2023江蘇版生物高考第二輪復(fù)習(xí)-專題27　基因工程與蛋白質(zhì)工程

2023江蘇版生物高考第二輪復(fù)習(xí)專題27基因工程與蛋白質(zhì)工程

高頻考點(diǎn)考點(diǎn)1基因工程的工具與操作程序該考點(diǎn)中基礎(chǔ)部分訓(xùn)練內(nèi)容為限制酶、DNA連接酶、運(yùn)載體、PCR技術(shù)等.重難、綜合部分為結(jié)合具體情境.考查對基因工程工具的理解和應(yīng)用，目的基因的獲取涉及的PCR相關(guān)問題的分析、基因表達(dá)載體的構(gòu)建問題的分析等.基?出5；-GAATT（：-3；（2021湖北,7,2分）限制性內(nèi)切酶EcoRI識(shí)別并切割,-CTTAAf-5雙鏈口附,用EcoRj完全酶切果蠅基因組DNA,理論上得到DNA片段的平均長度（堿基對）約為（）A.6 B.250C.4000 D.24000答案C（2022鹽城阜寧中學(xué)三檢,15）熱啟動(dòng)PCR可提高擴(kuò)增效率,其基本方法是進(jìn)行反應(yīng)之前將Taq酶、dNTP和引物等先不要加入樣品管內(nèi),而是將樣品加熱，待溫度升到70C以上時(shí),再停上述試劑加入,開始PCR擴(kuò)增,下列敘述正確的有（多選）（）A.Taq酶最適催化溫度范圍為50'60'CB.與常規(guī)PCR相比,熱啟動(dòng)PCR可減少反應(yīng)起始時(shí)引物錯(cuò)配形成的產(chǎn)物C.兩條子鏈合成一定都是從5'端向3'端延伸D.PCR產(chǎn)物DNA堿基序列的特異性體現(xiàn)了Taq酶的特異性答案BC（2022南通質(zhì)檢一,17）圖1表示大腸桿菌PBR322質(zhì)粒，圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。下列敘述正確的是（多四環(huán)素抗性基因BamYl<BelI選四環(huán)素抗性基因BamYl<BelIBam\lIHindHI啟動(dòng)子氨芳青霉素

抗性基因

BamHI HirjdHlL .]llclI/目的基因圖2A.圖1質(zhì)粒中含有多個(gè)限制酶的酶切位點(diǎn),不含游離的磷酸基團(tuán)B.構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)若選用BamH1會(huì)破壞兩個(gè)標(biāo)記基因,不便于后續(xù)的篩選C.構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)同時(shí)用BelI和HindIII,利于防止目的基因反向連接D.將重組質(zhì)粒直接轉(zhuǎn)入處于感受態(tài)的酵母菌細(xì)胞，可實(shí)現(xiàn)其快速擴(kuò)增答案ABC重難（2021江蘇,13,2分）如圖是剔除轉(zhuǎn)基因植物中標(biāo)記基因的一種策略,下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）目的 無篩選標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植株肺基因農(nóng)桿菌1 雜交分離只皿’農(nóng)桿菌2 Vjjj|\S.WGGOI農(nóng)桿菌2 Vjjj|\S.WGO-*標(biāo)記基因SMGO~?A.分別帶有目的基因和標(biāo)記基因的兩個(gè)質(zhì)粒,都帶有T-DNA序列B.該方法建立在高轉(zhuǎn)化頻率基礎(chǔ)上,標(biāo)記基因和目的基因須轉(zhuǎn)到不同染色體上C.若要獲得剔除標(biāo)記基因的植株,轉(zhuǎn)化植株必須經(jīng)過有性繁殖階段遺傳重組D.獲得的無篩選標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植株發(fā)生了染色體結(jié)構(gòu)變異答案D（2021湖北,16,2分）某實(shí)驗(yàn)利用PCR技術(shù)獲取目的基因,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示除目的基因條帶（引物與模板完全配對）外,還有2條非特異條帶（引物和模板不完全配對）.為了減少反應(yīng)中非特異條帶的產(chǎn)生,以下措施中有效的是（）A.增加模板DMA的量 B.延長熱變性的時(shí)間C.延長延伸的時(shí)間 D.提高復(fù)性的溫度答案D（2021浙江6月選考.20,2分）采用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)可將增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）基因定點(diǎn)插入受精卵的Y染色體上，獲得轉(zhuǎn)基因雄性小鼠.該轉(zhuǎn)基因小鼠與野生型雌性小鼠交配,通過觀察熒光可確定早期胚胎的性別.下列操作錯(cuò)誤的是（）A.基因編輯處理的受精卵在體外培養(yǎng)時(shí)，不同發(fā)育階段的胚胎需用不同成分的培養(yǎng)液B.基因編輯處理的受精卵經(jīng)體外培養(yǎng)至2細(xì)胞期，須將其植入同期發(fā)情小鼠的子宮,才可獲得表達(dá)EGFP的小鼠C.分離能表達(dá)EGFP的胚胎干細(xì)胞,通過核移植等技術(shù)可獲得大量的轉(zhuǎn)基因小鼠D.通過觀察早期胚胎的熒光,能表達(dá)EGFP的即為雄性小鼠胚胎答案B萬口（2022全國乙,38,15分）新冠疫情出現(xiàn)后，病毒核酸檢測和疫苗接種在疫情防控中發(fā)揮了重要作用.回答下列問題。⑴新冠病毒是一種RNA病毒,檢測新冠病毒RNA（核酸檢測）可以采取RT-PCR法。這種方法的基本原理是先以病毒RNA為模板合成cDNA,這一過程需要的酶是,再通過PCR技術(shù)擴(kuò)增相應(yīng)的DNA片段.根據(jù)檢測結(jié)果判斷被檢測者是否感染新冠病毒。（2）為了確保新冠病毒核酸檢測的準(zhǔn)確性,在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)必須依據(jù)新冠病毒RNA中的來進(jìn)行.PCR過程每次循環(huán)分為3步,其中溫度最低的一步是.（3）某人同時(shí)進(jìn)行了新冠病毒核酸檢測和抗體檢測（檢測體內(nèi)是否有新冠病毒抗體），若核酸檢測結(jié)果為陰性而抗體檢測結(jié)果為陽性,說明（答出1種情況即可）；若核酸檢測和抗體檢測結(jié)果均為陽性,說明.（4）常見的病毒疫苗有滅活疫苗、蛋白疫苗和重組疫苗等.已知某種病毒的特異性蛋白S（具有抗原性）的編碼序列（目的基因）.為了制備蛋白疫苗，可以通過基因工程技術(shù)獲得大量蛋白S.基因工程的基本操作流程是.答案 （1）逆轉(zhuǎn)錄酶（2）特定核甘酸序列復(fù)性（3）曾經(jīng)感染過新冠病毒但已康復(fù)已感染新冠病毒，還未康復(fù)（或?yàn)榛颊撸?）蛋白S基因的獲取一構(gòu)建蛋白S基因表達(dá)載體一導(dǎo)入受體細(xì)胞（微生物）一蛋白S基因的檢測與鑒定（檢測受體能否產(chǎn)生蛋白S）（2022廣東,22,12分）“綠水逶迤去，青山相向開”，大力發(fā)展低碳經(jīng)濟(jì)已成為全社會(huì)的共識(shí).基于某些梭菌的特殊代謝能力,有研究者以某些工業(yè)廢氣（含CO等一碳溫室氣體，多來自高污染排放企業(yè)）為原料,通過厭氧發(fā)酵生產(chǎn)丙酮,構(gòu)建一種生產(chǎn)高附加值化工產(chǎn)品的新技術(shù).

