獸殘檢測(cè)課件

獸藥（VeterinaryDrugs）是指用于預(yù)防、治療、診斷動(dòng)物疾病或者有目的地調(diào)節(jié)動(dòng)物生理機(jī)能的物質(zhì)（含藥物飼料添加劑），主要包括：血清制品、疫苗、診斷制品、微生態(tài)制品、中藥材、中成藥、化學(xué)藥品、抗生素、生化藥品、放射性藥品及外用殺蟲劑、消毒劑等。獸藥殘留

(residuesofveterinarydrug)

是“獸藥在動(dòng)物源食品中的殘留”的簡(jiǎn)稱，根據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織（FAO/WHO）食品中獸藥殘留聯(lián)合立法委員會(huì)的定義，獸藥殘留[1]是指動(dòng)物產(chǎn)品的任何可食部分所含獸藥的母體化合物及（或）其代謝物，以及與獸藥有關(guān)的雜質(zhì)。所以，獸藥殘留既包括原藥，也包括藥物在動(dòng)物體內(nèi)的代謝產(chǎn)物和獸藥生產(chǎn)中所伴生的雜質(zhì)。獸藥殘留產(chǎn)生的原因非法使用違禁或淘汰藥物；不遵守休藥期規(guī)定；濫用藥物；違背有關(guān)標(biāo)簽的規(guī)定；屠宰前用藥。毒性反應(yīng)耐藥菌株產(chǎn)生“三致”作用過(guò)敏反應(yīng)腸道菌群失調(diào)環(huán)境影響影響畜牧長(zhǎng)期食用獸藥殘留超標(biāo)的食品后，當(dāng)體內(nèi)蓄積的藥物濃度達(dá)到一定量時(shí)會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生多種急慢性中毒。目前，國(guó)內(nèi)外已有多起有關(guān)人食用鹽酸克侖特羅超標(biāo)的豬肺臟而發(fā)生急性中毒事件的報(bào)道。此外，人體對(duì)氯霉素反應(yīng)比動(dòng)物更敏感，特別是嬰幼兒的藥物代謝功能尚不完善，氯霉素的超標(biāo)可引起致命的“灰嬰綜合征”反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)還會(huì)造成人的再生障礙性貧血。四環(huán)素類藥物能夠與骨骼中的鈣結(jié)合，抑制骨骼和牙齒的發(fā)育。紅霉素等大環(huán)內(nèi)酯類可致急性肝毒性。氨基糖苷類的慶大霉素和卡那霉素能損害前庭和耳蝸神經(jīng)，導(dǎo)致眩暈和聽力減退?；前奉愃幬锬軌蚱茐娜梭w造血機(jī)能等

動(dòng)物機(jī)體長(zhǎng)期反復(fù)接觸某種抗菌藥物后，其體內(nèi)敏感菌株受到選擇性的抑制，從而使耐藥菌株大量繁殖；此外，抗藥性R質(zhì)粒在菌株間橫向轉(zhuǎn)移使很多細(xì)菌由單重耐藥發(fā)展到多重耐藥。耐藥性細(xì)菌的產(chǎn)生使得一些常用藥物的療效下降甚至失去療效，如青霉素、氯霉素、慶大霉素、磺胺類等藥物在畜禽中已大量產(chǎn)生抗藥性，臨床效果越來(lái)越差許多抗菌藥物如青霉素、四環(huán)素類、磺胺類和氨基糖苷類等能使部分人群發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)甚至休克，并在短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)血壓下降、皮疹、喉頭水腫、呼吸困難等嚴(yán)重癥狀。青霉素類藥物具有很強(qiáng)的致敏作用，輕者表現(xiàn)為接觸性皮炎和皮膚反應(yīng)，重者表現(xiàn)為致死的過(guò)敏性休克。四環(huán)素藥物可引起過(guò)敏和蕁麻疹?；前奉悇t表現(xiàn)為皮炎、白細(xì)胞減少、溶血性貧血和藥熱。喹諾酮類藥物也可引起變態(tài)反應(yīng)和光敏反應(yīng)

動(dòng)物用藥后，一些性質(zhì)穩(wěn)定的藥物隨糞便、尿被排泄到環(huán)境中后仍能穩(wěn)定存在，從而造成環(huán)境中的藥物殘留。高銅、高鋅等添加劑的應(yīng)用，有機(jī)砷的大量使用，可造成土壤、水源的污染。楊居榮等研究發(fā)現(xiàn)，砷對(duì)土壤固氮細(xì)菌、解磷細(xì)菌、纖維分解菌、真菌和放線菌均有抑制作用。WollenbergerL等發(fā)現(xiàn)喹乙醇對(duì)甲殼細(xì)水蚤的急性毒性最強(qiáng)，對(duì)水環(huán)境有潛在的不良作用。StrongL等報(bào)道了阿維菌素、伊維菌素和美倍霉素在動(dòng)物糞便中能保持8周左右的活性，對(duì)草原中的多種昆蟲都有強(qiáng)大的抑制或殺滅作用。另外，已烯雌酚、氯羥吡啶在環(huán)境中降解很慢，能在食物鏈中高度富集而造成殘留超標(biāo)

動(dòng)物源食品中卡巴氧標(biāo)示殘留物檢測(cè)方法--------------高效液相色譜法動(dòng)物源食品中硝基咪唑類藥物殘留檢測(cè)方法------------高效液相色譜法

