONCNCOONaH240司可巴比妥鈉ChP（2005）【鑒別】

取本品0.1g，加水10ml溶解后，加碘試液2m1，所顯棕黃色在5min內(nèi)消失。司可巴比妥鈉ChP（2005）41與高錳酸鉀的反應(yīng)+2KMnO4+4H2OCONCNCOONaH2CCHCHCHH2CCH3H7C33+2MnO2+2KOHCONCNCOONaH2CCHCHCHH2CCH3H7C3HOOH3（棕色沉淀）與高錳酸鉀的反應(yīng)+2KMnO4+4H2OCONCNCO42利用芳環(huán)取代基的鑒別實驗硝化反應(yīng)CONCNCOONaH2CCHH3CCONCNCOONaH2CCHH3CO2NNO2+2KNO3+H2SO4+2H2O+K2SO4利用芳環(huán)取代基的鑒別實驗CONCNCOONaH2CCHH3C43與硫酸-亞硝酸反應(yīng)

本法對巴比妥不顯色，可用于苯巴比妥與巴比妥等不含芳環(huán)取代基的本類藥物的區(qū)別。

苯巴比妥ChP（2005）【鑒別】取本品約10mg，加硫酸2滴與亞硝酸鈉約5mg，混合，即顯橙黃色，隨即轉(zhuǎn)橙紅色。與硫酸-亞硝酸反應(yīng)苯巴比妥ChP（2005）44與硫酸-甲醛反應(yīng)苯巴比妥與硫酸-甲醛反應(yīng)，生成玫瑰紅產(chǎn)物。巴比妥和其他無芳環(huán)取代的巴比妥類藥物無此反應(yīng)，可供區(qū)別。苯巴比妥ChP（2005）【鑒別】取本品約50mg，置試管中，加甲醛試液1ml，加熱煮沸，冷卻，沿管壁緩緩加硫酸0.5ml，使成兩液層，置水浴中加熱，界面顯玫瑰紅色。與硫酸-甲醛反應(yīng)苯巴比妥ChP（2005）45硫元素的反應(yīng) 硫代巴比妥類分子中的硫元素可在NaOH溶液中與鉛離子反應(yīng)生成白色沉淀，加熱后，轉(zhuǎn)變?yōu)楹谏牧蚧U?？捎糜诹虼捅韧最惻c巴比妥類的區(qū)別。CONCNCOSNaH2CCHH3CCHCH3H7C3+Pb2+PbSCONCNCOSH2CCHH3CCHCH3H7C32PbΔ硫元素的反應(yīng)CONCNCOSNaH2CCHH3CCHCH3H46

注射用硫噴妥鈉ChP（2005）【鑒別】

取本品約0.2g，加氫氧化鈉試液5ml與醋酸鉛試液2ml，生成白色沉淀；加熱后，沉淀變?yōu)楹谏Ｗ⑸溆昧驀娡租cChP（2005）47四、紅外光譜法

《中國藥典》收載的巴比妥類藥物，幾乎都采用紅外光譜作為鑒別方法。司可巴比妥鈉ChP（2005）【鑒別】本品的紅外光吸收圖譜與對照的圖譜（光譜集137圖）一致。四、紅外光譜法司可巴比妥鈉ChP（2005）48五、顯微結(jié)晶鑒別—特色鑒別反應(yīng)藥物本身的晶形巴比妥：長方形苯巴比妥：球形→花瓣狀反應(yīng)產(chǎn)物的晶形巴比妥＋銅吡啶試液→十字形紫色結(jié)晶苯巴比妥＋銅吡啶試液→細小不規(guī)則或似菱形淺紫色結(jié)晶五、顯微結(jié)晶鑒別—特色鑒別反應(yīng)49第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、苯巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查苯巴比妥的合成工藝：CH2CONH2CH2COOC2H5水解，酯化C2H5OH，H2SO4O=COC2H5OC2H5C=C–ONaCOOC2H5COOC2H5縮合C2H5ONa（Ⅰ）酸化，消除HCl第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、苯巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查CH2CONH50CHCOOC2H5COOC2H5CCOOC2H5COOC2H5H5C2乙基取代C2H5BrO=CNH2NH2環(huán)合CH3ONa，NNOOH5C2ONaH酸析HClNNOOH5C2OHH（Ⅱ）CHCOOC2H5COOC2H5CCOOC2H5COOC2H51苯巴比妥中的特殊雜質(zhì)主要是中間體Ⅰ和Ⅱ，以及副反應(yīng)產(chǎn)物，常通過檢查酸度、乙醇溶液的澄清度及中性或堿性物質(zhì)來加以控制。酸度檢查主要用于控制中間體Ⅱ乙基化反應(yīng)不完全時，與尿素縮合產(chǎn)生酸性比苯巴比妥強的副產(chǎn)物苯基丙二酰脲，能使甲基橙指示劑顯紅色。在一定量苯巴比妥供試品水溶液中，加入甲基橙指示劑不得顯紅色，控制酸性雜質(zhì)的量苯巴比妥中的特殊雜質(zhì)主要是中間體Ⅰ和Ⅱ，以及副反應(yīng)產(chǎn)物，52乙醇溶液的澄清度原理： 主要利用酸性雜質(zhì)在乙醇溶液中溶解度小來嚴格控制苯巴比妥中酸性雜質(zhì)的量。方法： 取供試品1.0g，加乙醇5ml加熱回流3min，溶液應(yīng)澄清。乙醇溶液的澄清度53中性或堿性雜質(zhì)的檢查

原理：

該類雜質(zhì)主要是中間體Ⅰ的副產(chǎn)物（2-苯基丁酰胺，2-苯基丁酰脲），不溶于NaOH試液但溶于乙醚；苯巴比妥具有酸性，溶于NaOH試液。方法：

取供試品1.0g，加NaOH試液10ml，加水5ml與乙醚25ml，振搖1min，分取乙醚層，經(jīng)干燥濾紙濾過，濾液置于蒸發(fā)皿中蒸干，遺留殘渣不得超過3mg。中性或堿性雜質(zhì)的檢查54二、司可巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查司可巴比妥的合成工藝：COOC2H5COOC2H5CH2COOC2H5COOC2H5CCH3CH2CH2CHCH3H縮合CH3CH2CH2CHCH3Br環(huán)合H2NCONH2，C2H5ONaNNOOONaHCH3CH2CH2CHCH3H二、司可巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查COOC2H5COOC2H5CH55NNOOOHCH3CH2CH2CHCH3HHH+NNOOONaHCH3CH2CH2CHCH3CH2=CHCH2CH3CHBrCH2Br，NaOH丙烯化NaOH，C2H5ONa，CH3COCH3成鹽NNOOOHCH3CH2CH2CHCH3CH2=CHCH2HNNOOOHCH3CH2CH2CHCH3HHH+NNOOON56溶液的澄清度原理： 司可巴比妥極易溶于水，水溶液應(yīng)澄清，否則表明含有水不溶性雜質(zhì)。 司可巴比妥水溶液易和CO2作用析出司可巴比妥，故水應(yīng)先煮沸除去CO2。方法： 取供試品1.0g，加新沸過的冷水10ml溶解，溶液應(yīng)澄清。溶液的澄清度57中性或堿性雜質(zhì)的檢查

