流式細(xì)胞儀BD-FACSCanto-II課件

流式細(xì)胞儀背景知識(shí)

1PPT課件流式細(xì)胞儀背景知識(shí)

1PPT課件總覽流式細(xì)胞術(shù)基本知識(shí)流式細(xì)胞儀的組成數(shù)據(jù)采集與分析2PPT課件總覽流式細(xì)胞術(shù)基本知識(shí)2PPT課件流式細(xì)胞技術(shù)是什么？流式細(xì)胞術(shù)在流動(dòng)的狀態(tài)中檢測(cè)細(xì)胞或顆粒的各項(xiàng)特性特異性強(qiáng)，靈敏度高，速度快，并能實(shí)現(xiàn)多參數(shù)分析可檢測(cè)的樣本種類(lèi)多樣：外周血，骨髓，細(xì)胞穿刺液，洗脫液，實(shí)體組織，培養(yǎng)細(xì)胞，微生物FlowCytometryFlow:FluidCyto:CellMetry:Measurement3PPT課件流式細(xì)胞技術(shù)是什么？流式細(xì)胞術(shù)FlowCytometry3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣本0.4um40um4PPT課件流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣本0.4um40um4PPT課件流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)指標(biāo)

流式細(xì)胞術(shù)提供的信息：

-相對(duì)細(xì)胞大小

-相對(duì)細(xì)胞顆粒密度和內(nèi)部復(fù)雜度

-染色過(guò)細(xì)胞的相對(duì)熒光強(qiáng)度5PPT課件流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)指標(biāo)

5PPT課件細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞粒度DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量染色體分析細(xì)胞功能細(xì)胞表面/胞漿/核的特異性抗原細(xì)胞活性細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子酶活性激素結(jié)合位點(diǎn)細(xì)胞受體細(xì)胞凋亡在上述信號(hào)基礎(chǔ)上的細(xì)胞分選流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用6PPT課件細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞功能在上述信號(hào)基礎(chǔ)上的細(xì)胞分選流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用6流式細(xì)胞儀組成液流系統(tǒng)：形成層流系統(tǒng)，聚焦細(xì)胞光學(xué)系統(tǒng)：產(chǎn)生和收集光學(xué)信號(hào)電子系統(tǒng)：光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，進(jìn)行信號(hào)處理7PPT課件流式細(xì)胞儀組成7PPT課件FluidicsDiagramSheathFlowsheathtankSampleFlowsheathinteriorreservoirwasteinteriorreservoirsheathfiltersampleinjectiontube(SIT)testtubeorplateflowcellinterrogationpointbubblefilterwastetank8PPT課件FluidicsDiagramSheathFlowshe液流系統(tǒng)9PPT課件液流系統(tǒng)9PPT課件光學(xué)系統(tǒng)

激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)包括:-激光器-透鏡和反射鏡，將激光引導(dǎo)到檢測(cè)區(qū)域收集光學(xué)系統(tǒng)包括:濾光片，將產(chǎn)生的光信號(hào)引導(dǎo)到對(duì)應(yīng)的光學(xué)接收器10PPT課件光學(xué)系統(tǒng)

激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)包括:10PPT課件11PPT課件11PPT課件12PPT課件12PPT課件光學(xué)系統(tǒng)13PPT課件光學(xué)系統(tǒng)13PPT課件14PPT課件14PPT課件光學(xué)系統(tǒng)-濾光片460500540460500540460500540SP500LP500BP500/50

Longpass Shortpass Bandpass15PPT課件光學(xué)系統(tǒng)-濾光片46050054046016PPT課件16PPT課件17PPT課件17PPT課件電子系統(tǒng)LaserLaserLaserTimeVoltageTimeVoltageTimeVoltage18PPT課件電子系統(tǒng)LaserLaserLaserTimeVoltage電子系統(tǒng)19PPT課件電子系統(tǒng)19PPT課件電子系統(tǒng)20PPT課件電子系統(tǒng)20PPT課件Review懸浮狀態(tài)的細(xì)胞單個(gè)流過(guò)流動(dòng)室細(xì)胞被激發(fā)產(chǎn)生散射光和熒光信號(hào)信號(hào)被采集轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)存儲(chǔ)于電腦上液流系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)電子系統(tǒng)21PPT課件Review懸浮狀態(tài)的細(xì)胞液流系統(tǒng)電子系統(tǒng)21PPT課件回顧流式細(xì)胞儀的三大組成部分？濾光片LP600代表什么意思？BP400/40呢？22PPT課件回顧流式細(xì)胞儀的三大組成部分？22PPT課件數(shù)據(jù)采集

三種數(shù)據(jù)：

-前向散射光FSC

-側(cè)向散射光SSC

-各種熒光散射光FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3，F(xiàn)L423PPT課件數(shù)據(jù)采集