； 輔酶A 乙酰乙酸、；硫解酶轉(zhuǎn)移酶脫竣酶學(xué)：2x乙ThlA乙酰乙QfAB乙酰Adc丙［：酰CoA 酰CoA 乙酸酮一屆誨血而一回答下列問題：⑴研究者針對每個(gè)需要擴(kuò)增的酶基因（如圖）設(shè)計(jì)一對,利用PCR技術(shù)在優(yōu)化反應(yīng)條件后擴(kuò)增得到目標(biāo)酶基因。（2）研究者構(gòu)建了一種表達(dá)載體pMTL80k,用于在梭菌中建立多基因組合表達(dá)庫，經(jīng)篩選后提高丙酮的合成量。該載體包括了啟動(dòng)子、終止子及抗生素抗性基因等,其中抗生素抗性基因的作用是，終止子的作用是.（3）培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)重組梭菌大量表達(dá)上述酶蛋白時(shí)，出現(xiàn)了生長遲緩的現(xiàn)象,推測其原因可能是，此外丙酮的積累會(huì)傷害細(xì)胞,需要進(jìn)一步優(yōu)化菌株和工藝才能擴(kuò)大應(yīng)用規(guī)模。（4）這種生產(chǎn)高附加值化工產(chǎn)品的新技術(shù),實(shí)現(xiàn)了，體現(xiàn)了循環(huán)經(jīng)濟(jì)特點(diǎn).從“碳中和”的角度看，該技術(shù)的優(yōu)勢在于,具有廣泛的應(yīng)用前景和良好的社會(huì)效益.答案（1）引物（2）便于篩選含有目的基因的受體細(xì)胞使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停下來（3）酶蛋白的大量合成消耗了大量物質(zhì)和能量（4）廢棄物的資源化減少了碳排放（2020江蘇,33,8分）如果已知一小段DNA的序列,可采用PCR的方法,簡捷地分析出已知序列兩側(cè)的序列,具體流程如圖（以EcoR1酶切為例）:染色體DNAI酶切|竺R忸缺明混合的DNA片段51 .. ..一 ,3,.、未知序列「已知序列I未知序列］片段F環(huán)狀DNAPCR弓物EctAXRI擴(kuò)增|7麗DNA聚合前—=—環(huán)狀DNAPCR弓物EctAXRI擴(kuò)增|7麗DNA聚合前—=—=PCR產(chǎn)物5'.?3'片段F的完整序列請據(jù)圖回答問題:（1）步驟I用的EcoRI是一種酶，它通過識(shí)別特定的切割特定位點(diǎn).（2）步驟II用的DNA連接酶催化相鄰核甘酸之間的-羥基與5'-磷酸間形成:PCR循環(huán)中,升溫到95℃是為了獲得；TaqDNA聚合酶的作用是催化.（3）若如表所列為已知的DNA序列和設(shè)計(jì)的一些PCR引物,步驟III選用的PCR引物必須是（從引物①②③④中選擇,填編號(hào)）.DNA序列（虛線處省略了部分核音酸序列）已知5'-AACTATGCGCTCATGA GCAATGCGTAGCCTCT-3'IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII

3'-TIGATACGCGACTACT CGTIACGCATC.GGAGA-S'闞①5'-AACTATGCGCTCATGA-3'PCR ②5'-GCAATGCGTAGCCTCT-3'引物 ③5'-AGAGGCTACGCATTGC-3'@5,-TCATGAGCGCATAGTT-3'（4）對PCR產(chǎn)物測序,經(jīng)分析得到了片段F的完整序列.下列DNA單鏈序列中（虛線處省略了部分核苗酸序列），結(jié)果正確的是.5'-AACTATGCG AGCCCTT-3"5'-AATTCCATG CTGAATT-3'5'-GCAATGCGT TCGGGAA-3'5'-TTGATACGC CGAGTAC-3'答案 （1）限制性核酸內(nèi)切（新教材為限制性內(nèi)切核酸）（或限制）核苜酸序列（2）磷酸二酯鍵DNA單鏈以DNA為模板的DNA鏈的延伸⑶②④（4）B考點(diǎn)2基因工程的應(yīng)用與蛋白質(zhì)工程該考點(diǎn)中基礎(chǔ)部分訓(xùn)練內(nèi)容為基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生、食品工業(yè)等方面的應(yīng)用以及蛋白質(zhì)工程等;重難、綜合部分為對轉(zhuǎn)基因生物或產(chǎn)品的生產(chǎn)流程的分析，考直考生運(yùn)用基因工程的相關(guān)知識(shí)分析相關(guān)事例時(shí)的理解與運(yùn)用能力,以及獲取信息并解決問題的能力.

基礎(chǔ)（2022蘇州期末,19）人參是一種名貴藥材,具有良好的滋補(bǔ)作用.干擾素在慢性乙肝、丙肝及部分腫瘤的治療中有一定療效。如圖為科研人員制備能合成干擾素的人參愈傷組織細(xì)胞的流程.①'④表示相關(guān)的操作,EcoRI、BamH1為限制酶，它們的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)如表所示.下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（多選）（）限制酶 識(shí)S!l序列及切割位點(diǎn)I

EcoRI

GAATTCIBamHI含干擾素基因的DNA片段EcoRIBamWITi含干擾素基因的DNA片段EcoRIBamWITi質(zhì)粒農(nóng)桿建EcoRI8amHI①?①?（*擴(kuò)增，干擾素EcoRIBamWI啟動(dòng)子人參愈傷組織細(xì)胞篩選］④生因嘉且A根瘤侵染.