原理：

該類雜質(zhì)主要是合成過程中的副產(chǎn)物（酰脲、酰胺類物質(zhì)），不溶于NaOH試液但溶于乙醚；方法： 檢查方法同苯巴比妥。中性或堿性雜質(zhì)的檢查58第四節(jié)含量測定

巴比妥類藥物的含量測定方法：銀量法、溴量法、紫外分光光度法、酸堿滴定法、提取重量法、HPLC法、GC法及電泳法。一、銀量法原理：巴比妥類藥物可溶性一銀鹽AgNO3白色二銀鹽沉淀AgNO3可溶性一銀鹽（指示滴定終點）第四節(jié)含量測定 巴比妥類藥物的含量測定方法：銀量法、溴量法59注意事項：本法受溫度影響較大，在接近終點是反應(yīng)較慢，難以準確觀察滴定終點。二銀鹽具有一定的溶解度，測定結(jié)果偏高?！吨袊幍洹凡捎眉状技?%無水碳酸鈉溶液溶劑系統(tǒng)，銀-玻璃電極系統(tǒng)電位法指示終點。無水碳酸鈉溶液需臨時新配制（久置可吸收CO2）。銀電極需用硝酸浸洗，然后用水淋洗。注意事項：60一、溴量法原理：

凡取代基中含有雙鍵的巴比妥類藥物（如司可巴比妥鈉），可與溴定量地發(fā)生加成反應(yīng)。NNOOOHCH3CH2CH2CHCH3CH2=CH2CH2H+Br2NNOOOHCH3CH2CH2CHCH3CH2CHCH2HBrBrBr2（過量）

+2KI→2KBr+I2I2+2Na2S2O3→2NaI+Na2S4O6一、溴量法NNOOOHCH3CH2CH2CHCH3CH2=C61溴滴定液（0.1mol/L）的配制：

取溴酸鉀3.0g與溴化鉀15g，加水適量使溶解成1000ml，搖勻。

KBrO3＋5KBr＋6HCl＝3Br2＋6KCl＋3H2O注意事項：操作中要防止溴和碘的逸失。平行條件進行空白試驗可減少溴和碘逸失帶來的誤差。溴滴定液（0.1mol/L）的配制：62

司可巴比妥鈉ChP（2005）取本品約0.1g，精密稱定，置250ml碘瓶中，加水10m1，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L）25ml，再加鹽酸5m1，立即密塞并振搖1min，在暗處靜置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10m1，立即密塞，搖勻后，用Na2S2O3滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。每1ml溴滴定液（0.1mo1/L）相當于13.01mg的C12H17N2NaO3。司可巴比妥鈉ChP（2005）63含量計算（原料藥：剩余滴定法）含量計算64三、酸堿滴定法在水-乙醇混合溶劑中滴定 原理：

NNOOOHCH3CHCH2CH2CH3CH3CH2H+NaOHNNOOONaHCH3CHCH2CH2CH3CH3CH2+H2O三、酸堿滴定法NNOOOHCH3CHCH2CH2CH3CH365注意事項：溶劑：水-乙醇滴定劑：NaOH指示劑：麝香草酚酞（終點為淡藍色）操作簡單，但終點難以判斷，需采用空白對照幫助確定終點。操作過程中易吸收CO2而使終點的淡藍色褪去，最好采用電位法指示終點。注意事項：66原料藥的直接滴定法（空白校正）

T：滴定度，每1ml滴定液相當于被測組分的毫克數(shù)V：供試品消耗滴定液的體積（ml）V0：空白消耗滴定液的體積（ml）ms：供試品的質(zhì)量F：濃度校正因子，原料藥的直接滴定法（空白校正）T：滴定度，每1ml滴定67在膠束水溶液中滴定 原理：表面活性劑能改變巴比妥類藥物的電離平衡，使藥物的Ka值增大，酸性增強，從而滴定終點明顯。滴定劑：NaOH常用表面活性劑：溴化十六烷基三甲基芐胺（CTMC）氯化四癸基二甲基芐胺（TDBA）在膠束水溶液中滴定68非水溶液滴定法 原理：巴比妥類藥物在非水溶劑中的酸性增強，從而滴定終點明顯。指示劑：麝香草酚藍或電位法指示終點滴定劑：甲醇鈉（鉀）的甲醇或乙醇溶液氫氧化四丁基胺的氯苯溶液常用溶劑：二甲基甲酰胺、甲醇、丙酮、三氯甲烷無水乙醇、苯、吡啶、甲醇-苯（15:85）非水溶液滴定法69四、紫外分光光度法

巴比妥類藥物在酸性介質(zhì)中幾乎不電離，無紫外吸收，在堿性介質(zhì)中電離為具有紫外吸收特征的結(jié)構(gòu)。直接測定的紫外分光度法 將供試品溶解后，根據(jù)其pH值，選用相應(yīng)的λmax處，直接測定對照品溶液和供試品溶液的吸光度值。

As：供試品溶液吸光度Au：對照品溶液吸光度Cs：對照品溶液濃度(mg/ml)

V：稀釋體積(ml)四、紫外分光光度法As：供試品溶液吸光度70巴比妥類藥物的紫外吸收的有關(guān)數(shù)據(jù)巴比妥類藥物的紫外吸收的有關(guān)數(shù)據(jù)71注射用硫噴妥鈉