23PPT課件當(dāng)使用激光光源時(shí)，在前向方向（和激光行進(jìn)的方向相同）上可用前向散射光接收通道接收到一定量的散射光前向散射光的強(qiáng)度是和細(xì)胞或其他檢測(cè)顆粒的大小、形狀密切相關(guān)的數(shù)據(jù)采集-前向散射光24PPT課件當(dāng)使用激光光源時(shí)，在前向方向（和激光行進(jìn)的方向相同）上可用前當(dāng)激光光源被使用時(shí)，側(cè)向也有一定量的散射光產(chǎn)生，可以用90o

角的側(cè)向散射光檢測(cè)通道來(lái)采集側(cè)向散射光的強(qiáng)度和細(xì)胞或其他檢測(cè)顆粒的顆粒密度、內(nèi)部復(fù)雜程度密切相關(guān)數(shù)據(jù)采集-側(cè)向散射光25PPT課件當(dāng)激光光源被使用時(shí)，側(cè)向也有一定量的散射光產(chǎn)生，數(shù)據(jù)采集-側(cè)外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖

顆粒雜質(zhì)、氣泡對(duì)檢測(cè)的影響26PPT課件外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖

顆粒雜質(zhì)、氣泡26P細(xì)胞標(biāo)記上熒光物質(zhì)后，這種熒光物質(zhì)要求特定波長(zhǎng)的激發(fā)光來(lái)激發(fā)，同時(shí)發(fā)出特定波長(zhǎng)的光熒光物質(zhì)被激發(fā)以后產(chǎn)生的發(fā)射光將由特定的熒光通道來(lái)接收特定檢測(cè)是通過(guò)光學(xué)濾片和透鏡來(lái)控制的數(shù)據(jù)采集-熒光信號(hào)熒光強(qiáng)度是和細(xì)胞上標(biāo)記上的熒光染料的量正相關(guān)27PPT課件數(shù)據(jù)采集-熒光信號(hào)熒光強(qiáng)度是和細(xì)胞上標(biāo)記上的熒光染料的量正相數(shù)據(jù)采集28PPT課件數(shù)據(jù)采集28PPT課件電壓

信號(hào)放大方式：log、lin信號(hào)類(lèi)型：A,W,H電壓的調(diào)節(jié):根據(jù)陰性對(duì)照管來(lái)調(diào)節(jié)29PPT課件電壓

信號(hào)放大方式：log、lin29PPT課件閾值可以以任意參數(shù)及多個(gè)參數(shù)的組合作為閾值大多數(shù)樣本都可以設(shè)定FSC/SSC閾值以下的信號(hào)不存儲(chǔ)根據(jù)陰性對(duì)照管來(lái)調(diào)節(jié)目的是將不需要的雜質(zhì)信號(hào)，噪音信號(hào)，無(wú)用的細(xì)胞信號(hào)等扣除，使收集到的都是有用信號(hào)30PPT課件閾值可以以任意參數(shù)及多個(gè)參數(shù)的組合作為閾值30PPT課件31PPT課件31PPT課件32PPT課件32PPT課件補(bǔ)償

補(bǔ)償方式：任意兩個(gè)通道之間，可以采用手動(dòng)或自動(dòng)補(bǔ)償。補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié):根據(jù)單染對(duì)照管來(lái)調(diào)節(jié)33PPT課件補(bǔ)償

補(bǔ)償方式：任意兩個(gè)通道之間，可以采用手動(dòng)或自動(dòng)補(bǔ)償。334PPT課件34PPT課件35PPT課件35PPT課件36PPT課件36PPT課件37PPT課件37PPT課件38PPT課件38PPT課件1.)Compensation-TooLittle;TooMuch39PPT課件1.)Compensation-TooLittle;2.)

BasicPrinciplesofCompensation-%Compensationisindependentoffluorescenceintensity40PPT課件2.)BasicPrinciplesofCompen3.)Compensation-

TooDim,TooBrightCompensationControlsSmallerrorsincompensationofadimcontrol(A)canresultinlargecompensationerrorswithbrightreagents(B&C).41PPT課件3.)Compensation-