標(biāo)記緊載縱③農(nóng)桿菌

基因入』止子檢測、

能合成干擾素的人參愈傷組織細(xì)胞篩選］④A.過程①所需的兩種引物中分別加上GAATTC和GGATCC序列，有利于后續(xù)操作B.構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),目的基因必須位于啟動(dòng)子和終止子之間才能進(jìn)行復(fù)制C.過程③利用的是T-DXA的特性將目的基因整合到受體細(xì)胞的染色體DNA中D.過程④需控制培養(yǎng)基中植物激素的種類和比例,以防止愈傷組織細(xì)胞發(fā)生再分化答案BC重難（2021遼寧,14,2分）睛水合酶岫）廣泛應(yīng)用于環(huán)境保護(hù)和醫(yī)藥原料生產(chǎn)等領(lǐng)域但不耐高溫利用蛋白質(zhì)工程技術(shù)在“的u和P亞基之間加入一段連接肽，可獲得熱穩(wěn)定的融合型睛水合酶（M）.下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.，與:氨基酸序列的差異是影響其熱穩(wěn)定性的原因之一B.加入連接肽需要通過改造基因?qū)崿F(xiàn)C.獲得N,的過程需要進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和翻譯D.檢測N,的活性時(shí)先將、與底物充分混合,再置于高溫環(huán)境答案D（2020浙江7月選考,24,2分）下列關(guān)于基因工程的敘述，正確的是（A.若受體大腸桿菌含有構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)用到的限制性核酸內(nèi)切酶（限制性內(nèi)切核酸酶），則一定有利于該重組質(zhì)粒進(jìn)入受體并保持結(jié)構(gòu)穩(wěn)定B.抗除草劑基因轉(zhuǎn)入某抗鹽植物獲得2個(gè)穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)基因品系,抗性鑒定為抗除草劑抗鹽和抗除草劑不抗鹽.表明一定是抗鹽性的改變與抗除草劑基因的轉(zhuǎn)入無關(guān)C.抗除草劑基因轉(zhuǎn)入某植物獲得轉(zhuǎn)基因植株,其DNA檢測均含目的基因,抗性鑒定為抗除草劑和不抗除草劑.表明一定是前者表達(dá)了抗性蛋白而后者只表達(dá)抗性基因RNAD.已知不同分子量DNA可分開成不同條帶,相同分子量的為一條帶.用某種限制性核酸內(nèi)切酶（限制性內(nèi)切核酸酶）完全酶切環(huán)狀質(zhì)粒后，出現(xiàn)3條帶.表明該質(zhì)粒上一定至少有3個(gè)被該醯切開的位置答案D（2021全國甲,38,15分）PCR技術(shù)可用于臨床的病原菌檢測。為檢測病人是否感染了某種病原菌,醫(yī)生進(jìn)行了相關(guān)操作：。汾析PCR擴(kuò)增結(jié)果;②從病人組織樣本中提取DNA;③^用PCR擴(kuò)增DNA片段;行集病人組織樣本.回答下列問題：（1）若要得到正確的檢測結(jié)果，正確的操作順序應(yīng)該是（用數(shù)字序號(hào)表示）.（2）操作③中使用的酶是.PCR中的每次循環(huán)可分為變性、復(fù)性、三步，其中復(fù)性的結(jié)果是（3）為了做出正確的診斷,PCR所用的引物應(yīng)該能與 特異性結(jié)合.PCR（多聚醐鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）技術(shù)是指.該技術(shù)目前被廣泛地應(yīng)用于疾病診斷等方面.答案 （1）④②③①（2）DNA聚合酶延伸引物通過堿基互補(bǔ)配對與單鏈DNA結(jié)合（3）病原菌DNA（4）在生物體外大量快速擴(kuò)增特定DNA片段的技術(shù)綜合（2022湖南,22,15分）水蛭是我國的傳統(tǒng)中藥材，主要藥理成分水蛭素為水姓蛋白中重要成分之一,具有良好的抗凝血作用.擬通過蛋白質(zhì)工程改造水蛭素結(jié)構(gòu),提高其抗凝血活性.回答下列問題：⑴蛋白質(zhì)工程流程如圖所示,物質(zhì)a是,物質(zhì)b是.在生產(chǎn)過程中,物質(zhì)b可能不同,合成的蛋白質(zhì)空間構(gòu)象卻相同,原因是—*---預(yù)期功能*---預(yù)期功能——?生物功能和利用PCR技術(shù)和利用PCR技術(shù)擴(kuò)增。PCR技術(shù)遵循的基本原理是（3）將提取的水蛭蛋白經(jīng)甲、乙兩種蛋白酶水解后，分析水解產(chǎn)物中的肽含量及其抗凝血活性，結(jié)果如圖所示.推測兩種處理后酶解產(chǎn)物的腱血活性差異主要與肽的（填“種類”或“含量”）有關(guān)，導(dǎo)致其活性不同的原因是酶解產(chǎn)物的腱血活性差異主要與肽的酶解時(shí)間（h）J-U/SS酶解時(shí)間（h）J-U/SS詡加W一胸甲處理。旃乙處理0 2 4 6 8 10酶解時(shí)間(h)（4）若要比較蛋白質(zhì)工程改造后的水蛭素、上述水蛭蛋白酶解產(chǎn)物和天然水蛭素的抗凝血活性差異，簡要寫出實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路.答案（D多肽鏈mRNAmRNA上決定氨基酸的密碼子具有簡并性（2）從基因文庫中獲取人工合成DNA半保留復(fù)制（3）種類醐處理后形成的肽中氨基酸的種類、數(shù)目和排列順序不同（4）在相同條件下，將蛋白質(zhì)工程改造后的水蛭素、水蛭蛋白酶解產(chǎn)物和天然水蛭素分別進(jìn)行抗凝血實(shí)驗(yàn),I：檄三組血液凝固所需時(shí)間長短，所需時(shí)間越長說明其抗凝血活性越大（2021廣東,22,12分）非細(xì)胞合成技術(shù)是一種運(yùn)用合成生物學(xué)方法,在細(xì)胞外構(gòu)建多酶催化體系，獲得目標(biāo)產(chǎn)物的新技術(shù)，其核心是各種酶基因的挖掘、表達(dá)等.中國科學(xué)家設(shè)計(jì)了4步酶促反應(yīng)的非細(xì)胞合成路線（如圖），可直接用淀粉生產(chǎn)肌醇（重要的醫(yī)藥食品原料），以期解決高溫強(qiáng)酸水解方法造成的嚴(yán)重污染問題,并可以提高產(chǎn)率.a-前聚