ChP（2005）本品為硫噴妥鈉100份與無水碳酸鈉6份混合的滅菌粉末。按平均裝量計算，含硫噴妥鈉應(yīng)為標示量的93.0%～107.0%。取裝量差異項下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當于硫噴妥鈉0.25g），置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液；另取硫噴妥對照品，精密稱定，加0.4%NaOH溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液。照分光光度法，在304nm的波長處分別測定A，根據(jù)每支的平均裝量計算。每1mg硫噴妥相當于1.091mg的C11H17N2NaO2S。注射用硫噴妥鈉ChP（2005）72

注射用滅菌粉末

注射用滅菌粉末73

提取分離后的紫外分光度法 如供試品中有干擾物質(zhì)，可采用提取分離的方法除去干擾物質(zhì)后，再用紫外分光光度法測定。 可根據(jù)巴比妥類藥物具弱酸性，在三氯甲烷等有機溶劑中易溶，而其鈉鹽在水中易溶的特點進行提取分離。提取分離后的紫外分光度法74差示分光光度法（A法）測定方法：

取兩份相等的供試溶液，分別制成兩種不同的化學(xué)環(huán)境（如在其一中加酸、堿或緩沖液改變?nèi)芤旱膒H，或在其一中加能與供試品發(fā)生某種化學(xué)反應(yīng)的試劑），然后將兩者分別稀釋至同樣濃度，一份置樣品池中，另一份置參比池中，于適當波長處，測其吸收度的差值（A值）。差示分光光度法（A法）75

必要條件： 供試品在不同的化學(xué)環(huán)境中以不同的分子形式存在，它們的吸收光譜有顯著的差異。 干擾物的吸收不受測定時化學(xué)環(huán)境的影響，光譜行為不變。定量依據(jù)：

供試品在兩種不同的化學(xué)環(huán)境中分別以x、y表示，干擾物用z表示必要條件：76特點： 吸收度差值（A）僅與待測組分的濃度有關(guān)，而與干擾組分無關(guān)，即干擾組分的干擾被消除。 保留了通常的分光光度法簡易快速、直接讀數(shù)的優(yōu)點，又無需事先分離，并能消除干擾。特點：77

五、高效液相色譜法

多用于制劑及體液中的巴比妥類藥物的測定。例：血清中苯巴比妥、苯妥英和卡馬西平的測定

色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18柱 流動相：水-甲醇-乙腈（45:45:10）

流速：1.0ml/min

柱溫度：30℃

內(nèi)標：阿普唑侖的甲醇溶液(5μg/ml)五、高效液相色譜法78

檢測波長：254nm

樣品處理： 于60℃水浴中N2吹干，加提取液(三氯甲烷:乙酸乙酯=50:50)2ml,渦旋混合5min，4000r/min離心10min，取有機相1ml置塑料離心管中，于60℃水浴中N2吹干，用流動相200μl溶解，取20μl進樣。

計算方法：

在對照品與內(nèi)標峰面積比值與對照品濃度之間建立標準校正曲線（n=5）。 檢測波長：254nm79六、電泳法

具有分離度高、樣品和試劑用量少、快速的特點，適用于巴比妥類藥物體內(nèi)含量分析。例：尿樣中苯巴比妥和巴比妥的測定

色譜柱：熔融石英毛細管柱 背景電解質(zhì)：甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液(pH=11)

樣品電解質(zhì)：甘氨酸-鹽酸鈉緩沖液(pH=5.5)

分離電壓：12.5kV

操作溫度：24℃

檢測波長：214nm六、電泳法80

內(nèi)標：司可巴比妥

樣品處理： 精密量取尿樣400ml于離心管中，調(diào)節(jié)pH4.0，依次加入50μl內(nèi)標和50μl200mmol/L甘氨酸溶液,渦旋混合1min，加入400μl乙酸乙酯，振搖2min，11180r/min離心10min，取有機相至另一離心管（兩次提?。婵粘楦?，以乙醇復(fù)溶解，加入樣品電解質(zhì)緩沖液至400μl

。

計算方法：

在對照品與內(nèi)標峰面積比值與對照品濃度之間建立標準校正曲線（n=5）。 內(nèi)標：司可巴比妥81七、氣相色譜-質(zhì)譜法

采用直接固相微萃取GC-MS可同時測定人體液中異戊巴比妥、苯巴比妥、司可巴比妥、環(huán)己烯巴比妥、戊巴比妥、撲米酮和甲苯巴比妥等七種巴比妥類藥物的含量。例：血樣中七種巴比妥類藥物含量的測定

儀器：島津GCMS-QP5050A；色譜柱：HP-1

載氣：氦氣；流速：1.1ml/min

進樣口溫度：270℃；接口溫度：240℃

柱升溫程序：100℃(1min)

280℃20℃/min七、氣相色譜-質(zhì)譜法20℃/min82

定量m/z：異戊巴比妥(156)、苯巴比妥(204)、司可巴比妥(168)、環(huán)己烯巴比妥(221)、戊巴比妥(156)、撲米酮(190)、甲苯巴比妥(218)樣品處理：

精密量取0.5ml待測血樣，加入1.5ml高氯酸于去除蛋白質(zhì)，渦旋混合1min，1630r/min離心10min，精密量取1.5ml上清液，放于有磁攪拌子和0.5g硫酸鈉的2ml微反應(yīng)管中，以0.1mol、/L氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)pH6.0～7.0，封口后放入加熱器中，60℃攪拌加熱15min后，將SPME萃取頭插入樣品也中萃取，繼續(xù)攪拌60min，取出萃取頭后，直接插入GC進樣口，解吸10min后分析。 定量m/z：83本章學(xué)習(xí)要求掌握巴比妥類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與分析方法間關(guān)系弱酸性水解性與重金屬離子的反應(yīng)掌握巴比妥類藥物的鑒別：與重金屬的反應(yīng)特殊取代基和硫元素的鑒別試驗掌握巴比妥類藥物含量測定的原理與方法銀量法測定：溴量法測定：紫外分光光度法測定本章學(xué)習(xí)要求84自測題巴比妥類藥物具有的特性為：A.弱堿性B.弱酸性C.易與重金屬離子絡(luò)合D.易水解E.具有紫外特征吸收自測題巴比妥類藥物具有的特性為：85硫噴妥鈉與銅鹽的鑒別反應(yīng)生成物為()紫色綠色藍色黃色紫堇色硫噴妥鈉與銅鹽的鑒別反應(yīng)生成物為()86巴比妥類藥物在吡啶溶液中與銅吡啶試液作用，生成紫堇色或紫色沉淀的藥物是()苯巴比妥異戊巴比妥司可巴比妥巴比妥硫噴妥鈉巴比妥類藥物在吡啶溶液中與銅吡啶試液作用，生成紫堇色或紫色沉87巴比妥類藥物中與堿溶液共沸產(chǎn)生氨氣的是（）；在堿性溶液中與硝酸銀試液反應(yīng)生成白色沉淀的是（）；在堿性溶液中與Pb2+離子反應(yīng)，加熱后有黑色沉淀（）；與甲醛-硫酸反應(yīng)生成玫瑰紅色環(huán)（）；在酸性溶液中與三氯化鐵反應(yīng)顯紫堇色（）。