數(shù)據(jù)分析流式數(shù)據(jù)直方圖散點(diǎn)圖等高線圖密度圖三維圖統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)42PPT課件數(shù)據(jù)分析42PPT課件直方圖直方圖(DistributionHistogram)橫坐標(biāo)代表熒光信號(hào)或散射光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度，單位是對(duì)數(shù)，可以是線性或?qū)?shù)坐標(biāo)?？v坐標(biāo)一般是細(xì)胞數(shù)。43PPT課件直方圖直方圖(DistributionHistogram)散點(diǎn)圖散點(diǎn)圖(DotPlot)X坐標(biāo)為該細(xì)胞一參數(shù)相對(duì)含量，Y坐標(biāo)為該細(xì)胞另一參數(shù)的含量，可以將細(xì)胞亞群分開(kāi)。44PPT課件散點(diǎn)圖散點(diǎn)圖(DotPlot)44PPT課件等高線圖和密度圖45PPT課件等高線圖和密度圖45PPT課件三維圖46PPT課件三維圖46PPT課件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)Events百分比平均熒光強(qiáng)度熒光中位值CVSD……47PPT課件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)Events47PPT課件數(shù)據(jù)獲取與分析電壓閾值補(bǔ)償獲得數(shù)據(jù)畫(huà)圖設(shè)門(mén)統(tǒng)計(jì)48PPT課件數(shù)據(jù)獲取與分析電壓獲得數(shù)據(jù)畫(huà)圖48PPT課件Thanks!49PPT課件Thanks!49PPT課件流式細(xì)胞儀背景知識(shí)

50PPT課件流式細(xì)胞儀背景知識(shí)

1PPT課件總覽流式細(xì)胞術(shù)基本知識(shí)流式細(xì)胞儀的組成數(shù)據(jù)采集與分析51PPT課件總覽流式細(xì)胞術(shù)基本知識(shí)2PPT課件流式細(xì)胞技術(shù)是什么？流式細(xì)胞術(shù)在流動(dòng)的狀態(tài)中檢測(cè)細(xì)胞或顆粒的各項(xiàng)特性特異性強(qiáng)，靈敏度高，速度快，并能實(shí)現(xiàn)多參數(shù)分析可檢測(cè)的樣本種類(lèi)多樣：外周血，骨髓，細(xì)胞穿刺液，洗脫液，實(shí)體組織，培養(yǎng)細(xì)胞，微生物FlowCytometryFlow:FluidCyto:CellMetry:Measurement52PPT課件流式細(xì)胞技術(shù)是什么？流式細(xì)胞術(shù)FlowCytometry3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣本0.4um40um53PPT課件流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)樣本0.4um40um4PPT課件流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)指標(biāo)

流式細(xì)胞術(shù)提供的信息：

-相對(duì)細(xì)胞大小

-相對(duì)細(xì)胞顆粒密度和內(nèi)部復(fù)雜度

-染色過(guò)細(xì)胞的相對(duì)熒光強(qiáng)度54PPT課件流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)指標(biāo)

5PPT課件細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞粒度DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量蛋白質(zhì)含量染色體分析細(xì)胞功能細(xì)胞表面/胞漿/核的特異性抗原細(xì)胞活性細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子酶活性激素結(jié)合位點(diǎn)細(xì)胞受體細(xì)胞凋亡在上述信號(hào)基礎(chǔ)上的細(xì)胞分選流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用55PPT課件細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞功能在上述信號(hào)基礎(chǔ)上的細(xì)胞分選流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用6流式細(xì)胞儀組成液流系統(tǒng)：形成層流系統(tǒng)，聚焦細(xì)胞光學(xué)系統(tǒng)：產(chǎn)生和收集光學(xué)信號(hào)電子系統(tǒng)：光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，進(jìn)行信號(hào)處理56PPT課件流式細(xì)胞儀組成7PPT課件FluidicsDiagramSheathFlowsheathtankSampleFlowsheathinteriorreservoirwasteinteriorreservoirsheathfiltersampleinjectiontube(SIT)testtubeorplateflowcellinterrogationpointbubblefilterwastetank57PPT課件FluidicsDiagramSheathFlowshe液流系統(tǒng)58PPT課件液流系統(tǒng)9PPT課件光學(xué)系統(tǒng)

激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)包括:-激光器-透鏡和反射鏡，將激光引導(dǎo)到檢測(cè)區(qū)域收集光學(xué)系統(tǒng)包括:濾光片，將產(chǎn)生的光信號(hào)引導(dǎo)到對(duì)應(yīng)的光學(xué)接收器59PPT課件光學(xué)系統(tǒng)

激發(fā)光學(xué)系統(tǒng)包括:10PPT課件60PPT課件11PPT課件61PPT課件12PPT課件光學(xué)系統(tǒng)62PPT課件光學(xué)系統(tǒng)13PPT課件63PPT課件14PPT課件光學(xué)系統(tǒng)-濾光片460500540460500540460500540SP500LP500BP500/50