糖磷酸

闔化酶

磷酸鹽回答下列問題：（D研究人員采用PCR技術(shù)從土壤微生物基因組中擴(kuò)增得到目標(biāo)酶基因.此外,獲得酶基因的方法還有.（答出兩種即可）（2）高質(zhì)量的DNA模板是成功擴(kuò)增出目的基因的前提條件之一.在制備高質(zhì)量DNA模板時(shí)必須除去蛋白,方法有 .（答出兩種即可）

（3）研究人員使用大腸桿菌BL21作為受體細(xì)胞、pET20b為表達(dá)載體分別進(jìn)行4種酶的表達(dá).表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí),首先應(yīng)制備細(xì)胞.為了檢測目的基因是否成功表達(dá)出酶蛋白,需要采用的方法有.（4）依圖中所示流程，在一定的溫度、pH等條件下，將4種酶與可溶性淀粉溶液混合組成一個(gè)反應(yīng)體系.若這些酶最適反應(yīng)條件不同，可能導(dǎo)致的結(jié)果是.在分子水平上，可以通過改變,從而改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),實(shí)現(xiàn)對酶特性的改造和優(yōu)化.答案 （1）從基因文庫中獲取、用化學(xué)方法人工合成（2）蛋白酶水解法、鹽析法、高溫變性法（3）感受態(tài)抗原一抗體雜交（4）部分酶失活,無法獲得肌醇基因結(jié)構(gòu)（2021河北,24,15分）采礦污染和不當(dāng)使用化肥導(dǎo)致重金屬鎘（Cd）在土壤中過量積累。利用植物修復(fù)技術(shù)將土壤中的Cd富集到植物體內(nèi),進(jìn)行后續(xù)處理（例如，收集植物組織器官異地妥善儲(chǔ)存），可隔氐土壤中Cd的含量.為提高植物對Cd污染土壤的修復(fù)能力,研究者將酵母液泡Cd轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（YCF1）基因?qū)胧茉囍参?并檢測了相關(guān)指標(biāo)?；卮鹣铝袉栴}：（1）為獲取YCF1基因,將酵母細(xì)胞的全部DNA提取、切割后與載體連接,導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存,這個(gè)群體稱為.（2）將DNA序列插入Ti質(zhì)粒構(gòu)建重組載體時(shí)，所需要的兩種酶是.構(gòu)建的重組基因表達(dá)載體中必須含有標(biāo)記基因,其作用是（3）進(jìn)行前期研究時(shí),將含有YCF1基因的重組載體導(dǎo)入受試雙子葉植物印度芥菜,采用最多的方法是.研究者進(jìn)一步獲得了轉(zhuǎn)YCF1基因的不育楊樹株系,采用不育株系作為實(shí)驗(yàn)材料的目的是.（4）將長勢一致的野生型和轉(zhuǎn)基因楊樹苗移栽到Cd污染的土壤中,半年后測定植株干重（圖1）及不同器官中Cd含量（圖2）.據(jù)圖1可知,與野生型比,轉(zhuǎn)基因植株對Cd具有更強(qiáng)的（填“耐性”或“富集能力”）；據(jù)圖2可知,對轉(zhuǎn)基因植株的_進(jìn)行后續(xù)處理對于緩解土壤（：d污染最為方便有效.601②40-20-地匕部地下部整株口野生型口轉(zhuǎn)基因植株601②40-20-地匕部地下部整株（5）已知YCF1特異定位于轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞的液泡膜上.據(jù)此分析，轉(zhuǎn)基因楊樹比野生型能更好地適應(yīng)高Cd環(huán)境的原因是相較于草本植物,采用楊樹這種喬木作為Cd污染土壤修復(fù)植物的優(yōu)勢在于（寫出兩點(diǎn)即可）.答案（1）基因文庫（2）限制酶和DNA連接酶鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來（3）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法防止YCF1基因隨花粉擴(kuò)散,給生態(tài)系統(tǒng)帶來風(fēng)險(xiǎn)（4）耐性葉（5）轉(zhuǎn)基因楊樹液泡膜上的Cd轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白可將細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的Cd轉(zhuǎn)運(yùn)至液泡貯存，降低Cd對細(xì)胞代謝的影響喬木比草本生物量大,與外界物質(zhì)交換能力強(qiáng)[2021浙江6月選考,29（-）,7分]斑馬魚是一種模式動(dòng)物,體外受精發(fā)育,戚臺(tái)透明、便于觀察，可用于水質(zhì)監(jiān)測、基因功能分析以及藥物毒性與安全性評價(jià)等.（1）人類活動(dòng)產(chǎn)生的生活污水日益增多,大量未經(jīng)處理的污水直接排入河流、湖泊會(huì)引起水體,導(dǎo)致藻類大量繁殖形成水華.取水樣喂養(yǎng)斑馬魚，可用斑馬魚每周的體重和死亡率等指標(biāo)監(jiān)測水體污染程度。（2）為了研究某基因在斑馬魚血管發(fā)育過程中的分子調(diào)控機(jī)制,用DNA連接酶將該基因連接到質(zhì)粒載體形成,導(dǎo)入大腸桿菌菌株DH5a中.為了能夠連接上該目的基因、并有利于獲得含該目的基因的DH5。陽性細(xì)胞克隆，質(zhì)粒載體應(yīng)含有（答出2點(diǎn)即可）.提取質(zhì)粒后,采用法,將該基因?qū)氚唏R魚受精卵細(xì)胞中,培養(yǎng)并觀察轉(zhuǎn)基因斑馬魚胚胎血管的發(fā)育情況。（3）為了獲取大量斑馬魚胚胎細(xì)胞用于藥物篩選，可用分散斑馬魚囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，取分散細(xì)胞作為初始材料進(jìn)行一培養(yǎng).培養(yǎng)瓶中添加成纖維細(xì)胞作為，以提高斑馬魚胚胎細(xì)胞克隆的形成率.答案 （1）富營養(yǎng)化（2）重組DNA分子限制性核酸內(nèi)切酶（限制性內(nèi)切核酸酶）的識(shí)別序列、抗生素抗性基因顯微注射（3）胰蛋白酶原代飼養(yǎng)層細(xì)胞考點(diǎn)3生物技術(shù)的安全性及DNA的粗提取與鑒定該考點(diǎn)中基礎(chǔ)部分訓(xùn)練內(nèi)容主要為DNA的粗提取與鑒定;重難、綜合部分訓(xùn)練內(nèi)容主要為對DNA的粗提取與鑒定的深入考查及對生物產(chǎn)品引發(fā)安全性問題的思考.基礎(chǔ)（2022南通如皋一模.8）下列有關(guān)“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述,正確的是（）A.植物材料需先用洗滌劑破壞細(xì)胞壁再吸水破裂，釋放DNAB.在新鮮雞血中加入適量的檸檬酸鈉,混合均勻后離心取上清液C.在含有DNA的2mol/L的氯化鈉溶液中加入蒸儲(chǔ)水,攪拌出現(xiàn)絲狀物后停止加水D.鑒定DNA時(shí),將絲狀物溶解于2mol/L的NaCl溶液中,再加入二苯胺試劑進(jìn)行沸水浴答案D（2021山東,13,2分）粗提取DNA時(shí)，向雞血細(xì)胞液中加入一定量的蒸儲(chǔ)水并攪拌,過濾后所得濾液進(jìn)行下列處理后再進(jìn)行過濾,在得到的濾液中加入特定試劑后容易提取出DNA相對含量較高的白色絲狀物的處理方式是（）A.加入適量的木瓜蛋白醒37'40C的水浴箱中保溫1015分鐘C.加入與濾液體積相等的、體積分?jǐn)?shù)為95舟的冷卻的酒精D.加入NaCl調(diào)節(jié)濃度至2mol/Lf過濾一調(diào)節(jié)濾液中NaCl濃度至0.14mol/L答案A重難（2022無錫期末,II）我國科研人員在實(shí)驗(yàn)室中通過構(gòu)建多種酶催化體系的方法,首次實(shí)現(xiàn)了在細(xì)胞外從二氧化碳固定到合成淀粉的過程.下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.可采用PCR技術(shù)從不同物種的基因組中擴(kuò)增得到多酶催化體系中的目標(biāo)酶基因B.在多酶催化體系中,可能會(huì)因?yàn)槊傅淖钸m反應(yīng)條件不同而使反應(yīng)中斷C.該方法可在分子水平上直接改變氨基酸的序列,實(shí)現(xiàn)對酶特性的改造和優(yōu)化D.若該科研成果成熟后推廣應(yīng)用,有助于擺脫耕順口自然環(huán)境限制,解決糧食危機(jī)答案C（2021南京、鹽城一模,13）下列有關(guān)“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是（）A.用蒸儲(chǔ)水使家兔成熟的紅細(xì)胞破裂,可獲取富含DNA的濾液B.植物材料需先用洗滌劑破壞細(xì)胞壁再吸水破裂，釋放DXADNA不溶于體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精，但可溶于2mol/L的NaCl溶液D.鑒定DNA時(shí),應(yīng)將絲狀物直接加到二苯胺試劑中并進(jìn)行沸水浴答案C綜合（2021北京,14,2分）社會(huì)上流傳著一些與生物有關(guān)的說法,有些有一定的科學(xué)依據(jù),有些違反生物學(xué)原理。以下說法中有科學(xué)依據(jù)的是（）A.長時(shí)間燉煮會(huì)破壞食物中的一些維生素B.轉(zhuǎn)基因抗蟲棉能殺死害蟲就一定對人有毒C.消毒液能殺菌,可用來清除人體內(nèi)新冠病毒D.如果孩子的血型和父母都不一樣,肯定不是親生的答案A（2022南通質(zhì)檢一,18）某科研團(tuán)隊(duì)運(yùn)用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù),進(jìn)行了基因編輯活動(dòng)。該技術(shù)的原理是通過設(shè)計(jì)向?qū)NA中的識(shí)別序列,引導(dǎo)核酸酶Cas9到一個(gè)特定的基因位點(diǎn)進(jìn)行切割（如圖）.下列有關(guān)敘述正確的是（多選）（）