A.硫噴妥鈉B.苯巴比妥

C.A和B均可D.A和B均不可CCABD巴比妥類藥物中與堿溶液共沸產(chǎn)生氨氣的是（）；在堿性溶液中與88巴比妥類藥物的鑒別方法有（）與鋇鹽反應(yīng)生成白色化合物與鎂鹽反應(yīng)生成紅色化合物與銀鹽反應(yīng)生成白色沉淀與銅鹽反應(yīng)生成有色產(chǎn)物巴比妥類藥物的鑒別方法有（）89凡取代基中含有雙鍵的巴比妥類藥物，如司可巴比妥鈉，中國藥典（2005）采用的方法是（）酸量法堿量法銀量法溴量法比色法凡取代基中含有雙鍵的巴比妥類藥物，如司可巴比妥鈉，中國藥典（90于Na2CO3溶液中加AgNO3試液，開始生成白色沉淀經(jīng)振搖即溶解，繼續(xù)加AgNO3試液，生成的沉淀則不再溶解，該藥物應(yīng)是（)鹽酸可待因咖啡因新霉素維生素異戊巴比妥于Na2CO3溶液中加AgNO3試液，開始生成白色沉淀經(jīng)振搖91與NaNO2-H2SO4反應(yīng)生成橙黃至橙紅色產(chǎn)物的藥物是（)苯巴比妥司可巴比妥巴比妥硫噴妥鈉硫酸奎寧與NaNO2-H2SO4反應(yīng)生成橙黃至橙紅色產(chǎn)物的藥物是（92中國藥典(2005)采用AgNO3(0.1mol/L)滴定液滴定苯巴比妥的含量時，指示終點的方法應(yīng)是（)K2CrO4溶液熒光黃指示液Fe(Ⅲ)鹽指示液電位法指示終點法中國藥典(2005)采用AgNO3(0.1mol/L)滴定液93銀量法測定苯巴比妥鈉含量時,若用自身指示法來判斷終點,樣品消耗標準溶液的摩爾比應(yīng)為（)1:22:11:11:4以上都不對銀量法測定苯巴比妥鈉含量時,若用自身指示法來判斷終點,樣品消94非水溶液滴定法測定巴比妥類藥物含量時，下面哪些條件可采用（)

冰醋酸為溶劑二甲基甲酰胺為溶劑高氯酸為滴定劑甲醇鈉為滴定劑結(jié)晶紫為指示劑非水溶液滴定法測定巴比妥類藥物含量時，下面哪些條件可采用（95下列哪些性質(zhì)適用于巴比妥類藥物（)母核為1,3-二酰亞胺基團母核中含2個氮原子與堿共熱，有氨氣放出水溶液呈弱堿性下列哪些性質(zhì)適用于巴比妥類藥物（)96司可巴比妥鈉（分子量為260.27）采用溴量法測定含量時，每lml溴滴定液(0.05mol/L)相當于司可巴比妥鈉的毫克數(shù)為（)1.3012.60326.0352.0513.01司可巴比妥鈉（分子量為260.27）采用溴量法測定含量時，每97中國藥典（2005）采用銀量法測定苯巴比妥片劑時，應(yīng)選用的試劑有（)甲醇AgNO33％無水碳酸鈉溶液終點指示液KSCN中國藥典（2005）采用銀量法測定苯巴比妥片劑時，應(yīng)選用的試98第一節(jié)、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第二節(jié)、鑒別試驗第三節(jié)、特殊雜質(zhì)檢查第四節(jié)、含量測定內(nèi)容第一節(jié)、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第二節(jié)、鑒別試驗第三節(jié)、特殊雜質(zhì)檢查第99目的和要求掌握巴比妥類藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與分析方法間的關(guān)系；掌握巴比妥、苯巴比妥、司可巴比妥及硫代巴比妥類藥物的鑒別;巴比妥類藥物的銀量法與溴量法測定的原理與方法;熟悉巴比妥類藥物的紫外分光光度法;了解苯巴比妥的特殊雜質(zhì)及其檢查。目的和要求100第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、基本結(jié)構(gòu)

巴比妥類藥物的基本結(jié)構(gòu)通式環(huán)狀母核部分:

環(huán)狀丙二酰脲、1,3-二酰亞胺基團決定巴比妥類藥物的特性。取代基部分:區(qū)別各種巴比妥類藥物。第一節(jié)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、基本結(jié)構(gòu)巴比妥類藥物的基本結(jié)構(gòu)通式1015,5-取代的巴比妥類藥物

巴比妥（Barbital）5CCCONONCOH5C2H5C2HH5,5-取代的巴比妥類藥物巴比妥（Barbital）5CC102苯巴比妥（Phenobarbital）5苯巴比妥（Phenobarbital）5103司可巴比妥鈉（SecobarbitalSodium）5司可巴比妥鈉（SecobarbitalSodium）5104戊巴比妥（Pentobarbital）CCCONONCOH5C2CH3(CH2)2CHHCH35戊巴比妥（Pentobarbital）CCCONONCOH5105異戊巴比妥（Amobarbital）CCCONONCOH5C2CHCH2CH2CH3CH3H5異戊巴比妥（Amobarbital）CCCONONCOH5C106環(huán)己烯巴比妥5環(huán)己烯巴比妥51071,5,5-取代的巴比妥類藥物51己瑣巴比妥1,5,5-取代的巴比妥類藥物51己瑣巴比妥108甲苯巴比妥51CCNCNHOOOH5C2CH3甲苯巴比妥51CCNCNHOOOH5C2CH3109硫代巴比妥類藥物

硫噴妥鈉HCCCONONCSNaH5C2CH3CH2CH2CHCH352硫代巴比妥類藥物硫噴妥鈉HCCCONONCSNaH5C2C110一、主要性質(zhì)

物理性質(zhì)