Longpass Shortpass Bandpass64PPT課件光學(xué)系統(tǒng)-濾光片46050054046065PPT課件16PPT課件66PPT課件17PPT課件電子系統(tǒng)LaserLaserLaserTimeVoltageTimeVoltageTimeVoltage67PPT課件電子系統(tǒng)LaserLaserLaserTimeVoltage電子系統(tǒng)68PPT課件電子系統(tǒng)19PPT課件電子系統(tǒng)69PPT課件電子系統(tǒng)20PPT課件Review懸浮狀態(tài)的細(xì)胞單個(gè)流過(guò)流動(dòng)室細(xì)胞被激發(fā)產(chǎn)生散射光和熒光信號(hào)信號(hào)被采集轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號(hào)存儲(chǔ)于電腦上液流系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)電子系統(tǒng)70PPT課件Review懸浮狀態(tài)的細(xì)胞液流系統(tǒng)電子系統(tǒng)21PPT課件回顧流式細(xì)胞儀的三大組成部分？濾光片LP600代表什么意思？BP400/40呢？71PPT課件回顧流式細(xì)胞儀的三大組成部分？22PPT課件數(shù)據(jù)采集

三種數(shù)據(jù)：

-前向散射光FSC

-側(cè)向散射光SSC

-各種熒光散射光FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3，F(xiàn)L472PPT課件數(shù)據(jù)采集

23PPT課件當(dāng)使用激光光源時(shí)，在前向方向（和激光行進(jìn)的方向相同）上可用前向散射光接收通道接收到一定量的散射光前向散射光的強(qiáng)度是和細(xì)胞或其他檢測(cè)顆粒的大小、形狀密切相關(guān)的數(shù)據(jù)采集-前向散射光73PPT課件當(dāng)使用激光光源時(shí)，在前向方向（和激光行進(jìn)的方向相同）上可用前當(dāng)激光光源被使用時(shí)，側(cè)向也有一定量的散射光產(chǎn)生，可以用90o

角的側(cè)向散射光檢測(cè)通道來(lái)采集側(cè)向散射光的強(qiáng)度和細(xì)胞或其他檢測(cè)顆粒的顆粒密度、內(nèi)部復(fù)雜程度密切相關(guān)數(shù)據(jù)采集-側(cè)向散射光74PPT課件當(dāng)激光光源被使用時(shí)，側(cè)向也有一定量的散射光產(chǎn)生，數(shù)據(jù)采集-側(cè)外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖

顆粒雜質(zhì)、氣泡對(duì)檢測(cè)的影響75PPT課件外周全血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖

顆粒雜質(zhì)、氣泡26P細(xì)胞標(biāo)記上熒光物質(zhì)后，這種熒光物質(zhì)要求特定波長(zhǎng)的激發(fā)光來(lái)激發(fā)，同時(shí)發(fā)出特定波長(zhǎng)的光熒光物質(zhì)被激發(fā)以后產(chǎn)生的發(fā)射光將由特定的熒光通道來(lái)接收特定檢測(cè)是通過(guò)光學(xué)濾片和透鏡來(lái)控制的數(shù)據(jù)采集-熒光信號(hào)熒光強(qiáng)度是和細(xì)胞上標(biāo)記上的熒光染料的量正相關(guān)76PPT課件數(shù)據(jù)采集-熒光信號(hào)熒光強(qiáng)度是和細(xì)胞上標(biāo)記上的熒光染料的量正相數(shù)據(jù)采集77PPT課件數(shù)據(jù)采集28PPT課件電壓

信號(hào)放大方式：log、lin信號(hào)類(lèi)型：A,W,H電壓的調(diào)節(jié):根據(jù)陰性對(duì)照管來(lái)調(diào)節(jié)78PPT課件電壓

信號(hào)放大方式：log、lin29PPT課件閾值可以以任意參數(shù)及多個(gè)參數(shù)的組合作為閾值大多數(shù)樣本都可以設(shè)定FSC/SSC閾值以下的信號(hào)不存儲(chǔ)根據(jù)陰性對(duì)照管來(lái)調(diào)節(jié)目的是將不需要的雜質(zhì)信號(hào)，噪音信號(hào)，無(wú)用的細(xì)胞信號(hào)等扣除，使收集到的都是有用信號(hào)79PPT課件閾值可以以任意參數(shù)及多個(gè)參數(shù)的組合作為閾值30PPT課件80PPT課件31PPT課件81PPT課件32PPT課件補(bǔ)償

補(bǔ)償方式：任意兩個(gè)通道之間，可以采用手動(dòng)或自動(dòng)補(bǔ)償。補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié):根據(jù)單染對(duì)照管來(lái)調(diào)節(jié)82PPT課件補(bǔ)償

補(bǔ)償方式：任意兩個(gè)通道之間，可以采用手動(dòng)或自動(dòng)補(bǔ)償。383PPT課件34PPT課件84PPT課件35PPT課件85PPT課件36PPT課件86PPT課件37PPT課件87PPT課件38PPT課件1.)Compensation-TooLittle;TooMuch88PPT課件1.)Compensation-TooLittle;2.)

BasicPrinciplesofCompensation-%Compensationisindependentoffluorescenceintensity89PPT課件2.)BasicPrinciplesofC