手性藥物高效液相色譜拆分課件

手性藥物高效液相拆分法

手性藥物的高效液相色譜拆分方法包括薄層色譜、氣相色譜、液相色譜、超臨界流體色譜和電泳在內(nèi)的幾乎所有色譜和準(zhǔn)色譜手段都已應(yīng)用于對映體拆分。一般分為間接法與直接法。直接法手性試劑衍生化法(CDF)間接法手性固定相(CSP)拆分法手性流動相(CMP)拆分法CSP種類作用機(jī)理應(yīng)用Pirkle型CSP通過含末端羧基或異氰酸酯基手性前體與氨基鍵合硅膠進(jìn)行縮合反應(yīng)，分別形成含酰胺或脲型結(jié)構(gòu)CSP氨基酸、乙內(nèi)酰脲、內(nèi)酰脲、胺類、醇類及硫醇類藥物對映體拆分環(huán)糊精CSP環(huán)糊精的手性識別主要來自環(huán)內(nèi)腔對芳烴或脂肪烴類側(cè)鏈的包容作用，以及環(huán)外殼上的羥基與藥物對映體分子發(fā)生氫鍵作用β一環(huán)糊精：適用于大多數(shù)藥物α一環(huán)糊精：適用于相對分子質(zhì)量小于200的藥物γ一環(huán)糊精：適用于較大相對分子質(zhì)量藥物多糖類CSP主要來自氨基甲酸酯或酯的部位與被拆分物之間形成氫鍵或偶極～偶極作用，或通過被拆分物分子進(jìn)入纖維索網(wǎng)狀腔，導(dǎo)致腔內(nèi)立體環(huán)境的改變而實(shí)現(xiàn)主要用于分離巴比妥類藥物、麻醉藥和抗抑郁藥等蛋白質(zhì)CSP可識別藥物對映體在蛋白質(zhì)的結(jié)合位點(diǎn)而達(dá)到手性分離可直接分離許多藥物，如硫噴妥因、心得怡及阻滯劑等

優(yōu)點(diǎn)：分離時(shí)間短，而手性選擇性和拆分能力高，多數(shù)藥物在分離前都不需要進(jìn)行衍生化反應(yīng)，分離方法直接。

局限性：色譜柱價(jià)格昂貴，部分固定相還存在穩(wěn)定性差，柱容量低，柱強(qiáng)度差等缺點(diǎn)，且根據(jù)不同手性藥物的性質(zhì)不同，選用的分析方法也不同。

CSP法優(yōu)缺點(diǎn)手性流動相(CMP)拆分法

又稱手性添加劑法，這種拆分法是在流動相中加入手性試劑，利用手性試劑與各對映體結(jié)合的穩(wěn)定常數(shù)不同，以及藥物與結(jié)合物在固定相上分配系數(shù)的不同來進(jìn)行分離。優(yōu)點(diǎn)：此法不需昂貴的手性柱，亦無須進(jìn)行柱前衍生，手性添加劑可視要求而更換，使用比較方便。其中主要應(yīng)用的有：配體交換型手性添加劑、環(huán)糊精添加劑、手性離子對添加劑。

手性試劑衍生化法(CDF)

該法是藥物對映體在分離前與高光學(xué)純度衍生化試劑(CDA)反應(yīng)，形成非對映體，再進(jìn)行色譜分離測定。

該法要求手性試劑及反應(yīng)產(chǎn)物在化學(xué)性質(zhì)上和手性上很穩(wěn)定，在反應(yīng)及色譜條件下，試劑、手性藥物和反應(yīng)產(chǎn)物不發(fā)生消旋化反應(yīng)。手性試劑應(yīng)具有紫外或熒光吸收等敏感結(jié)構(gòu)，使生成物具有良好的可檢測性。

優(yōu)點(diǎn)：可使用已有的非手性同定相，花費(fèi)少，通過選用具有強(qiáng)烈紫外吸收或熒光吸收的手性試劑，可提高檢測敏感度，而且多數(shù)的衍生化試劑具有良好的對熱及水的穩(wěn)定性。

局限性：是手性試劑需要有高的光學(xué)純度，各對映體的衍生化速率及平衡常數(shù)應(yīng)一致，要求衍生化反應(yīng)迅速、徹底，否則影響定量結(jié)果。衍生化和色譜分析過程中應(yīng)不發(fā)生消旋化，外消旋藥物需要有可被衍生化的基團(tuán)，此外衍生化法步驟較煩瑣，衍生化試劑絕大多數(shù)毒性相當(dāng)大，而且該方法難以實(shí)現(xiàn)分析的自動化。

CDF法優(yōu)缺點(diǎn)藥物撲爾敏溶解在流動相溶劑中，配制的濃度為3.2mg／mL。撲爾敏的結(jié)構(gòu)示意圖1所示。結(jié)果表明：

此柱在分離藥物撲爾敏時(shí)，隨著進(jìn)樣量的增大，此柱有些過載，分離效果不佳。一般來說，在分離物進(jìn)樣過載的情況下，樣品的分離效果較差，隨著進(jìn)樣量的降低，樣品的分離更充分。這是因?yàn)槭中苑蛛x是一個(gè)吸附和分配的過程，在進(jìn)樣量過載的情況下，沒有足夠的手性基團(tuán)與分離物進(jìn)行作用，因而對映體的分離就不充分。雷諾嗪的拆分色譜柱：150mm×4.6mm，用纖維素—三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)濕法裝柱。色譜條件：以純甲醇作流動相，流速為1mL／min，紫外檢測波長為254nm。分離效果：雷諾嗪對映體獲得比較好的拆分效果，分離度達(dá)到1.579，保留時(shí)間也比較短，7min內(nèi)即可拆分完畢。隨著流速的下降，分離度逐漸升高。

通過控制流速、流動相等方法對雷諾嗪的拆分進(jìn)行了下述研究。通過雖然上法雷諾嗪得到非常好的拆分，但是拆分時(shí)間過短，容量因子k太小(k<1)，且無法根據(jù)需要調(diào)節(jié)。于是考察醇類系統(tǒng)對雷諾嗪的手性分離的影響。