白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，具有固定的熔點；游離巴比妥類藥物微溶或極微溶于水，易溶于乙醇及有機溶劑；其鈉鹽則易溶于水，而不溶于有機溶劑。

一、主要性質(zhì)物理性質(zhì)白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，具有固定的熔點111化學(xué)性質(zhì)弱酸性

巴比妥類藥物分子結(jié)構(gòu)中都有1,3-二酰亞胺基團，能發(fā)生酮式和烯醇式的互變異構(gòu)，在水溶液中可以發(fā)生二級電離。 本類藥物的水溶液顯弱酸性（pKa為7.3～8.4），可與強堿形成水溶性的鹽類。

巴比妥鈉鹽的水溶液呈堿性，加酸酸化后，析出結(jié)晶性的游離巴比妥類藥物，可用有機溶劑提取出來?；瘜W(xué)性質(zhì)112藥物分析巴比妥類藥物的分析課件113與強堿的成鹽反應(yīng)：CONHCNCOOHR1R2C+NaOHCONHCNCOONaR1R2C+H2O與強堿的成鹽反應(yīng)：CONHCNCOOHR1R2C+NaOH114水解反應(yīng)巴比妥類藥物的分子結(jié)構(gòu)中含有酰亞胺結(jié)構(gòu)，與堿液共沸即水解，釋放出氨氣，可使紅色石蕊試紙變藍。CONHCNCOOHR1R2C+5NaOHR1R2CHCOONa+2NH3+2Na2CO3水解反應(yīng)CONHCNCOOHR1R2C+5NaOHR1115本類藥物鈉鹽在吸濕的情況下也能水解，在pH=10以下，水解較慢，pH=11以上，酸水解速度加快。H2OH2OCOONaR1R2CONHCONH2CR1R2CHCOONa+2NH3+2Na2CO3CONHCNCOONaR1R2C本類藥物鈉鹽在吸濕的情況下也能水解，在pH=10以下，水解較116與重金屬離子反應(yīng) 巴比妥類藥物的分子結(jié)構(gòu)中含有丙二酰脲（-CONHCONHCO-）或酰亞胺基團，在適當?shù)膒H條件下，可與某些重金屬離子反應(yīng)呈色或產(chǎn)生有色沉淀。與銀鹽的反應(yīng)5,5-取代的巴比妥類藥物+AgNO3+Na2CO3可溶性一銀鹽AgNO3白色二銀鹽沉淀可用于本類藥物的鑒別和含量測定與重金屬離子反應(yīng)5,5-取代的巴比妥類藥物+AgNO3117CONHCNCOONaR1R2C+AgNO3+Na2CO3+NaNO3+NaHCO3CONCNCOONaR1R2CAgCONHCNCOONaR1R2C+AgNO3+Na2C118+AgNO3CONCNCOONaR1R2CAg+NaNO3CONCNCOOR1R2CAgAg+AgNO3CONCNCOONaR1R2CAg+NaNO119與銅鹽的反應(yīng)

巴比妥類藥物在吡啶溶液中生成的烯醇式異構(gòu)體與銅吡啶試液反應(yīng)，形成穩(wěn)定的配位化合物，產(chǎn)生類似雙縮脲的呈色反應(yīng)。銅吡啶試液的配制取CuSO44g，加水90ml使溶解后，加吡啶30ml，生成硫酸二吡啶銅，即為銅吡啶試液。巴比妥類藥物+銅吡啶試液紫堇色或紫色↓吡啶硫噴妥鈉+銅吡啶試液綠色吡啶與銅鹽的反應(yīng)銅吡啶試液的配制巴比妥類藥物+銅吡啶試液紫堇120水-吡啶CR1R2COCONHNHCOCR1R2COCONNHCOH部分離子化CR1R2COCONNHCO-+H+水-吡啶CR1R2COCONHNHCOCR1R2COCONN121有色配位化合物有色配位化合物122與鈷鹽的反應(yīng)

巴比妥類藥物在堿性溶液中可與鈷鹽生成紫堇色配合物?？捎糜诒绢愃幬锏蔫b別和含量測定。 本反應(yīng)在無水條件下比較靈敏，生成的有色產(chǎn)物較穩(wěn)定。因此，所用試劑應(yīng)不含水。 常用溶劑：無水甲醇或乙醇 鈷鹽：醋酸鈷、硝酸鈷或氧化鈷 堿：有機堿（如異丙胺）為佳與鈷鹽的反應(yīng)123CONHCONHCOR1R22+Co2++4(CH3)2CHNH2CoR2R1CONHCONCOR2R1NCONHCOCONHCH(CH3)2NHCH(CH3)2+(CH3)2CHN+H32CONHCONHCOR1R22+Co2++4(CH3)2CH124與汞鹽的反應(yīng)巴比妥類藥物+汞鹽（硝酸汞或氯化汞）白色↓（可溶于氨試液）與汞鹽的反應(yīng)巴比妥類藥物+汞鹽（硝酸汞或氯化汞）125+Hg(NO3)2CONCNCOOR1R2CHH-HNO3CONCNCOOR1R2CHgNO3HCONCNCOOHR1R2CHgNO3+CONCNCOOR1R2CHH-HNO3CONCNCO126CONCNCOOHR1R2CHgNO3+2NH3+H2O+NH4NO3CONCNCOONH4R1R2CHgNO3-+CONCNCOOHR1R2CHgNO3+2NH3+H2127與香草醛反應(yīng)CONCNCOOR1R2CHCONCNCOOR1R2CHOHOCH3CHCONCNCOOR1R2CHHOHOCH3OHC+Δ與香草醛反應(yīng)CONCNCOOR1R2CHCONCNCOOR1128紫外吸收光譜特征

巴比妥類藥物的紫外吸收光譜特征和其電離程度有關(guān)，在不同pH溶液中其紫外吸收光譜發(fā)生特征性變化，可用于本類藥物的鑒別、檢查和含量測定。5,5-取代的巴比妥類藥物pH=2酸性溶液中，不電離，無明顯的紫外吸收。pH=10堿性溶液中，發(fā)生一級電離，于240nm處有最大吸收。pH=13強堿性溶液中，發(fā)生二級電離，最大吸收紅移至255nm處。紫外吸收光譜特征129巴比妥類藥物的紫外吸收光譜H2SO4溶液