(X鏈Cas9蛋白目標(biāo)(X鏈1n111□if1111識(shí)別序列 ：1撲向?qū)NA■■ .mt-目標(biāo)DNAA.向?qū)NA可在RNA聚合酶催化下,以核糖核甘酸為原料合成B.向?qū)NA中的識(shí)別序列可與目標(biāo)DNA單鏈特定區(qū)域進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對C.Cas9蛋白的作用是破壞DNA特定位點(diǎn)脫氧核甘酸之間的氫鍵D.該技術(shù)由于存在脫靶等風(fēng)險(xiǎn),可能會(huì)帶來一系列安全及倫理問題答案ABD（2021南通如皋期末,17）為了提取棉花葉綠體DNA,研究人員的下列做法，正確的是（多選）（）A.選取葉肉細(xì)胞作為提取葉綠體DNA的實(shí)驗(yàn)材料將細(xì)胞置于蒸儲(chǔ)水中,可以使細(xì)胞吸水破裂釋放葉綠體C.采用差速離心法去除核物質(zhì)時(shí),轉(zhuǎn)速小于獲得葉綠體的轉(zhuǎn)速D.整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程置于低溫條件下，可以防止DNA的降解答案ACD題型模板模型一限制酶的選擇典型模型模型限制險(xiǎn)選擇的基本原則模型特征:基因工程的試題往往會(huì)考查限制酶的選擇,做題時(shí)要結(jié)合目的基因和質(zhì)粒綜合考慮選擇哪些限制酶.（2021遼寧,24節(jié)選,3分）PHB2蛋白具有抑制細(xì)胞增殖的作用。為初步探究某動(dòng)物PHB2蛋白抑制人宮頸癌細(xì)胞增殖的原因，研究者從基因數(shù)據(jù)庫中獲取了該蛋白的基因編碼序列（簡稱Phb2基因），大小為0.9kb（1kb=l000堿基對），利用大腸桿菌表達(dá)該蛋白?；卮鹣铝袉栴}：圖1為所用載體圖譜示意圖,圖中限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)見表.為使Phb2基因（該基因序列不含圖1中限制酶的識(shí)別序列）與載體正確連接,在擴(kuò)增的Phb2基因兩端分別引入和兩種不同限制酶的識(shí)別序列.經(jīng)過這兩種酶酶切的phb2基因和載體進(jìn)行連接時(shí),可選用（填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）.