動(dòng)物源食品中磺胺二甲嘧啶殘留檢測(cè)方法--------------高效液相色譜法動(dòng)物源食品中拉沙洛西鈉殘留檢測(cè)方法----------------高效液相色譜法動(dòng)物源食品中恩諾沙星和環(huán)丙沙星殘留檢測(cè)方法--------高效液相色譜法動(dòng)物源食品中噁喹酸和氟甲喹殘留檢測(cè)方法（雞）------高效液相色譜法7、動(dòng)物源食品中噁喹酸和氟甲喹殘留檢測(cè)方法（魚）------高效液相色譜法8、動(dòng)物源食品中苯唑西林殘留檢測(cè)方法（雞）------------高效液相色譜法9、動(dòng)物源食品中青霉素素抗生素殘留檢測(cè)方法（雞）------高效液相色譜法10、動(dòng)物源食品中苯唑西林殘留檢測(cè)方法（牛奶）---------高效液相色譜法11、動(dòng)物源食品中氯霉素殘留檢測(cè)方法（牛奶）-----------高效液相色譜法12、動(dòng)物源食品中青霉素抗生素殘留檢測(cè)方法（牛奶）-----------微生物法動(dòng)物性食品中獸藥殘留檢測(cè)方法（農(nóng)牧發(fā)[2003]236號(hào)）

根據(jù)《獸藥管理?xiàng)l例》規(guī)定制定的12種動(dòng)物性食品中獸藥殘留檢測(cè)方法中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

NY/T753-2012綠色食品禽肉中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

NY/T843-2009綠色食品肉及肉制品中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY5034-2005無(wú)公害食品禽肉及禽副產(chǎn)品獸藥殘留的分析方法獸藥殘留的檢驗(yàn)分析方法包括篩選、檢測(cè)和確認(rèn)。

篩選方法微生物檢驗(yàn)（微生物抑制試驗(yàn)）免疫法（免疫檢測(cè)試劑盒）

檢測(cè)和確認(rèn)方法：理化檢驗(yàn)技術(shù)【氣相色譜法（GC）、高效液相色譜（HPLC

）

、薄層色譜（TLC）

、氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定法（GC-MS）、高效液相色譜-質(zhì)譜測(cè)定法等（HPLC-MS）】。畜禽肉中十六種磺胺類藥物殘留量的測(cè)定液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法檢出限：磺胺甲噻二唑?yàn)?.5μg/kg，磺胺醋酰、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺二甲異噁唑

、磺胺甲基嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺-6-甲氧嘧啶、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺甲基異晤唑?yàn)?.Oμg/kg，磺胺噻唑，磺胺甲氧噠嗪、磺胺間二甲氧嘧啶為10.0μg/kg，磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶為20.0μg/kg，磺胺苯吡唑?yàn)?0.0μg/kg

畜禽肉中磺胺類藥物殘留用乙腈提取，離心后，上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮近干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解，并用正己烷脫脂后，樣品溶液供液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。

液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源。勻質(zhì)器。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器液體混勻器離心機(jī)。分析天平：感量0.1mg，0.01g。移液器：1mL，2mL。雞心瓶：100mL。樣品瓶：2mL，帶聚四氟乙烯旋蓋。

液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀液體混勻器雞心瓶稱取5g試樣，精確至0.01g，置于50mL離心管中，加入20g無(wú)水硫酸鈉和20mL乙腈，均質(zhì)2min，以3000r/min離心3min。上清液倒入100mL雞心瓶中，殘?jiān)偌尤?0mL乙腈，重復(fù)上述操作一次。合并提取液，向雞心瓶中加入10mL異丙醇，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器于50℃水浴蒸干，準(zhǔn)確加入1mL流動(dòng)相和1ml正己烷溶解殘?jiān)?。轉(zhuǎn)移至5mL離心管中，渦旋1min，以3000r，／min離心3min，吸取上層正己烷棄去，再加入1mL正己烷，重復(fù)上述步驟，直至下層水相變成透明液體。按上述操作步驟制備樣品空白提取液。取下層清液，過(guò)0.2um濾膜后，用液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。色譜測(cè)定液相色譜條件質(zhì)譜條件a)色譜柱：Lichrospher100RP-18，5μm，250mm×4.6mm（內(nèi)徑）或相當(dāng)者；

b)流動(dòng)相：乙腈+0.01mol/L乙酸銨溶液(12+88)；c)流速：0.8ml/min；d)柱溫：35℃；e)進(jìn)樣量：40μL；f)分流比：1：3。

液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定用混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別進(jìn)樣，以工作溶液濃度(ng/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量，樣品溶液中十六種磺胺的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器測(cè)定的線性范圍內(nèi)。在上述色譜條件和質(zhì)譜條件下，十六種磺胺的參考保留時(shí)間見(jiàn)表2。十六種磺胺混合標(biāo)準(zhǔn)總離子流圖參見(jiàn)圖A.1和圖A.2。

平行試驗(yàn)

按以上步驟，對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定?？瞻自囼?yàn)

除不稱取樣品外，均按上述步驟進(jìn)行。

精密度

本標(biāo)準(zhǔn)的精密度數(shù)據(jù)是按照GB/T6379.1和GB／T6379.2的規(guī)定確定的，其重復(fù)性和再現(xiàn)性的值以95%的可信度來(lái)計(jì)算。重復(fù)性

在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不超過(guò)重復(fù)性限r(nóng)，畜禽肉中十六種磺胺含量范圍及重復(fù)性方程見(jiàn)表3。再現(xiàn)性

在再現(xiàn)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不超過(guò)再現(xiàn)性限R，畜禽肉中十六種磺胺的含量范圍及再現(xiàn)性方程見(jiàn)表3

參考文獻(xiàn)中華人民共和國(guó)