(0.05mol/L)緩沖溶液

(pH=9.9)NaOH溶液

(0.1mol/L)(pH=13)Anm未電離一級電離二級電離巴比妥類藥物的紫外吸收光譜H2SO4溶液Anm未電離一級電離130硫噴妥的紫外吸收光譜HCl溶液(0.1mol/L):NaOH溶液(0.1mol/L):

硫代巴比妥 硫代巴比妥類藥物在酸性或堿性溶液中，均有較明顯的紫外吸收。硫噴妥的紫外吸收光譜硫代巴比妥131

特殊元素及取代基的反應(yīng)不飽和烴取代基的反應(yīng)與溴試液或碘試液的反應(yīng)

司可巴比妥可使溴試液或碘試液褪色。與KMnO4的反應(yīng) 可還原紫色的KMnO4為棕色的MnO2。芳環(huán)取代基的反應(yīng)硝化反應(yīng)特殊元素及取代基的反應(yīng)132與NaNO2-H2SO4反應(yīng)與甲醛-H2SO4反應(yīng)

與硫元素的反應(yīng)與NaNO2-H2SO4反應(yīng)與硫元素的反應(yīng)133第二節(jié)鑒別試驗一、丙二酰脲類反應(yīng)苯巴比妥ChP（2005）【鑒別】本品顯丙二酰脲類的鑒別反應(yīng)（附錄Ⅲ）與銀鹽的反應(yīng)

取供試品約0.1g，加碳酸鈉試液1ml與水10m1，振搖2min，濾過，濾液中逐滴加入硝酸銀試液，即白色沉淀，振搖，沉淀即溶解；繼續(xù)滴加過量的硝酸銀試液，沉淀不再溶解。第二節(jié)鑒別試驗一、丙二酰脲類反應(yīng)134與銅鹽的反應(yīng) 取供試品約50mg，加吡啶溶液（1→10）5m1，溶解后，加銅吡啶試液（硫酸銅4g，水90ml溶解后，加吡啶30m1，即得）1m1，即顯紫色或生成紫色沉淀。二、熔點測定及衍生物熔點測定熔點測定巴比妥類的鈉鹽＋酸→游離巴比妥類藥物↓→過濾→洗滌→干燥→測熔點與銅鹽的反應(yīng)二、熔點測定及衍生物熔點測定巴比妥類的鈉鹽＋酸135

苯巴比妥鈉的鑒別Ch.P（2005）取本品約0.5g，加水5ml溶解后，加稍過量稀鹽酸，即析出白色結(jié)晶性沉淀，濾過；沉淀用水洗凈，在105℃干燥后，依法測定，熔點為174-178℃。苯巴比妥鈉的鑒別Ch.P（2005）136衍生物熔點測定鑒別丁巴比妥取丁巴比妥0.5g，加1mol/L碳酸鈉溶液5ml使溶解，加4.5％（W/V）對硝基氯芐的乙醇溶液10m1，在水浴上加熱回流30min，放置1h后，濾過，所得沉淀用96％的乙醇進行重結(jié)晶后，在100～105℃干燥，測定衍生物的熔點，應(yīng)為150℃左右。衍生物熔點測定鑒別丁巴比妥137三、特殊取代基或元素的反應(yīng)不飽和烴取代基的反應(yīng)

含不飽和取代基的巴比妥類藥物（如司可巴比妥），分子中的不飽和鍵可與碘、溴或高錳酸鉀作用，使碘、溴或高錳酸鉀褪色。與碘液的反應(yīng)+I2CONCNCOONaH2CCHCHCHH2CCH3H7C3CONCNCOONaH2CCHCHCHH2CCH3H7C3II三、特殊取代基或元素的反應(yīng)+I2CONCNCOONaH2138司可巴比妥鈉ChP（2005）【鑒別】

取本品0.1g，加水10ml溶解后，加碘試液2m1，所顯棕黃色在5min內(nèi)消失。司可巴比妥鈉ChP（2005）139與高錳酸鉀的反應(yīng)+2KMnO4+4H2OCONCNCOONaH2CCHCHCHH2CCH3H7C33+2MnO2+2KOHCONCNCOONaH2CCHCHCHH2CCH3H7C3HOOH3（棕色沉淀）與高錳酸鉀的反應(yīng)+2KMnO4+4H2OCONCNCO140利用芳環(huán)取代基的鑒別實驗硝化反應(yīng)CONCNCOONaH2CCHH3CCONCNCOONaH2CCHH3CO2NNO2+2KNO3+H2SO4+2H2O+K2SO4利用芳環(huán)取代基的鑒別實驗CONCNCOONaH2CCHH3C141與硫酸-亞硝酸反應(yīng)

本法對巴比妥不顯色，可用于苯巴比妥與巴比妥等不含芳環(huán)取代基的本類藥物的區(qū)別。

苯巴比妥ChP（2005）【鑒別】取本品約10mg，加硫酸2滴與亞硝酸鈉約5mg，混合，即顯橙黃色，隨即轉(zhuǎn)橙紅色。與硫酸-亞硝酸反應(yīng)苯巴比妥ChP（2005）142與硫酸-甲醛反應(yīng)苯巴比妥與硫酸-甲醛反應(yīng)，生成玫瑰紅產(chǎn)物。巴比妥和其他無芳環(huán)取代的巴比妥類藥物無此反應(yīng)，可供區(qū)別。苯巴比妥ChP（2005）【鑒別】取本品約50mg，置試管中，加甲醛試液1ml，加熱煮沸，冷卻，沿管壁緩緩加硫酸0.5ml，使成兩液層，置水浴中加熱，界面顯玫瑰紅色。與硫酸-甲醛反應(yīng)苯巴比妥ChP（2005）143硫元素的反應(yīng) 硫代巴比妥類分子中的硫元素可在NaOH溶液中與鉛離子反應(yīng)生成白色沉淀，加熱后，轉(zhuǎn)變?yōu)楹谏牧蚧U?？捎糜诹虼捅韧最惻c巴比妥類的區(qū)別。CONCNCOSNaH2CCHH3CCHCH3H7C3+Pb2+PbSCONCNCOSH2CCHH3CCHCH3H7C32PbΔ硫元素的反應(yīng)CONCNCOSNaH2CCHH3CCHCH3H144