相關(guān)限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)名稱識(shí)別序列及切割位點(diǎn)名稱識(shí)別序列及切割位點(diǎn)Hind111AgcttTTCGAA4EcoRIgAattcCTTAAG4PvunCACtTCGTCGAC4Pst1ctgAcGACCTCKpnI而ACCCCATGG?HamW1CGATCCCCTACG注:箭頭表示切割位點(diǎn)圖1圖1答案Pvu11EcoRIT4DNA連接酶（2022浙江百校聯(lián)盟聯(lián)考,37節(jié)選）鈣依賴蛋白激酶（CDPK）在植物的信號(hào)傳導(dǎo)和提高植物抗性方面發(fā)揮著重要作用?？茖W(xué)家通過將CDPK基因?qū)霐M南芥（雙子葉植物）中,來獲得具有抗性的新品種。如圖為某種質(zhì)粒表達(dá)載體和含CDPK基因的DNA片段示意圖,圖中標(biāo)記了限制酶的切割位點(diǎn).據(jù)此回答下列問題：卡那霉素抗性基因SmaIEcoRIHindHIXbaICDPK基因通過基因工程，將CDPK基因?qū)霐M南芥中，獲得具有抗性的新品種的育種原理是.為了使CDPK基因插入質(zhì)粒中,應(yīng)選?。▋煞N限制酶）分別切割質(zhì)粒和含目的基因的DNA片段,不選取另兩種限制酶的理由.答案 基因重組SmaI和XbaIHindIH可切斷目的基因（CDPK基因），EcoRI可切斷標(biāo)記基因（卡那霉素抗性基因）變式模型變式特殊情況下的限制能選擇模型特征:在某些特殊情況下,如載體^口目的基因上的限制酶不同時(shí)，可以考慮選擇同尾酶(識(shí)別序列不同但切出的DNA片段具有相同的黏性末端)；質(zhì)粒和目的基因都能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄,且轉(zhuǎn)錄方向是確定的,在將目的基因插入質(zhì)粒時(shí)，要考慮選擇哪種限制酶才能使二者的轉(zhuǎn)錄方向一致。(2021山東,25,12分)人類丫基因啟動(dòng)子上游的調(diào)控序列中含有BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)，該位點(diǎn)結(jié)合BCLUA蛋白后，丫基因的表達(dá)被抑制。通過改變該結(jié)合位點(diǎn)的序列，解除對Y基因表達(dá)的抑制，可對某種地中海貧血癥進(jìn)行基因治療.科研人員擴(kuò)增了Y基因上游不同長度的片段,將這些片段分別插入表達(dá)載體中進(jìn)行轉(zhuǎn)化?口熒光檢測,以確定BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)的具體位置.相關(guān)信息如圖所示.調(diào)控序列及啟動(dòng)子 Ry基因—L;MHF2J［污Mun1初燃部終止子熒光蛋白基因P基因-I ,CWNhe\EroRIMunIEcnHIXhoI終止子注：F1~F7、R:引物P:雌激索誘導(dǎo)下發(fā)揮作用的啟動(dòng)子限制酶識(shí)別序列及切割位點(diǎn)：MunI：CAATTGI iXhoI：CTCCAGEcoRI:CAATTC

i ISalI：GTCGACNheI：GCTAGC(1)為將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入載體指導(dǎo)熒光蛋白基因表達(dá),需在引物末端添加限制酶識(shí)別序列。據(jù)圖可知,在n'F7末端添加的序列所對應(yīng)的限制酶是,在R末端添加的序列所對應(yīng)的限制酶是.本實(shí)驗(yàn)中,從產(chǎn)物擴(kuò)增到載體構(gòu)建完成的整個(gè)過程共需要種酶。(2)將構(gòu)建的載體導(dǎo)入除去BCL11A基因的受體細(xì)胞,成功轉(zhuǎn)化后,含F(xiàn)rF6與R擴(kuò)增產(chǎn)物的載體表達(dá)熒光蛋白，受體細(xì)胞有熒光,含F(xiàn)7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光.含F(xiàn)7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光的原因是.(3)向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素,含F(xiàn)1~F4與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞不再有熒光,而含F(xiàn)5“F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞仍有熒光.若Y基因上游調(diào)控序列上與引物序列所對應(yīng)的位置不含有BCL11A蛋白的結(jié)合位點(diǎn)序列，據(jù)此結(jié)果可推測,BCLUA蛋白結(jié)合位點(diǎn)位于,理由是—答案(l)SalIEcoRI6(2)F7與R擴(kuò)增產(chǎn)物不含完整的啟動(dòng)子，熒光蛋白基因不表達(dá)(3)引物F4與F5在調(diào)控序列上所對應(yīng)序列之間的區(qū)段上根據(jù)有無熒光情況判斷,Fl'F4與R擴(kuò)增產(chǎn)物上均有結(jié)合位點(diǎn),因此結(jié)合位點(diǎn)位于F4所對應(yīng)調(diào)控序列的下游（右側(cè)）；F5'F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物上均無結(jié)合位點(diǎn)，可知結(jié)合位點(diǎn)位于F5所對應(yīng)調(diào)控序列的上游（左側(cè)），所以結(jié)合位點(diǎn)位于引物F4與F5在調(diào)控序列上所對應(yīng)序列之間的區(qū)段上模型二PCR技術(shù)及應(yīng)用典型模型模型PCR技術(shù)模型特征:基因工程中,PCR技術(shù)是獲取和擴(kuò)增目的基因的重要手段,PCR技術(shù)的條件、步驟及結(jié)果是最常見的命題落腳點(diǎn).（2022南通如皋中學(xué)階段考,19）農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA可以轉(zhuǎn)移并隨機(jī)插入被侵染植物的染色體DNA上.研究者將如圖中被侵染植物的DNA片段連接成環(huán),并以此環(huán)為模板,利用PCK技術(shù)擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列,以此可確定T-DNA插入的具體位置.下列說法正確的是（多選）（）,未了序列引鄴I）T-yNA引蟀未”序列'限制酶切點(diǎn)漏③引蕩④限制酶切點(diǎn)