注射用硫噴妥鈉ChP（2005）【鑒別】

取本品約0.2g，加氫氧化鈉試液5ml與醋酸鉛試液2ml，生成白色沉淀；加熱后，沉淀變?yōu)楹谏Ｗ⑸溆昧驀娡租cChP（2005）145四、紅外光譜法

《中國藥典》收載的巴比妥類藥物，幾乎都采用紅外光譜作為鑒別方法。司可巴比妥鈉ChP（2005）【鑒別】本品的紅外光吸收圖譜與對照的圖譜（光譜集137圖）一致。四、紅外光譜法司可巴比妥鈉ChP（2005）146五、顯微結(jié)晶鑒別—特色鑒別反應(yīng)藥物本身的晶形巴比妥：長方形苯巴比妥：球形→花瓣狀反應(yīng)產(chǎn)物的晶形巴比妥＋銅吡啶試液→十字形紫色結(jié)晶苯巴比妥＋銅吡啶試液→細小不規(guī)則或似菱形淺紫色結(jié)晶五、顯微結(jié)晶鑒別—特色鑒別反應(yīng)147第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、苯巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查苯巴比妥的合成工藝：CH2CONH2CH2COOC2H5水解，酯化C2H5OH，H2SO4O=COC2H5OC2H5C=C–ONaCOOC2H5COOC2H5縮合C2H5ONa（Ⅰ）酸化，消除HCl第三節(jié)特殊雜質(zhì)檢查一、苯巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查CH2CONH148CHCOOC2H5COOC2H5CCOOC2H5COOC2H5H5C2乙基取代C2H5BrO=CNH2NH2環(huán)合CH3ONa，NNOOH5C2ONaH酸析HClNNOOH5C2OHH（Ⅱ）CHCOOC2H5COOC2H5CCOOC2H5COOC2H149苯巴比妥中的特殊雜質(zhì)主要是中間體Ⅰ和Ⅱ，以及副反應(yīng)產(chǎn)物，常通過檢查酸度、乙醇溶液的澄清度及中性或堿性物質(zhì)來加以控制。酸度檢查主要用于控制中間體Ⅱ乙基化反應(yīng)不完全時，與尿素縮合產(chǎn)生酸性比苯巴比妥強的副產(chǎn)物苯基丙二酰脲，能使甲基橙指示劑顯紅色。在一定量苯巴比妥供試品水溶液中，加入甲基橙指示劑不得顯紅色，控制酸性雜質(zhì)的量苯巴比妥中的特殊雜質(zhì)主要是中間體Ⅰ和Ⅱ，以及副反應(yīng)產(chǎn)物，150乙醇溶液的澄清度原理： 主要利用酸性雜質(zhì)在乙醇溶液中溶解度小來嚴格控制苯巴比妥中酸性雜質(zhì)的量。方法： 取供試品1.0g，加乙醇5ml加熱回流3min，溶液應(yīng)澄清。乙醇溶液的澄清度151中性或堿性雜質(zhì)的檢查

原理：

該類雜質(zhì)主要是中間體Ⅰ的副產(chǎn)物（2-苯基丁酰胺，2-苯基丁酰脲），不溶于NaOH試液但溶于乙醚；苯巴比妥具有酸性，溶于NaOH試液。方法：

取供試品1.0g，加NaOH試液10ml，加水5ml與乙醚25ml，振搖1min，分取乙醚層，經(jīng)干燥濾紙濾過，濾液置于蒸發(fā)皿中蒸干，遺留殘渣不得超過3mg。中性或堿性雜質(zhì)的檢查152二、司可巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查司可巴比妥的合成工藝：COOC2H5COOC2H5CH2COOC2H5COOC2H5CCH3CH2CH2CHCH3H縮合CH3CH2CH2CHCH3Br環(huán)合H2NCONH2，C2H5ONaNNOOONaHCH3CH2CH2CHCH3H二、司可巴比妥的特殊雜質(zhì)檢查COOC2H5COOC2H5CH153NNOOOHCH3CH2CH2CHCH3HHH+NNOOONaHCH3CH2CH2CHCH3CH2=CHCH2CH3CHBrCH2Br，NaOH丙烯化NaOH，C2H5ONa，CH3COCH3成鹽NNOOOHCH3CH2CH2CHCH3CH2=CHCH2HNNOOOHCH3CH2CH2CHCH3HHH+NNOOON154溶液的澄清度原理： 司可巴比妥極易溶于水，水溶液應(yīng)澄清，否則表明含有水不溶性雜質(zhì)。 司可巴比妥水溶液易和CO2作用析出司可巴比妥，故水應(yīng)先煮沸除去CO2。方法： 取供試品1.0g，加新沸過的冷水10ml溶解，溶液應(yīng)澄清。溶液的澄清度155中性或堿性雜質(zhì)的檢查

原理：

該類雜質(zhì)主要是合成過程中的副產(chǎn)物（酰脲、酰胺類物質(zhì)），不溶于NaOH試液但溶于乙醚；方法： 檢查方法同苯巴比妥。中性或堿性雜質(zhì)的檢查156第四節(jié)含量測定

巴比妥類藥物的含量測定方法：銀量法、溴量法、紫外分光光度法、酸堿滴定法、提取重量法、HPLC法、GC法及電泳法。一、銀量法原理：巴比妥類藥物可溶性一銀鹽AgNO3白色二銀鹽沉淀AgNO3可溶性一銀鹽（指示滴定終點）第四節(jié)含量測定 巴比妥類藥物的含量測定方法：銀量法、溴量法157注意事項：本法受溫度影響較大，在接近終點是反應(yīng)較慢，難以準確觀察滴定終點。二銀鹽具有一定的溶解度，測定結(jié)果偏高。《中國藥典》采用甲醇及3%無水碳酸鈉溶液溶劑系統(tǒng)，銀-玻璃電極系統(tǒng)電位法指示終點。無水碳酸鈉溶液需臨時新配制（久置可吸收CO2）。銀電極需用硝酸浸洗，然后用水淋洗。注意事項：158一、溴量法原理：

凡取代基中含有雙鍵的巴比妥類藥物（如司可巴比妥鈉），可與溴定量地發(fā)生加成反應(yīng)。NNOOOHCH3CH2CH2CHCH3CH2=CH2CH2H+Br2NNOOOHCH3CH2CH2CHCH3CH2CHCH2HBrBrBr2（過量）

+2KI→2KBr+I2I2+2Na2S2O3→2NaI+Na2S4O6一、溴量法NNOOOHCH3CH2CH2CHCH3CH2=C159溴滴定液（0.1mol/L）的配制：