注：子鏈從引物的3,端開始延伸A.進(jìn)行PCR擴(kuò)增的依據(jù)是DNA分子雙鏈復(fù)制的原理B.進(jìn)行PCR擴(kuò)增需要的酶有解旋酶和熱穩(wěn)定的DNA聚合酶C.利用圖中的引物②、③組合可擴(kuò)增出兩側(cè)的未知序列D.通過與受體細(xì)胞的基因組序列比對,可確定T-DNA的插入位置答案AD（2022山東濟(jì)南十一校聯(lián)考,15）為減少引物與模板之間的非特異性配對，人們在常規(guī)PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良,發(fā)明了巢式PCR技術(shù).其原理是利用兩套PCR引物進(jìn)行兩輪PCR擴(kuò)增,首先利用第一對引物（外引物）對目的基因所在DNA進(jìn)行15~30個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增;第二輪擴(kuò)增以第一輪擴(kuò)增產(chǎn)物為模板,利用第二對引物（內(nèi)引物或巢式引物）進(jìn)行15'30個(gè)循環(huán)的擴(kuò)增，具體過程如圖所示.下列敘述錯(cuò)誤的是（）目的基因TOC\o"1-5"\h\z\o"CurrentDocument"=> ， A S模板DNA使用外引物進(jìn)行 *==第一次PCR擴(kuò)增=>中間產(chǎn)物

使用內(nèi)引物進(jìn)行 ?第二次PCR擴(kuò)增目標(biāo)產(chǎn)物 ‘ 'A.巢式PCR中加入的組分與常規(guī)PCR相同，但擴(kuò)增產(chǎn)物比常規(guī)PCR特異性更強(qiáng)

B.兩套引物需進(jìn)行兩次PCR,由于和兩套引物都互補(bǔ)的靶序列較少,因此大大提高了擴(kuò)增的特異性C.內(nèi)引物擴(kuò)增的模板是外引物擴(kuò)增后的產(chǎn)物,第二階段反應(yīng)能否進(jìn)行,也是對第一階段反應(yīng)正確性的鑒定D.如果第一次擴(kuò)增產(chǎn)生了錯(cuò)誤片斷,則第二次能在錯(cuò)誤片段上進(jìn)行引物配對并擴(kuò)增的概率將會(huì)增加答案D變式模型變式1定點(diǎn)突變技術(shù)模型特征:定點(diǎn)突變是指通過PCR等方法向目的DNA片段中引入所需變化，包括堿基的添加、刪除、點(diǎn)突變等.常用的技術(shù)手段有重疊延伸PCR技術(shù).大引物PCR技術(shù)等.（2022江蘇百校聯(lián)考.18）重疊延伸PCR技術(shù)是一種通過寡聚核甘酸鏈之間重疊的部分互相搭橋、互為模板，經(jīng)過多次PCR擴(kuò)增，獲得目的基因的方法。該技術(shù)在擴(kuò)增較長片段的DNA、不同來源的DNA片段拼接、基因的定點(diǎn)誘變等方面具有廣泛的應(yīng)用前景,如圖表示利用重疊延伸PCR技術(shù)擴(kuò)增某目的基因的過程.下列敘述正確的是（多選）（）引物1引物3引物2引物1引物2引物1二目的基因11引物2引物1引物2引物1二目的基因11?I施4第二階段第三階段弓您!!!i加弓弓弓,3根弓I引物4目的基因A.引物中G+C的含量越高,引物與模板DNA結(jié)合的穩(wěn)定性越高B.在第一階段由于引物2和引物3發(fā)生堿基互補(bǔ)配對,因此兩者置于不同反應(yīng)系統(tǒng)中C.引物1、2組成的反應(yīng)系統(tǒng)和引物3、4組成的反應(yīng)系統(tǒng)中均進(jìn)行一次復(fù)制后,共產(chǎn)生4種雙鏈DNA分子D.在引物1、2組成的反應(yīng)系統(tǒng)中,經(jīng)第一階段要形成圖示雙鏈DNA,至少要經(jīng)過3次復(fù)制答案AB變式2熒光定量PCR技術(shù)模型特征:熒光定量PCR技術(shù)是指在PCR體系中每加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)與某條模板鏈互補(bǔ)的熒光探針,當(dāng)耐高溫的DNA聚合酶催化子鏈延伸至探針處時(shí),會(huì)水解探針,使熒光監(jiān)測系統(tǒng)接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一次，就有一個(gè)熒光分子生成.（2022湖北應(yīng)城一高一模,15）熒光定量PCR技術(shù)可定量檢測樣本中某種DNA含量,其原理是在PCR體系中每加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)與某條模板鏈互補(bǔ)的熒光探針,當(dāng)耐高溫的DNA聚合酶催化子鏈延伸至探針處時(shí),會(huì)水解探針，使熒光監(jiān)測系統(tǒng)接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一次,就有一個(gè)熒光分子生成,過程如圖所示.下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.引物與探針均具特異性,與模板結(jié)合時(shí)遵循堿基互補(bǔ)配對原則B.反應(yīng)最終的熒光強(qiáng)度與起始狀態(tài)模板DNA含量呈正相關(guān)C.若用cDXA作模板,上述技術(shù)也可檢測某基因的轉(zhuǎn)錄水平D.耐高溫的DNA聚合前催化DNA的合成總是從子鏈的3'端向5'端延伸的答案D情境應(yīng)用簡單情境.靶向基因敲除技術(shù)（2022南京三模，13）如圖是一種靶向基因敲除技術(shù)即TALEN技術(shù).該技術(shù)的敲除工具是由DNA識(shí)別域TALE和非特異性內(nèi)切核酸酶FoKI兩個(gè)部分組成的蛋白質(zhì).TALE的二連氨基酸（字母義I、G、H、D分別代表一種氨基酸）與四種堿基（A、G、C、T）有恒定的對應(yīng)關(guān)系.FoKI是一種形成二聚體后具有內(nèi)切核酸酶活性的蛋白單體.下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）TAIE蛋白左臂TALE看白右臂A.單獨(dú)使用FoKI對基因的切割敲除具有隨機(jī)性B.TALE蛋白的合成通常涉及PCR技術(shù)和蛋白質(zhì)工程C.二連氨基酸能與四種含氮堿基發(fā)生恒定的堿基互補(bǔ)配對D.TALE蛋白左右臂的二連氨基酸序列的設(shè)計(jì)依據(jù)靶基因堿基序列答案C2.甲醇酵母菌（2022揚(yáng)州中學(xué)3月月考.13）甲醇酵母菌是基因工程中常用的受體菌,它可以高效表達(dá)外源蛋白,但自身蛋白分泌到培養(yǎng)基的較少。研究人員將人的膠原蛋白基因?qū)爰状冀湍钢胁⒊晒Ρ磉_(dá).下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）A.用兩種酶切割目的基因和質(zhì)粒,可防止目的基因反向連接和質(zhì)粒的自身環(huán)化B.常用顯微注射法將膠原蛋白基因?qū)爰状冀湍钢蠧.與大腸桿菌相比，甲醇酵母作受體菌所表達(dá)出的膠原蛋白與人體產(chǎn)生的膠原蛋白結(jié)構(gòu)更相近D.與其他酵母菌相比,甲醇酵母作受體菌便于表達(dá)出的膠原蛋白的分離與純化答案B復(fù)雜情境3.Cre/loxP重組酶系統(tǒng)(2022泰州泰興中學(xué)4月考,24)Cre/loxP重組酶系統(tǒng)是對轉(zhuǎn)基因受體細(xì)胞DNA上的特定序列進(jìn)行定點(diǎn)切割和重新連接,從而在基因或染色體水平上對生物基因進(jìn)行遺傳改造的一種技術(shù).請回答下列問題：.②—5'—ATAACITCGTATA—ATCTATGCTATACCAMTITATT3'—TATTCAAfXATAT—TACATACC-ATATCCTTCAATA—5圖1待敲除解P篡國loxP 片段1字黑；圖2⑴loxP具有方向性，結(jié)構(gòu)如圖1所示,其中決定方向的序列是(填序號(hào)).(2)Cre酶能催化如圖2所示的反應(yīng),隨機(jī)識(shí)別DNA分子上同向排列的兩個(gè)相同的loxP序列,并在圖1的②中特定位點(diǎn)切斷DNA雙鏈,切口被重新連接后,保留片段,從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因的敲除。若經(jīng)Cr<<酶作用使得兩個(gè)loxP位點(diǎn)間的序列發(fā)生反轉(zhuǎn),順因可能是.(3)Cre/loxP重組酶系統(tǒng)可以調(diào)控基因的表達(dá)，在目的基因(填“上游”或“下游”)插入一個(gè)帶有l(wèi)oxP位點(diǎn)的編碼終止密碼子的序列，在Cre酶存在的情況下,目的基因(填“表達(dá)”或“不表達(dá)”).(4)抗蟲煙草的制備過程中,通常用法將重組質(zhì)粒導(dǎo)入煙草細(xì)胞，導(dǎo)入成功后,標(biāo)記基因如抗除草劑基因可用Cre/loxP重組酶系統(tǒng)將其,其繼續(xù)留在煙草體內(nèi)可能會(huì)將抗除草劑基因轉(zhuǎn)移到雜草中,造成基因污染.(5)GUS基因編碼的酶可將無色底物生成藍(lán)色產(chǎn)物,GFP基因會(huì)產(chǎn)生綠色熒光蛋白,配合Cre/loxP重組酶系統(tǒng)來研究發(fā)育生物學(xué)的問題.圖3

①構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，可用酶將loxP序列、GUS基因及GFP基因連接,接上35S啟動(dòng)子之后可在組織中檢測出藍(lán)色區(qū)而無綠色熒光區(qū)（如圖3所示），這是由于基因自身無啟動(dòng)子而無法表達(dá)。②Cre基因經(jīng)38°C熱處理后可被激活表達(dá),在此前提下組織中可檢測出綠色熒光區(qū),據(jù)此分析綠色熒光區(qū)形成的原因是，采用等手段可以擴(kuò)大組織中綠色熒光區(qū)的面積。答案 （1）②（2）2兩個(gè)loxP序列方向相反（3）上游表達(dá)（4）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化敲除（5）①限制酶和DM連接GFP②Cre酶能（特異性識(shí)別并）切割loxP序列，使GFP基因得以表達(dá)延長熱處理時(shí)間4.實(shí)時(shí)熒光RT-PCR技術(shù)（2022江蘇新高考基地4月聯(lián)考,6）實(shí)時(shí)熒光RT-PCR技術(shù)（RT-qPCR）利用熒光標(biāo)記探針對擴(kuò)增產(chǎn)物量進(jìn)行實(shí)時(shí)跟蹤,再根據(jù)擴(kuò)增曲線計(jì)算出起始模板量,即樣本病毒載量。如圖是利用RT-qPCR進(jìn)行新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）載量測定的主要過程.請據(jù)圖回答:樣本采集及

病毒滅活處理步驟1:病毒RNA提取wll熒學(xué)測/步驟1:病毒RNA提取wll熒學(xué)測/

白陶K、RNA、|/丹中./

酶抑制劑）-R-友中-熒九zIs-?步驟2：病毒eDNA合成 3,病毒RNA②酶N、引物、,$，tdNTP等延伸［如引物MRNA-DNA酶X、引物,③<INTP,熒光探針等步驟3：qPCH雜交分子（1）過程①中,RNA提取裂解液可同時(shí)滅活病毒,原因是.采集到的樣本要迅速進(jìn)行病毒滅活處理,其目的是.RNA酶抑制劑的作用是.（2）過程②中,加入的酶N是.根據(jù)圖示，保證病毒核酸檢測準(zhǔn)確的關(guān)鍵是,（3）在進(jìn)行新冠病毒核酸檢測時(shí),通常以病毒的ORF1ab基因?yàn)闄z測的目標(biāo)基因,是因?yàn)镺RFlab基因具有的特點(diǎn).檢測試劑中還加有“陽性對照”和“陰性對照”，陰性對照的主要作用是<（4）如表是SARS-CoV-2核酸檢測時(shí)PCR儀參數(shù)設(shè)定要求:步驟)0時(shí)間循環(huán)a.病毒cDNA合成50C15min1b.預(yù)變性95'C5min1C.變性95C5sd.?60,C40s45①步驟a的反應(yīng)時(shí)間要足夠長，其目的是.②步驟d主要包括PCR過程的階段.⑸臨床上，將癥狀及影像學(xué)結(jié)果高度疑似、核酸多次檢測為“陰性”的現(xiàn)象稱為檢測結(jié)果“假陰性”，導(dǎo)致“假陰性”結(jié)果可能是由于（填序號(hào)）①檢測者處于感染初期②檢測者感染時(shí)間較長③樣本采集位置不規(guī)范④樣品稀釋度不足⑤病毒出現(xiàn)變異答案（1）蛋白酶K能催化病毒蛋白質(zhì)水解提高樣本轉(zhuǎn)運(yùn)和檢測階段的安全性防止樣本RNA水解,影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性（2）逆轉(zhuǎn)錄酶設(shè)