取溴酸鉀3.0g與溴化鉀15g，加水適量使溶解成1000ml，搖勻。

KBrO3＋5KBr＋6HCl＝3Br2＋6KCl＋3H2O注意事項：操作中要防止溴和碘的逸失。平行條件進行空白試驗可減少溴和碘逸失帶來的誤差。溴滴定液（0.1mol/L）的配制：160

司可巴比妥鈉ChP（2005）取本品約0.1g，精密稱定，置250ml碘瓶中，加水10m1，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.1mol/L）25ml，再加鹽酸5m1，立即密塞并振搖1min，在暗處靜置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10m1，立即密塞，搖勻后，用Na2S2O3滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。每1ml溴滴定液（0.1mo1/L）相當于13.01mg的C12H17N2NaO3。司可巴比妥鈉ChP（2005）161含量計算（原料藥：剩余滴定法）含量計算162三、酸堿滴定法在水-乙醇混合溶劑中滴定 原理：

NNOOOHCH3CHCH2CH2CH3CH3CH2H+NaOHNNOOONaHCH3CHCH2CH2CH3CH3CH2+H2O三、酸堿滴定法NNOOOHCH3CHCH2CH2CH3CH3163注意事項：溶劑：水-乙醇滴定劑：NaOH指示劑：麝香草酚酞（終點為淡藍色）操作簡單，但終點難以判斷，需采用空白對照幫助確定終點。操作過程中易吸收CO2而使終點的淡藍色褪去，最好采用電位法指示終點。注意事項：164原料藥的直接滴定法（空白校正）

T：滴定度，每1ml滴定液相當于被測組分的毫克數(shù)V：供試品消耗滴定液的體積（ml）V0：空白消耗滴定液的體積（ml）ms：供試品的質(zhì)量F：濃度校正因子，原料藥的直接滴定法（空白校正）T：滴定度，每1ml滴定165在膠束水溶液中滴定 原理：表面活性劑能改變巴比妥類藥物的電離平衡，使藥物的Ka值增大，酸性增強，從而滴定終點明顯。滴定劑：NaOH常用表面活性劑：溴化十六烷基三甲基芐胺（CTMC）氯化四癸基二甲基芐胺（TDBA）在膠束水溶液中滴定166非水溶液滴定法 原理：巴比妥類藥物在非水溶劑中的酸性增強，從而滴定終點明顯。指示劑：麝香草酚藍或電位法指示終點滴定劑：甲醇鈉（鉀）的甲醇或乙醇溶液氫氧化四丁基胺的氯苯溶液常用溶劑：二甲基甲酰胺、甲醇、丙酮、三氯甲烷無水乙醇、苯、吡啶、甲醇-苯（15:85）非水溶液滴定法167四、紫外分光光度法

巴比妥類藥物在酸性介質(zhì)中幾乎不電離，無紫外吸收，在堿性介質(zhì)中電離為具有紫外吸收特征的結(jié)構(gòu)。直接測定的紫外分光度法 將供試品溶解后，根據(jù)其pH值，選用相應(yīng)的λmax處，直接測定對照品溶液和供試品溶液的吸光度值。

As：供試品溶液吸光度Au：對照品溶液吸光度Cs：對照品溶液濃度(mg/ml)

V：稀釋體積(ml)四、紫外分光光度法As：供試品溶液吸光度168巴比妥類藥物的紫外吸收的有關(guān)數(shù)據(jù)巴比妥類藥物的紫外吸收的有關(guān)數(shù)據(jù)169注射用硫噴妥鈉

ChP（2005）本品為硫噴妥鈉100份與無水碳酸鈉6份混合的滅菌粉末。按平均裝量計算，含硫噴妥鈉應(yīng)為標示量的93.0%～107.0%。取裝量差異項下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當于硫噴妥鈉0.25g），置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液；另取硫噴妥對照品，精密稱定，加0.4%NaOH溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液。照分光光度法，在304nm的波長處分別測定A，根據(jù)每支的平均裝量計算。每1mg硫噴妥相當于1.091mg的C11H17N2NaO2S。注射用硫噴妥鈉ChP（2005）170

注射用滅菌粉末

注射用滅菌粉末171

提取分離后的紫外分光度法 如供試品中有干擾物質(zhì)，可采用提取分離的方法除去干擾物質(zhì)后，再用紫外分光光度法測定。 可根據(jù)巴比妥類藥物具弱酸性，在三氯甲烷等有機溶劑中易溶，而其鈉鹽在水中易溶的特點進行提取分離。提取分離后的紫外分光度法172差示分光光度法（A法）測定方法：

取兩份相等的供試溶液，分別制成兩種不同的化學(xué)環(huán)境（如在其一中加酸、堿或緩沖液改變?nèi)芤旱膒H，或在其一中加能與供試品發(fā)生某種化學(xué)反應(yīng)的試劑），然后將兩者分別稀釋至同樣濃度，一份置樣品池中，另一份置參比池中，于適當波長處，測其吸收度的差值（A值）。差示分光光度法（A法）173

必要條件： 供試品在不同的化學(xué)環(huán)境中以不同的分子形式存在，它們的吸收光譜有顯著的差異。 干擾物的吸收不受測定時化學(xué)環(huán)境的影響，光譜行為不變。定量依據(jù)：

供試品在兩種不同的化學(xué)環(huán)境中分別以x、y表示，干擾物用z表示必要條件：174特點： 吸收度差值（A）僅與待測組分的濃度有關(guān)，而與干擾組分無關(guān)，即干擾組分的干擾被消除。 保留了通常的分光光度法簡易快速、直接讀數(shù)的優(yōu)點，又無需事先分離，并能消除干擾。特點：175

五、高效液相色譜法

多用于制劑及體液中的巴比妥類藥物的測定。例：血清中苯巴比妥、苯妥英和卡馬西平的測定

色譜柱：AgilentZORBAXSB-C18柱 流動相：水-甲醇-乙腈（45:45:10）

流速：1.0ml/min

柱溫度：30℃

內(nèi)標：阿普唑侖的甲醇溶液(5μg/ml)五、高效液相色譜法176

檢測波長：254nm

樣品處理： 于60℃水浴中N2吹干，加提取液(三氯甲烷:乙酸乙酯=50:50)2ml,渦旋混合5min，4000r/min離心10min，取有機相1ml置塑料離心管中，于60℃水浴中N2吹干，用流動相200μl溶解，取20μl進樣。

計算方法：

在對照品與內(nèi)